耐鹽堿解磷菌的篩選鑒定及對綠豆的促生作用

周 妍，王麗娜，張美珍，劉 權(quán)，殷奎德

(1. 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 植物微生物互作實驗室，黑龍江大慶 163319；2. 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶 163316)

磷是植物生長發(fā)育過程中必要的礦質(zhì)元素之一，在植物生長過程中，參與核酸、磷脂和ATP的合成，還能通過光合作用、生物氧化和細(xì)胞分解代謝等途徑促進(jìn)植物生長[1]。當(dāng)缺磷時，核酸的合成受到影響，細(xì)胞的形成和增殖也會受到抑制，導(dǎo)致植株根系發(fā)育不良，長勢矮小，嚴(yán)重時植株發(fā)育停滯。據(jù)統(tǒng)計，中國農(nóng)田磷缺乏比較嚴(yán)重，大約有2/3的農(nóng)田處于缺磷狀態(tài)，土壤中有效磷平均含量僅有0.1%，嚴(yán)重影響植物生長和作物產(chǎn)量[2]，因此農(nóng)民常施入大量含磷的化肥來解決土壤缺磷問題，但以化肥形式進(jìn)入土壤的磷，至少有80%成為難以被作物吸收利用的固定形態(tài)，磷利用率過低。鹽堿土壤中含有大量鹽堿成分，有效磷含量少，致使大多數(shù)植物的生長受到不同程度的抑制[3]。耐鹽堿植物可以在中度鹽堿條件下生存，根際可能會有高效解磷菌的存在，從耐鹽堿植物的根際分離得到的耐鹽堿解磷菌會更適應(yīng)鹽堿環(huán)境。張振等[4]從植物根際土壤中篩選得到菌株ZZ21，發(fā)現(xiàn)該菌能夠耐鹽堿，解磷，在pH為10，含鹽度為7mol/L的LB培養(yǎng)基上能夠生長，30℃培養(yǎng)72h對磷酸三鈣液體培養(yǎng)基的溶磷量達(dá)120.86mg/L。張巍等[5]從黑龍江省安達(dá)地區(qū)羊草根際鹽堿土中分離得到兩株解磷含量較高的菌株，分子鑒定為乙酸鈣不動桿菌和近平滑假絲酵母，并在NaCl濃度10mol/L條件下有較高的溶磷量。楊海霞等[6]從天津濱海新區(qū)鹽堿土壤中分離得到1株耐鹽堿溶磷菌Y2R2，分子鑒定結(jié)果表明該菌為鹽單胞菌屬(Halomonas)的一個新種，發(fā)現(xiàn)該菌在pH=13和NaCl濃度12mol/L的條件下，溶磷量達(dá)到167.9mg/L。目前已知的具有解磷能力的菌株種類大多為鹽單胞菌屬、假單胞菌屬及芽孢桿菌屬等，而對于本研究分離得到的不動桿菌屬及微桿菌屬菌在耐鹽堿解磷方面的功能未見報道。

本研究以鹽堿地上生長的鹽生植物羊草和堿蓬根際土為材料，從中篩選分離得到多株具有解磷功能的菌株，挑選解磷能力較強(qiáng)，同時具有其他促生特性的菌株進(jìn)行鑒定，利用盆栽試驗驗證解磷菌對綠豆的促生效果，以期為進(jìn)一步研究耐鹽堿解磷菌的解磷機(jī)制、研制耐鹽堿解磷生物菌劑產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 分離促生菌土壤樣品 兩種耐鹽堿植物根際土壤樣品于2020-07-12采集。羊草土壤樣品取樣地點位于黑龍江省大慶市龍鳳區(qū)的鹽堿土草原(46°36′23″ N，125°10′44″ E)，取樣時采用五點取樣法，每點之間距離1 m；堿蓬土壤樣品采集地點位于黑龍江省大慶市開發(fā)區(qū)一處只生長堿蓬的區(qū)域(46°28′20″ N，125°15′41″ E)，取樣時挖取5株堿蓬植株。采集土壤樣品時使用鐵鍬挖取地面0～20 cm土層土樣，將大塊土抖落下去，用刷子輕輕刷下附著于根際表面的土壤，分別將羊草和堿蓬根際土壤樣品混合均勻，裝于無菌袋中，運回實驗室后4 ℃保存，待用。

