聚花過路黃對(duì)動(dòng)物胃蛋白酶等消化功能相關(guān)因素的影響研究

李飛艷 劉群群 黃丹 羅曉云 劉園園

【摘 要】 目的：研究聚花過路黃對(duì)大鼠、小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)、胃液中胃酸及胃蛋白酶的影響。方法：將SD大鼠、KM小鼠隨機(jī)分為空白組，聚花過路黃高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性（健脾消食丸）對(duì)照組，連續(xù)7 d灌胃給藥，應(yīng)用灌服墨水法觀察小鼠的腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，計(jì)算胃腸推進(jìn)率;應(yīng)用酸堿滴定法測(cè)定大鼠胃總酸、胃游離酸的濃度;酶標(biāo)法測(cè)定大鼠胃液中的胃蛋白酶濃度。結(jié)果：與空白組比較，聚花過路黃高、中、低劑量組的腸推進(jìn)率有增加的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;各藥物組胃液中胃蛋白酶含量均顯著增加（P<0.01）;各藥物組胃液中游離酸、總酸濃度顯著增加（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：聚花過路黃可通過促進(jìn)胃酸的排出，增加胃蛋白酶的含量，達(dá)到促進(jìn)胃內(nèi)食物消化的作用。

【關(guān)鍵詞】 聚花過路黃;胃游離酸;胃酸;胃蛋白酶;胃腸推進(jìn)

【中圖分類號(hào)】R285.6?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）16-0020-04

Effects of Lysimachia Congestiflora Hemsl on Digestive Function of Rodent

LI Feiyan LIU Qunqun HUANG Dan LUO Xiaoyun LIU Yuanyuan

Department of Pharmacy， Hunan Traditional Chinese Medical College，Zhuzhou 412012，China

Abstract：Objective To investigate the effects of Lysimachia congestiflora Hemsl on gastrointestinal motility， gastric acid and pepsin in rats and mice.Methods SD rats and Kunming mice were randomly divided into normal group，Lysimachia congestiflora Hemsl high dose group， Lysimachia congestiflora Hemsl medium dose group， Lysimachia congestiflora Hemsl low dose group and Jianpi Xiaoshi pill group，and were administered by gavage for 7 days. After the administration， the intestinal propulsive movement and the gastrointestinal propulsive rate was calculated in mice. The concentrations of total gastric acid， free gastric acid and pepsin concentration in rats gastric juice were measured. Results Compared with normal group， there was no significant difference in the intestinal propulsion rate of the high， medium and low dose groups of Lysimachia congestiflora （P>0.05）， the content of pepsin in gastric juice increased significantly in each drug group （P<0.01），the concentrations of free acid and total acid in gastric juice increased significantly in each drug group（P<0.05，P<0.01）.Conclusion Lysimachia congestiflora Hemsl can promote the digestion of food in the stomach by promoting the excretion of gastric acid and increasing the content of pepsin.

Key words：Lysimachia Congestiflora Hemsl; Stomach Free Acid; Gastric Acid; Pepsin; Gastrointestinal Propulsion

聚花過路黃為報(bào)春花科植物聚花過路黃Lysi-machiae congestiflorae Hemsl的干燥全草，2006年版《中藥大辭典》， 2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》均以“風(fēng)寒草”收載[1-2]，有祛風(fēng)散寒、化痰止咳、解毒利濕、消積排石的功效。

金錢草為2020年版《中國(guó)藥典》收錄品種，為報(bào)春花科植物過路黃Lysimachia christinae Hance的干燥全草[3]。聚花過路黃作為湖南常見，野外資源豐富、易繁殖的一種植被，曾作為理脾消積、清熱解毒的草藥收載于《湖南藥物志》[4]，藥名“胡氏排草”，如今臨床卻已罕見將其用于理脾消積，清熱解毒的用途。因其植株與金錢草的原植物過路黃形態(tài)相似而被誤用，根據(jù)藥品管理法的規(guī)定，聚花過路黃作金錢草使用則為偽品，因此，聚花過路黃常被作為金錢草的偽品而被中藥人士關(guān)注[5-8]。

現(xiàn)關(guān)于聚花過路黃的研究主要集中在藥材鑒定、化學(xué)成分提取及研究方面[5-10]，對(duì)其藥效、藥理研究甚少，已有報(bào)道亦僅限于聚花過路黃對(duì)動(dòng)物腦缺血的保護(hù)作用及機(jī)制研究，聚花過路黃不同部位提取物的體外抗炎作用，聚花過路黃對(duì)動(dòng)物膽汁、尿液排出作用的研究[11-13]，尚未見關(guān)于聚花過路黃對(duì)動(dòng)物消化功能相關(guān)因素影響方面的研究報(bào)道。研究就聚花過路黃對(duì)大鼠、小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)、胃液中胃酸及胃蛋白酶的影響做探究，旨在探討其在“消積”方面的功效，挖掘其傳統(tǒng)藥用價(jià)值。

