四種嬰幼兒濕疹外用方劑對(duì)小鼠急性濕疹的影響

吳白芬 尚李 尚怡 彭海燕 劉錄 何芳雁 周志宏 浦仕彪

【摘 要】 目的：研究4種嬰幼兒濕疹外用方劑對(duì)急性濕疹模型小鼠的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：采用2，4二硝基氟苯（DNFB）誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)及特異性皮炎模型，給予不同濃度的4種外用方劑觀察藥物治療作用。結(jié)果：模型組小鼠耳腫脹度、脾臟系數(shù)及皮膚損傷程度均明顯高于正常對(duì)照組;各給藥組連續(xù)局部涂藥7d，均可明顯抑制DNFB誘導(dǎo)小鼠的耳腫脹，明顯降低脾臟系數(shù)，不同程度抑制胸腺系數(shù)，并對(duì)皮膚損傷組織有一定修復(fù)作用。結(jié)論：4種外用方劑均能明顯抑制DNFB誘發(fā)小鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，并對(duì)特異性皮炎（急性濕疹）具有一定防治作用。

【關(guān)鍵詞】 外用方劑;嬰兒濕疹;變態(tài)反應(yīng);特異性皮炎

【中圖分類號(hào)】R285.6 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2022）08-0022-05

Effects of Four External Infantile Eczema Prescriptions on Acute Eczema in Mice

WU Baifen1，2 SHANG Li1 SHANG Yi1 PENG Haiyan1 LIU Lu1 HE Fangyan1 ZHOU Zhihong1 PU Shibiao1*

1.Yunnan University of Chinese Medicine Engineering Research Center of Decoction

Pieces of Traditional/ Ynnan University of Chinese Medicine，Kunming 650500，China;

2.Yunnan University of business management， Kunming 650106，China

Abstract：

Objective The effects of four external infantile eczema prescriptions on acute eczema model mice were studied to provide experimental basis for clinical application.Methods The model of delayed hypersensitivity and specific dermatitis induced by 2，4-dinitrofluorobenzene （DNFB） in mice was used to observe the therapeutic effect of four external prescriptions with different concentrations.Results The degree of ear swelling， spleen coefficient and skin damage in the model group were significantly higher than those in the normal control group. Each administration group was continuously applied locally for 7 days， which could significantly inhibit the ear swelling of mice induced by DNFB， significantly reduce the spleen coefficient， inhibit the thymus coefficient to varying degrees， and have a certain repair effect on the damaged skin tissue.Conclusion Four external prescriptions can significantly inhibit the delayed type hypersensitivity induced by DNFB in mice， and have a certain preventive effect on specific dermatitis （acute eczema）.

Key words：

External Prescription; Lnfant Eczema; Allergic Reaction;Specific Dermatitis

嬰幼兒濕疹又稱為特應(yīng)性皮炎，是常見病、多發(fā)病，有研究[1]表明新生兒期至3歲是嬰幼兒濕疹的高發(fā)期。嬰兒濕疹確切病因尚不清楚，一般認(rèn)為是由內(nèi)、外因素共同作用而引發(fā)的變態(tài)反應(yīng)性皮膚疾病，主要與遺傳、感染、環(huán)境、飲食、皮膚屏障功能破壞及機(jī)體免疫功能失調(diào)等因素相關(guān)，嬰兒期免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟也是重要的發(fā)病因素[2]。中醫(yī)對(duì)濕疹的外治法是根據(jù)皮損的性質(zhì)和發(fā)病部位的不同，選擇適當(dāng)?shù)乃幬锖蛣┬停M(jìn)行外洗、濕敷、涂抹、噴霧、熏洗或坐浴的方法，具有療效好、作用直接、療程短、副反應(yīng)小的優(yōu)勢(shì)[3]，可緩解臨床癥狀，有效改善皮損，避免了外用激素的不良反應(yīng)，并在一定程度上可控制疾病復(fù)發(fā)，故越來越受到重視。本文采用DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)及特異性皮炎模型，考察4種云南某中醫(yī)館處方、民族民間驗(yàn)方及自擬外用方劑對(duì)嬰幼兒濕疹的影響，以期為臨床應(yīng)用及進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性ICR小鼠，5～8周齡，體重18～26g，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，SCXK（川）2015-030。

1.2 試劑 2，4-二硝基氟苯（DNFB，批號(hào)：F20120726，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）;橄欖油（批號(hào)：20160912，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;丙酮（批號(hào)：20160626，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05

1.3 受試藥品 皮炎平（復(fù)方醋酸地塞米松乳膏，批號(hào)：1706004H，華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司）;兒膚康搽劑（批號(hào)：170807，成都森科制藥有限公司）。方劑1（1#）由顯齒蛇葡萄、桑白皮及三七組成。方劑2（2#）由顯齒蛇葡萄、桑白皮及全蝎組成。方劑3（3#）由白鮮皮、紫草及全蝎組成。方劑4（4#）由顯齒蛇葡萄、白鮮皮、紫草、桑白皮、三七及全蝎組成。取各處方藥材，分別加水煎煮三次，合并濾液濃縮至含生藥濃度依次為0.84、0.80、0.80、1.04g/mL，于4～8 ℃冷藏備用。