羊草和堿蓬的根際土壤理化性質(zhì)如表1所示。

表1 羊草和堿蓬根際土壤理化性質(zhì)

1.1.2 培養(yǎng)基及Hogland全營養(yǎng)液 篩選菌株的蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基和PKO無機(jī)磷培養(yǎng)基參考趙小蓉等[7]的方法進(jìn)行配制；阿須貝無氮培養(yǎng)基參考何建清等[8]的方法進(jìn)行配制；解鉀培養(yǎng)基參考吳俊林等[9]的方法進(jìn)行配制；LB培養(yǎng)基參照Baev等[10]的方法進(jìn)行配制；ADF培養(yǎng)基參照Gao等[11]的方法進(jìn)行配制，CAS鐵載體檢測培養(yǎng)基參考Schwyn[12]的方法進(jìn)行配制。

Hogland全營養(yǎng)液的配制方法按照陳超等[13]的方法配制，其中缺磷營養(yǎng)液的配制是將Hogland正常營養(yǎng)液中的磷酸銨換成氯化銨，其余均不變。

1.1.3 綠豆試驗品種 試驗使用的綠豆品種為‘小明綠’，由國家雜糧工程技術(shù)研究中心提供。

1.2 方 法

1.2.1 菌株的分離純化 分離菌株按照Sarkar 等[14]的方法進(jìn)行篩選，先在有機(jī)磷固體培養(yǎng)基上篩選解磷菌，再在無機(jī)磷培養(yǎng)基上篩選解磷菌。將篩選的菌株劃線培養(yǎng)傳代至少3次以上，直至獲得純化菌株，-80 ℃保存菌株用于后續(xù)試驗。

1.2.2 菌株溶磷功能的測定 在蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基和PKO無機(jī)磷培養(yǎng)基上接種50 μL菌懸液，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，倒置培養(yǎng)7 d，觀察菌株是否產(chǎn)生透明溶磷圈，測定細(xì)菌菌落直徑(D)與所形成的溶磷圈直徑(d)，計算溶磷指數(shù)(Phosphate solubilizing index，PSI)，通過D/d來初步判斷菌株溶磷能力強(qiáng)弱[15]；在蒙金娜有機(jī)磷液體培養(yǎng)基和無機(jī)磷液體培養(yǎng)基上接種純化后的解磷菌，將菌懸液的濃度調(diào)到1×108CFU/mL。28 ℃、160 r/min條件下振蕩培養(yǎng)7 d，用鉬藍(lán)比色法[16]和鉬銻抗比色法[17]對上清液中有機(jī)磷量和無機(jī)磷量進(jìn)行測定。

1.2.3 菌株其他促生功能的測定 固氮功能，解鉀功能，分泌植物激素IAA，產(chǎn)ACC脫氨酶活性和產(chǎn)鐵載體能力的鑒定分別按照文獻(xiàn)[18-22]的方法進(jìn)行鑒定。

1.2.4 菌株的生理生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定 生理生化測定方法參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[23]進(jìn)行鑒定。主要包括吲哚試驗、檸檬酸鹽利用試驗、硝酸鹽還原試驗、甲基紅試驗、淀粉水解試驗、產(chǎn)氨試驗、厭氧生長試驗及膿青素試驗等指標(biāo)，其中所有生理生化所用的試劑均自行配制。

菌株總DNA通過細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒[24]來提取，PCR擴(kuò)增時使用細(xì)菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)。PCR反應(yīng)體系如下：2×EsTaq Master Mix 25 μL，DNA 2 μL，上、下游引物各1 μL，加dd H2O至50 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 2 min，35個循環(huán)；72 ℃ 10 min。得到產(chǎn)物后，純化回收，送至庫美生物科技有限公司測序。將反饋的結(jié)果在NCBI上進(jìn)行BLAST分析，然后通過MEGA 7.0對序列進(jìn)行Clustal W比對，通過鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，最后確定菌株的分類學(xué)地位。