1 材料

1.1 藥材 聚花過路黃（風(fēng)寒草）飲片（批號(hào)：202105，瑞豐成中藥材公司）經(jīng)中藥鑒定專家鑒定為正品;健脾消食丸（批號(hào)：18015002，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠，SPF級(jí)，50只，雌雄各半，體重18～22g，質(zhì)量合格證號(hào)430727211101224718;SD大鼠，SPF級(jí)，50只，雌雄各半，體重180～220 g，質(zhì)量合格證號(hào)430727211101225912，均由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0004，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SYXK（湘）2013-0009。

1.3 試劑 胃蛋白酶（Pepsin） ELISA試劑盒（批號(hào)：2107R31，江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司）;酚酞指示劑（批號(hào)：20200618）、甲基黃指示劑（批號(hào)：20180822）均由天津市化學(xué)試劑研究所提供;墨汁（批號(hào)：DZ0039，北京索萊寶科技有限公司）。

1.4 儀器 IF50酶標(biāo)儀（瑞士帝肯）;759系列紫外可見分光光度計(jì)（上海菁華）;DK-8D電熱恒溫水浴鍋;TDZ4-WS低速離心機(jī);100-1000μl TopPette手動(dòng)單道可調(diào)式移液器（北京大龍）。

2 方法

2.1 受試藥物的制備

2.1.1 聚花過路黃藥液 聚花過路黃置于不銹鋼鍋內(nèi)，加冷水浸泡30 min，煎煮2次，加水量以液面超過藥面約3 cm，第一、二次煎煮時(shí)間分別為30 min、20 min，趁熱過濾，合并兩次濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1 g/mL的藥液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 健脾消食丸藥液 健脾消食丸加純凈水，使溶解成均勻的混懸液，臨用前配制。

2.2 分組及劑量 KM小鼠、SD大鼠分別隨機(jī)分為5組，即空白組（KB）、聚花過路黃高劑量組（GLH-G）、聚花過路黃中劑量組（GLH-Z）、聚花過路黃低劑量組（GLH-D）、陽性藥物（健脾消食丸）對(duì)照組（JPXS）。健脾消食丸臨床用量為6 g/次，2次/d，本實(shí)驗(yàn)以臨床等效劑量給藥，采用劑量小鼠為1.6 g/kg、大鼠為1.1 g/kg給藥。《中藥大辭典》中聚花過路黃煎湯內(nèi)服用量為15～50 g，根據(jù)人與動(dòng)物體表面積等效劑量換算，以等效劑量為低劑量，高、中、低劑量差之比為2進(jìn)行給藥，大鼠的高、中、低劑量分別為10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg，小鼠的高、中、低劑量分別為20 g/kg、10 g/kg、5g/kg。

2.3 小鼠胃腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn) 小鼠40只，每組8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后灌胃給藥，每10 g體重給藥體積為0.2 mL?？瞻捉M以飲用水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組分別以聚花過路黃藥液20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg的劑量灌胃，JPXS組以健脾消食丸藥液1.6 g/kg的劑量灌胃，連續(xù)用藥7 d，最后1 d灌胃后禁食不禁水24 h，第8天，空白組用純凈水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組以及JPXS組分別以相應(yīng)藥物的相應(yīng)劑量灌胃，1 h后每只小鼠以10 mL/kg（體重）的量灌服墨汁，15min后脫頸椎處死，打開腹腔，剪取幽門下端至回盲部的腸管，測(cè)量總長(zhǎng)度（L），再測(cè)量幽門至炭末被推至的最前端之間的長(zhǎng)度（D），以炭末推進(jìn)的長(zhǎng)度與腸管總長(zhǎng)度的比值（D/L）的百分率做為胃腸推進(jìn)率的指標(biāo)[14]。

2.4 大鼠胃游離酸、總酸及胃蛋白酶活性實(shí)驗(yàn) SD大鼠，40只，每組8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后灌胃給藥，每100 g體重給藥體積為1 mL。空白組以飲用水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組分別以聚花過路黃藥液10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg的劑量灌胃，JPXS組以健脾消食丸藥液1.1 g/kg的劑量灌胃，連續(xù)用藥7 d，末次給藥后禁食不禁水24 h，第8天以水合氯醛麻醉動(dòng)物，行剖腹手術(shù)，找到胃，結(jié)扎幽門，再由十二指腸給藥1次，縫合切口，2 h后再次打開切口，結(jié)扎賁門，摘取胃，剪開并收集胃內(nèi)容物，離心，吸取上清液，得胃液，用于測(cè)胃液游離酸、總酸度及胃蛋白酶濃度。