1.4 儀器 HX602Z電子天平（慈溪市大東衡器廠）;ADVENURERTM電子天平（奧豪斯儀器（上海）有限公司）;10～100 μL移液器（Eppendorf）;8 mm打孔器、剪刀、眼科彎鑷、止血鉗等。

2 方法

2.1 DNFB致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)[4] 選18～20g雄性小鼠，試驗(yàn)前背部脫毛。除隨機(jī)抽取10只為正常對(duì)照外，其余造模動(dòng)物均于腹部涂抹2% DNFB致敏，次日再加強(qiáng)1次。將模型動(dòng)物隨機(jī)分為11組，于2次致敏后4 h開始于背部脫毛區(qū)及雙耳內(nèi)外涂布給藥。正常和模型對(duì)照組給予純水（背0.5 mL、每耳50 μL），化藥對(duì)照組給予皮炎平（背10mg、每耳5mg），中藥對(duì)照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑（背0.5 mL、每耳50 μL），各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液（背0.5 mL、每耳50 μL）;每日2次，連續(xù)7 d。致敏第7 d，末次給藥后30min，各小鼠用0.5% DNFB丙酮橄欖油溶液30 μL涂抹右耳內(nèi)外兩側(cè)進(jìn)行激發(fā)，左耳涂等量混合基質(zhì)為對(duì)照。激發(fā)后24 h脫頸椎處死動(dòng)物，剪下雙耳，以直徑8 mm打孔器取雙耳片稱重，計(jì)算腫脹度即遲發(fā)性超敏反應(yīng)值，并摘取胸腺、脾臟稱重，計(jì)算脾臟和胸腺系數(shù)。結(jié)果見表1。

2.2 DNFB致小鼠特異性皮炎模型[5] 選用23～26 g雄性小鼠，實(shí)驗(yàn)前日腹部剪毛、背部脫毛約2×3 cm2。除隨機(jī)抽取 11只為空白對(duì)照組外，其余動(dòng)物致敏及分組情況同上。各模型組動(dòng)物于致敏后第 5、8 天在背部脫毛區(qū)涂抹0.5% DNFB混合液50 μL誘發(fā)皮炎，并于首次激發(fā)后4 h開始于背部脫毛區(qū)涂藥：空白和模型對(duì)照組給予純水0.5 mL/只，化藥對(duì)照組給予皮炎平背10mg、每耳5mg，中藥對(duì)照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑背0.5mL，每耳50μL，各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液背0.5mL，每耳50μL;每天給藥2次，連續(xù)7 d。第8天于脫毛部位及雙耳進(jìn)行第8次給藥，1 h后用0.5%DNFB溶液30 μL涂抹右耳激發(fā)，左耳涂抹等量溶媒為對(duì)照，6 h后右耳再涂藥1次。激發(fā)后24 h，脫頸椎處死小鼠，取雙耳稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度指標(biāo);剖取胸腺和脾臟稱重，計(jì)算臟器系數(shù);并取各組動(dòng)物的背部皮膚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。結(jié)果見表2及圖1。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SPSS17統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析法;方差齊采用LSD法檢驗(yàn)，方差不齊采用Tamhane′s法檢驗(yàn);P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)DNFB致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 與模型組相比，各給藥組連續(xù)局部涂藥7 d，均可明顯抑制DNFB誘導(dǎo)小鼠的耳腫脹（P<0.05，P<0.01），明顯降低脾臟系數(shù)（P<0.05，P<0.01），但對(duì)胸腺系數(shù)僅有降低趨勢(shì)而無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表1。

3.2 對(duì)DNFB致特異性皮炎小鼠的影響 與模型組相比，各給藥組連續(xù)局部涂藥8 d，均可顯著抑制DNFB誘導(dǎo)小鼠的耳腫脹（P<0.05，P<0.01），明顯降低脾臟系數(shù)（P<0.05，P<0.01），不同程度降低胸腺系數(shù)。詳見表2。

由圖1可見，對(duì)照組皮膚各層次正常，真皮層結(jié)締組織疏松，各附屬器及脂肪組織正常;模型組表皮明顯增厚，表皮突明顯延長(zhǎng)，角化過度和角化不全，結(jié)締組織變致密，皮下組織見炎細(xì)胞浸潤(rùn);各給藥組表皮增厚程度及炎細(xì)胞浸潤(rùn)有所減輕。

4 討論

濕疹病因復(fù)雜，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于本病的具體病因并不明確，認(rèn)為遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)與此病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[6]。嬰兒濕疹是特應(yīng)性皮炎在嬰兒期的表現(xiàn)，西醫(yī)至今尚無理想根治手段，臨床一般以抗組胺、糖皮質(zhì)激素、非特異性脫敏等治療為主，但療效并不理想，且長(zhǎng)期使用不良反應(yīng)較多[7]?；趯?duì)西醫(yī)治療的安全性考慮，多數(shù)家長(zhǎng)更傾向于采用中藥外用制劑治療嬰幼兒濕疹，而目前臨床應(yīng)用的方劑大多缺乏科學(xué)評(píng)價(jià)依據(jù)和規(guī)范的臨床總結(jié)，一定程度上限制了中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)的發(fā)揮。本文采用DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)及特異性皮炎模型，驗(yàn)證了4種外用嬰幼兒濕疹方劑的藥效學(xué)基礎(chǔ)，為臨床推廣應(yīng)用提供了試驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2021-09-03 編輯：陶希睿）D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05