1.2.5 解磷菌株耐鹽堿試驗 耐鹽試驗:按照沈萍[25]的方法進(jìn)行測定。首先在LB液體培養(yǎng)基中搖種子液，使菌液的OD600為0.6，此時按1%的接種量接種到不同鹽濃度梯度(1、3、5、7、9、11 mol/L)的LB培養(yǎng)基中，將接種后的培養(yǎng)基置于37 ℃、180 r/min的搖床中培養(yǎng)，每隔24 h測OD600值，測定7 d。

耐堿試驗:按照潘媛媛等[26]的方法進(jìn)行測定。首先在LB液體培養(yǎng)基中搖種子液，使菌液的OD600為0.6，按1%的接種量接種到不同pH梯度(pH=8、9、10、11、12)的LB培養(yǎng)基中，將接種好的培養(yǎng)基置于37 ℃、180 r/min的搖床中培養(yǎng)，每隔24 h測其OD600值，測定7 d。

1.2.6 耐鹽堿解磷菌對綠豆促生試驗 用于綠豆盆栽試驗的土壤采集自大慶市植被生長較好的鹽堿地草原，pH 8.74，可溶性鹽含量1.5 mol/L，堿解氮、速效鉀和有效磷含量分別為98.00、 378.00、18.20 mg/kg，有機(jī)質(zhì)含量為31.60 g/kg。沙子用水清洗3遍后烘干，再將取回的新鮮鹽堿土與沙子1∶1等體積混勻裝入盆中，每盆沙土質(zhì)量5 kg。

盆栽試驗中的植株樣品設(shè)定兩個對照組(CT1和CT2)和3個接種不同菌株的處理組(T1、T2和T3)，重復(fù)3次。具體為：缺磷營養(yǎng)液(CT1)、正常營養(yǎng)液(CT2)，JC8+缺磷營養(yǎng)液(T1)、JC11+缺磷營養(yǎng)液(T2)，JP8+缺磷營養(yǎng)液(T3)；為了區(qū)分植株樣品和土壤樣品，土壤樣品命名為缺磷營養(yǎng)液(SCT1)、正常營養(yǎng)液(SCT2)，JC8+缺磷營養(yǎng)液(ST1)、JC11+缺磷營養(yǎng)液(ST2)，JP8+缺磷營養(yǎng)液(ST3)。JC8和JC11是從羊草中分離得到的解有機(jī)磷含量高的菌株，JP8是從堿蓬中分離得到的解有機(jī)磷含量高的菌株，菌液的配制方法按照Kwak 等[27]的方法進(jìn)行制備，Hogland營養(yǎng)液選擇1/4倍進(jìn)行澆灌，共澆2次，每次200 mL。先施入1/4 Hogland營養(yǎng)液200 mL和濃度為107CFU/mL的菌液后種植綠豆，每盆30株，置于室外培養(yǎng)36 d測定綠豆的各項生長指標(biāo)。17 d后再施入一次濃度為107CFU/mL的菌液和1/4 Hogland營養(yǎng)液200 mL。

采用葉綠素測定儀測定綠豆葉片的葉綠素含量(SPAD值)；綠豆植株超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)、抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性及丙二醛(MDA)含量的測定參照彭亮等[28]的方法進(jìn)行；綠豆幼苗可溶性糖含量、可溶性蛋白和脯氨酸含量測定參照李合生[29]的方法。

1.2.7 土壤酶活性的測定 綠豆生長35 d以后取根際土壤用作土壤酶活性的測定。

土壤酶活性(脲酶、磷酸酶、蔗糖酶、纖維素酶、過氧化氫酶)參照Zhao等[30]的方法測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Microsoft Excel 2010和SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，方差分析采用Duncan’s新復(fù)極差法和LSD法，采用Origin 8.5作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 解磷菌的分離與解磷能力分析

取羊草和堿蓬根際土用有機(jī)磷和無機(jī)磷培養(yǎng)基篩選解磷菌，最終得到100株不同菌落形態(tài)的解有機(jī)磷和無機(jī)磷菌株。通過對菌株解磷圈[溶磷圈直徑(D)/菌落直徑(d)]的測定選出較大的30株菌進(jìn)行解磷量的定量6 d測定，其中JC8、JC11和JP8這3株菌株解有機(jī)磷能力較強(qiáng)(圖1)，解有機(jī)磷含量分別為414.18 mg/L、482.86 mg/L和428.30 mg/L，解無機(jī)磷含量分別為 3.98 mg/L、9.11 mg/L和7.58 mg/L。通過菌株解磷圈和解磷含量判斷該菌解磷能力較強(qiáng)，最終選取這3株菌用做后續(xù)試驗。