每樣本取胃液0.1～0.5 mL，加蒸餾水至1 mL，加甲基黃、酚酞指示劑各2滴，混勻，用0.02 moL/L的氫氧化鈉滴定，溶液顏色由紅色至出現(xiàn)橘黃色時(shí)，記錄氫氧化鈉用量，此時(shí)為游離酸滴定終點(diǎn)消耗量;繼續(xù)滴加堿液至出現(xiàn)紅色，搖勻后不褪去為止，此時(shí)的氫氧化鈉用量為總酸終點(diǎn)。計(jì)算公式為：1000×0.02×氫氧化鈉消耗量/胃液量。

胃蛋白酶濃度檢測(cè)按照胃蛋白酶 ELISA 試劑盒說明書步驟操作。反應(yīng)結(jié)束后，將酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，代入回歸方程（以胃蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品OD值對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析），計(jì)算胃蛋白酶含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)用SPSS23統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組之間進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 聚花過路黃對(duì)小鼠腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響 與空白組比較，聚花過路黃高、中、低劑量組、健脾消食丸組的腸推進(jìn)率有增加的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與空白組比較，各藥物組動(dòng)物的小腸總長(zhǎng)度及小腸推進(jìn)長(zhǎng)度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表1。

3.2 聚花過路黃對(duì)大鼠胃酸、胃蛋白酶濃度的影響 與空白組比較，各藥物組胃液中胃蛋白酶含量均顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;各藥物組胃液中游離酸濃度顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;各藥物組胃液中總酸濃度顯著增加（P<0.05或P<0.01）。與陽性藥物對(duì)照組比較，聚花過路黃高、中、低劑量組胃液中胃蛋白酶濃度顯著降低（P<0.05或P<0.01），且隨著劑量的增加胃蛋白酶含量降低趨勢(shì)加大;各藥物組胃液總酸濃度無明顯差異;聚花過路黃低劑量組的胃液游離酸濃度顯著增高，有顯著性差異（P<0.05），聚花過路黃高、中劑量組無明顯差異。結(jié)果見表2。

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為飲食積滯多與胃腸動(dòng)力不足或消化酶活性降低有關(guān)，胃酸和胃蛋白酶的分泌量反映了胃對(duì)食物的消化功能[15]，同時(shí)胃蛋白酶的活性受pH影響，其最適pH值為1.8[16]。聚花過路黃作為一味具有理脾消積等功效的中藥，其“消積”的作用機(jī)制可能是多途徑、多靶點(diǎn)、多方面的綜合作用，本項(xiàng)目主要就其對(duì)動(dòng)物小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)、胃酸分泌量、胃液中胃蛋白酶的濃度影響做了初步探討。

結(jié)果顯示，聚花過路黃主要通過增加動(dòng)物胃液中胃酸、胃游離酸的濃度，從而相應(yīng)的增加胃蛋白酶的排出，且各藥物組胃游離酸的平均濃度換算為pH值后，均在1.76～1.83之間，為胃蛋白酶發(fā)揮最強(qiáng)活性提供了最佳pH環(huán)境[16]，加之聚花過路黃高、中、低劑量組對(duì)動(dòng)物小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的增加并不明顯，認(rèn)為聚花過路黃能促進(jìn)胃內(nèi)食物消化，不影響食物在小腸中的停留時(shí)間。

健脾消食丸為北京同仁堂生產(chǎn)的中成藥，具有健脾、消食、化積的功效，金鑫等研究了其藥效，得出該藥可有效地促進(jìn)飲食失節(jié)致脾胃受損的大鼠體重的增長(zhǎng)，并可增加胃液中總酸度、總酸排出量，提高胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量[17]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，健脾消食丸有促進(jìn)正常大鼠胃液中總酸、游離酸排出，促胃蛋白酶的形成的作用，聚花過路黃相比健脾消食丸，促胃蛋白酶形成的作用較弱。

綜上所述，聚花過路黃通過促進(jìn)胃酸的排出、增加胃蛋白酶的含量，達(dá)到促進(jìn)胃內(nèi)食物消化的作用，為聚花過路黃“理脾消積”提供了部分理論依據(jù)。

研究[10，18-19]報(bào)道，聚花過路黃中主要含黃酮類、三萜苷類和甾體類（主為β-谷甾醇等）等化合物，黃酮類主要為槲皮素、楊梅樹皮素、檉柳素、山柰素、鼠李素等。有學(xué)者[12]研究報(bào)道了聚花過路黃不同部位提取物體外抑菌活性，尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于聚花過路黃不同成分的相關(guān)藥理作用的報(bào)道，聚花過路黃中究竟是何成分在發(fā)揮促進(jìn)胃酸排出、增加胃蛋白酶含量的作用，尚有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2021-12-10 編輯：劉斌）

基金項(xiàng)目：湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（18C1654）。

作者簡(jiǎn)介：李飛艷（1972-），女，漢族，研究生，副教授，研究方向?yàn)橹兴幷鎮(zhèn)舞b定及中藥藥理、毒理研究。E-mail：719656319@qq.com