圖1 3株菌株解磷含量

2.2 菌株的其他促生功能鑒定

通過解磷量選出3株高效解磷菌株，以解磷功能為主，又對菌株進(jìn)行其他促生功能的鑒定，結(jié)果如表2所示。由表2可見，這3株菌株均具有固氮、解鉀、產(chǎn)IAA、ACC以及鐵載體的功能；其中JC8產(chǎn)ACC能力更強(qiáng)，而JC11產(chǎn)IAA能力更強(qiáng)。

表2 3株菌的其他促生功能

2.3 菌株的生理生化特性和分子學(xué)鑒定

對3株耐鹽堿高效解磷菌進(jìn)行生理生化鑒定，如表3所示，發(fā)現(xiàn)3株菌株均能在唯一碳源、氮源條件下生長；吲哚試驗、接觸酶試驗、淀粉水解、厭氧生長、硝酸鹽還原和產(chǎn)氨試驗均呈陽性；而V-P試驗均呈陰性。

表3 3株菌的生理生化特性

提取JC8、JC11和JP8 3株解磷菌的DNA再進(jìn)行測序，然后將得到的16S rRNA基因序列兩端冗余序列刪除，在NCBI上進(jìn)行BLAST分析，并通過MEGA構(gòu)建發(fā)育樹，根據(jù)與模式菌株的相似性判斷菌株的種屬分類。結(jié)果如圖2和表4所示，根據(jù)生理生化試驗和16S rRNA鑒定結(jié)果，最終判定JC8、JC11和JP8分別為假單胞菌屬(Pseudomonassp.)、不動桿菌屬(Acinetobactersp.)和微桿菌屬(Microbacteriumsp.)。

圖2 3株菌株基于16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育樹

表4 3株菌的 16S rRNA 基因相似性比對結(jié)果

2.4 解磷菌株耐鹽堿測定試驗

將菌株分別接種于不同含鹽量和pH的LB液體培養(yǎng)基中，每隔24 h對3株菌株的OD600值進(jìn)行測定，共測定7次，記錄7 d中吸光值最高的數(shù)值，隨著氯化鈉濃度和pH的上升，3株菌株吸光值的結(jié)果均呈現(xiàn)上升的趨勢，但第5天后，3株菌株的吸光值上升緩慢，基本維持穩(wěn)定，耐鹽試驗和耐堿試驗結(jié)果如表5所示，發(fā)現(xiàn)JC8和JP8能在pH=11和氯化鈉含量為9 mol/L的條件下生長，JC11能在pH=11和氯化鈉含量為11 mol/L的條件下生長，說明3株菌株均具有較強(qiáng)耐鹽和耐堿的能力[31-33]。

表5 3株菌株耐鹽和耐堿試驗

2.5 高效耐鹽堿解磷菌對綠豆幼苗生長的影響

選取3株耐鹽堿高效解磷菌進(jìn)行綠豆的促生試驗，用缺磷土壤種植綠豆，36 d測定綠豆的各項生長指標(biāo)，統(tǒng)計分析結(jié)果如表6所示。接種不同的菌株以后，綠豆幼苗的根長、植株鮮質(zhì)量以及根鮮質(zhì)量含量均顯著增加(P<0.05)，T1、T2和T3與CT1相比根長分別增加163%、239%、240%；植株鮮質(zhì)量分別增加191%、339%、480%；根鮮質(zhì)量分別增加230%、197%、300%。T1、T2和T3與CT2相比根長分別增加66%、209%、240%；植株鮮質(zhì)量分別增加84%、300%、480%；根鮮質(zhì)量分別增加108%、171%、300%。表明接種解磷菌后，土壤中難溶的磷酸鹽被菌株分解為可供植物吸收利用的磷，顯著改善綠豆在鹽堿土中的生長狀況，緩解了鹽堿脅迫對綠豆生長造成的抑制作用，增強(qiáng)了綠豆對鹽堿脅迫的抵抗能力。

表6 不同處理綠豆植株形態(tài)指標(biāo)

對綠豆葉片的抗氧化酶以及滲透性物質(zhì)進(jìn)行測定，從表7發(fā)現(xiàn)接種菌株以后的綠豆葉片抗氧化酶酶活性與CT1和CT2相比均顯著下降(P<0.05)，其中POD的下降趨勢最大，T1、T2和T3與CT1相比，分別下降143%、207%、107%；T1、T2和T3與CT2相比，分別下降50%、90%、28%；由此說明解磷菌除溶磷功能外，還具有其他促生功能，能夠緩解鹽堿對綠豆的傷害；由表8結(jié)果可知接種菌株的綠豆葉片中滲透性物質(zhì)與CT1和CT2相比均顯著上升(P<0.05)，其中可溶性糖和脯氨酸含量上升很大，T1、T2和T3與CT1可溶性糖含量相比分別增加98%、87%、115%；T1、T2和T3與CT1脯氨酸含量相比分別增加了144%、200%、225%；T1、T2和T3與CT2可溶性糖含量相比分別增加78%、68%、93%；T1、T2和T3與CT2脯氨酸含量相比分別增加41%、74%、88%；說明施入解磷菌后，增加了綠豆?jié)B透調(diào)節(jié)物質(zhì)的含量，維持了細(xì)胞的滲透平衡，減輕脅迫對植株的傷害。

表7 不同處理綠豆葉片酶活性

表8 不同處理綠豆葉片滲透性物質(zhì)

2.6 高效耐鹽堿解磷菌對土壤酶活性的影響

室外培養(yǎng)綠豆的第36天，對種植綠豆的5組不同的根際土壤進(jìn)行土壤酶活性測定，統(tǒng)計分析結(jié)果如表9所示。ST1、ST2和ST3與SCT1相比，脲酶分別顯著增加71.8%、85.6%、84.4%，蔗糖酶分別顯著增加41.0%、41.5%、46.0%，磷酸酶分別顯著增加23.6%、28.1%、 25.3%，過氧化氫酶分別增加5.7%、7.2%、7.1%；ST1、ST2和ST3與SCT2相比，脲酶分別顯著增加 44.4%、 55.6%、54.2%，蔗糖酶分別顯著增加22.2%、22.2%、22.2%，磷酸酶分別顯著增加14.6%、18,8%、16.2%，過氧化氫酶分別顯著增加 4.9%、6.8%、6.2%。說明接種解磷菌株以后，能夠提高土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、纖維素酶、過氧化氫酶的活性，改善了土壤肥力。

表9 土壤酶活性

3 討 論

松嫩平原是中國鹽堿土主要分布區(qū)之一，由于鹽堿土壤環(huán)境為高鹽強(qiáng)堿且較為瘠薄，養(yǎng)分含量低，多數(shù)植物和微生物難以在其中生存。本研究從兩種耐鹽堿植物根際土中分離得到3株耐鹽堿解磷能力較強(qiáng)的菌株，將解磷菌株施入到輕度鹽堿土與沙子混合的缺磷土壤中，驗證其在鹽堿條件下解磷效果。綠豆生長過程中補充缺磷營養(yǎng)液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)施用解磷菌后可以保證綠豆的正常生長，說明解磷菌具有解磷效果，可以分解鹽堿土壤中被固定的磷供綠豆生長需要。施用解磷菌的的綠豆長勢明顯好于使用營養(yǎng)液不缺磷的對照，說明解磷菌不僅具有解磷功能而且還有促生功能。程寶森等[34]從葡萄根際土壤中分離得到29株解磷細(xì)菌，通過盆栽試驗分析，表明接種解磷細(xì)菌處理的赤霞珠扦插苗株高、地下干質(zhì)量和地上干質(zhì)量顯著高于對照。而本研究在鹽堿環(huán)境下種植綠豆，發(fā)現(xiàn)施菌處理后對綠豆有一定的促生效果，能夠緩解鹽堿脅迫對綠豆生長帶來的抑制 作用。

鹽堿脅迫下植物細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)大量積累，同時使膜脂和核酸受到氧化損害[35]，抑制植物生長。為了抵御鹽堿脅迫的傷害，植物自身擁有一套完整的抗氧化防御系統(tǒng)，用來保護(hù)植物本身不受損傷[36]。本研究在接種耐鹽堿高效解磷菌株后，綠豆葉片中抗氧化酶活性均降低，說明施入的解磷菌株不僅將土壤中難溶性磷分解為可供綠豆吸收利用的磷，同時還改善了綠豆的生長環(huán)境，降低了鹽堿脅迫對綠豆的傷害。Sarkar等[37]和Upadhyay等[38]的研究中發(fā)現(xiàn)，篩選得到的促生菌株接種于植物后，植物抗氧化酶活性也有所降低，其中Sarkar等[37]分離得到的菌株耐4 mol/L的NaCl，Upadhyay等[38]分離得到的菌株耐 8 mol/L的NaCl，而本研究中分離得到的解磷菌2株耐9 mol/L的NaCl，1株耐11 mol/L的NaCl，同時能在pH為11的培養(yǎng)基中生長，說明我們分離得到的菌株耐鹽堿能力更強(qiáng)。

MDA含量的變化反映細(xì)胞質(zhì)膜的損傷情況，數(shù)值越大代表膜的過氧化程度越嚴(yán)重[39]，而且MDA含量的降低一般與脯氨酸含量的升高有關(guān)[40]；植物體內(nèi)脯氨酸含量的高低通?？梢宰鳛榕袛嘀仓犒}堿抗性強(qiáng)弱的重要指標(biāo)之一[41]，它能夠維持亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，清除自由基，還能緩解植物細(xì)胞因脅迫受到的損傷。本研究發(fā)現(xiàn)接種解磷菌株后綠豆幼苗體內(nèi)的丙二醛含量降低，說明綠豆幼苗受到的氧化損傷程度較輕；接種解磷菌株后綠豆幼苗葉片中脯氨酸的含量較未接種對照相比顯著增加，而MDA的含量顯著降低，說明二者之間存在一定的相關(guān)性。Islam等[42]和Yasin等[43]的研究中發(fā)現(xiàn)篩選得到的多株促生菌具有溶磷及產(chǎn)植物激素IAA等促生特性，將菌株接種于植物后，脯氨酸含量明顯增加，說明在接種促生菌株后，植株的鹽堿抗性也隨之增強(qiáng)。同樣本研究中，接種解磷菌株后，綠豆葉片中脯氨酸含量與未接種對照相比顯著增加，與前人研究結(jié)果相似。

土壤酶是土壤生態(tài)系統(tǒng)中不可或缺的一部分，土壤中酶活性與微生物的關(guān)系十分緊密，常常被用作表征土壤中微生物群落活動情況，但是鹽堿脅迫能夠顯著影響土壤酶活性和功能，降低土壤酶的分泌量，對土壤環(huán)境造成破壞。相關(guān)研究表明，土壤酶活性與土壤中微生物數(shù)量有關(guān)，當(dāng)土壤中微生物數(shù)量改變時，土壤酶活性也會隨之發(fā)生改變[44]。本研究接種耐鹽堿高效解磷菌后，與未接種對照相比，處理組土壤中的磷酸酶以及過氧化氫酶活性顯著上升，說明施入解磷菌株以后，土壤中的難溶性磷或不溶性磷被解磷菌株轉(zhuǎn)化為可供植物直接利用的形態(tài)，使鹽堿土壤中磷的利用效率提高；過氧化氫酶活性上升，說明微生物活動增加，土壤總的生物學(xué)活性上升。在本研究中分離得到的解磷菌株較前人研究相比具有更高的解有機(jī)磷量，并且具有較強(qiáng)的耐鹽堿的能力，促生效果較好。

4 結(jié) 論

本研究從耐鹽堿植物羊草和堿蓬根際土中共分離得到100株不同的解磷菌，通過測定菌株的解磷圈和解磷量，最終選出3株高效解有機(jī)磷菌，這3株菌株具有多種促生功能，通過生理生化和分子鑒定，這3株菌分別為Pseudomonassp.，Acinetobactersp.和Microbacteriumsp.；對3株菌株進(jìn)行耐鹽堿能力的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三株菌株均具有較強(qiáng)的耐鹽堿能力；在輕度鹽堿缺磷土壤中分別接種3株菌，3株菌均表現(xiàn)出較好的解磷和促生能力，增強(qiáng)了土壤酶的活性，減緩了鹽堿脅迫對綠豆生長的抑制。