高效液相色譜法測(cè)定食品中肉桂酸鉀的含量

袁 明，余春平

（武漢能邁科實(shí)業(yè)有限公司，湖北武漢 430010）

肉桂酸鉀在食品添加劑、香精香料、畜牧業(yè)、日化用品等工農(nóng)業(yè)領(lǐng)域有著極其廣泛的應(yīng)用。肉桂酸鉀具有較強(qiáng)的抑菌能力，尤其是對(duì)引起食品腐敗的霉菌、細(xì)菌和酵母菌作用明顯，且由于其良好的溶解性，是一種廣泛使用的食品防腐保鮮劑，且屬于無(wú)公害的環(huán)保防腐劑，可替代苯甲酸鈉，山梨酸鉀等產(chǎn)品[1-3]。張志軍等[4]研究了用乙醇和硫酸將食品中的肉桂酸鉀衍生為肉桂酸后提取，利用高效氣相色譜儀來(lái)測(cè)定提取后得到的肉桂酸含量，從而計(jì)算出食品中的肉桂酸鉀含量，并通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)衍生條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終肉桂酸鉀的回收率達(dá)到了97.51%，但衍生過(guò)程比較煩瑣，不夠簡(jiǎn)便。王李平等[5]同樣是通過(guò)將食品中的肉桂酸鉀用酸衍生為肉桂酸，再通過(guò)二氯甲烷來(lái)萃取肉桂酸，利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀來(lái)測(cè)定肉桂酸的含量，從而計(jì)算得到食品中肉桂酸鉀的含量，取得了較好的效果，但上述方法檢測(cè)過(guò)程同樣比較煩瑣，且質(zhì)譜儀設(shè)備昂貴，無(wú)法大規(guī)模推廣，且尚未見(jiàn)到肉桂酸鉀的液相檢測(cè)方法的相關(guān)報(bào)道，本文通過(guò)檢測(cè)過(guò)程中液相色譜設(shè)備的重復(fù)性，樣品處理方法的穩(wěn)定性和肉桂酸鉀的回收率，樣品配制后的穩(wěn)定性等來(lái)研究該方法的可行性，建立了一種高效、穩(wěn)定、無(wú)毒的檢測(cè)食品中肉桂酸鉀含量的高效液相色譜法，提高肉桂酸鉀測(cè)定的準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 材料

食品樣品香辣蘿卜干由客戶(hù)提供。

1.2 儀器與試劑

南京科捷高效液相色譜儀LC600，配備了UVD檢測(cè)器；色譜柱為南京杰島C18反相柱，規(guī)格為250 mm×4.6 mm，5 μm；語(yǔ)盟超聲波清洗機(jī)；肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，純度99.81%；蒸餾水為自制二重蒸餾水；甲醇為色譜級(jí)；其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇-0.5%磷酸（50∶50，V/V）溶液；流動(dòng)相流速：1 mL/min；檢測(cè)器光源波長(zhǎng)：285 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精密稱(chēng)取肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品100.0 mg，置于100 mL潔凈的容量瓶中，加適量甲醇溶解并定容至刻度線(xiàn)，搖勻并超聲脫氣，作為儲(chǔ)備液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，移液管精密移取一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液稀釋成一系列所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 樣品的制備

精密稱(chēng)取待測(cè)樣品若干，使用潔凈的研缽將樣品搗碎后轉(zhuǎn)移至燒杯中，適量甲醇沖洗研缽后，向燒杯中添加15 mL甲醇，混合物超聲提取后離心，收集上清液，離心得到的固體再次使用15 mL甲醇沖洗，混合物超聲提取后離心，收集上清液，重復(fù)上述步驟3次，提取樣品中的肉桂酸鉀，集合所收集的上清液，經(jīng)0.22 μm微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，定容至100 mL容量瓶，超聲脫氣，作為待測(cè)液。

1.3.4 測(cè)定方法

（1）高效液相色譜儀重復(fù)性測(cè)試方法。取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣3次，測(cè)定肉桂酸鉀峰面積，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（2）樣品處理方法重復(fù)性測(cè)試方法。精密稱(chēng)取同一樣品3份，按上述樣品處理方法進(jìn)行處理，測(cè)定肉桂酸鉀峰面積，計(jì)算峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（3）樣品中肉桂酸鉀的回收率測(cè)試方法。采用樣品加標(biāo)回收率驗(yàn)證，精密稱(chēng)取同一樣品6份，向3份樣品中加入一定量的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品，3份樣品作為對(duì)照品，6份樣品均按上述樣品的制備方法處理樣品，測(cè)定肉桂酸鉀峰面積，計(jì)算肉桂酸鉀的回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（4）樣品穩(wěn)定性測(cè)試方法。精密稱(chēng)取待測(cè)樣品1份，按上述樣品處理方法處理樣品，每隔3 h進(jìn)樣，測(cè)定肉桂酸鉀峰面積，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

配制濃度為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL和1.0 mg/mL的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定肉桂酸鉀峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖1。由圖1可知，肉桂酸鉀濃度在0～1.0 mg/mL，外標(biāo)曲線(xiàn)擬合度達(dá)到0.999 4，肉桂酸鉀濃度與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系較好。

圖1 肉桂酸鉀濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2 HPLC重復(fù)性驗(yàn)證

取0.2 mg/mL的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣3次，肉桂酸鉀的峰面積和保留時(shí)間如表1所示。由表1可知，肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣3次的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.94%，保留時(shí)間基本一致，說(shuō)明HPLC設(shè)備的重復(fù)性較好。

表1 肉桂酸鉀峰面積和保留時(shí)間

2.3 樣品處理方法重復(fù)性和肉桂酸鉀回收驗(yàn)證

精密稱(chēng)取香辣蘿卜干6份，每份10.000 0 g，編號(hào)為1～6號(hào)樣品，其中4～6號(hào)樣品中均添加肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，1～3號(hào)樣品為對(duì)照樣品，4～6號(hào)樣品為加標(biāo)樣品，6份樣品均按上述樣品處理方法進(jìn)行處理，1～3號(hào)樣品的肉桂酸鉀的峰面積和保留時(shí)間結(jié)果如表2所示。4～6號(hào)樣品的肉桂酸鉀的回收率結(jié)果如表3所示。

表2 肉桂酸鉀峰面積和保留時(shí)間

表3 肉桂酸鉀回收率

由表2、表3可知，1～3號(hào)樣品按上述樣品處理方法處理后，所測(cè)得的肉桂酸鉀相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%，保留時(shí)間基本一致，4～6號(hào)樣品的肉桂酸鉀的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.23%，說(shuō)明上述樣品處理方法穩(wěn)定、可靠，能較好地提取出待測(cè)樣品中的肉桂酸鉀。

2.4 樣品穩(wěn)定性驗(yàn)證

將上述1號(hào)樣品分別靜置3 h和6 h后進(jìn)樣，測(cè)得的肉桂酸鉀峰面積和保留時(shí)間如表4所示。

表4 肉桂酸鉀峰面積和保留時(shí)間

由表4可知，其峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.98%，保留時(shí)間基本一致，說(shuō)明樣品的穩(wěn)定性較好，放置6 h并不會(huì)對(duì)樣品中肉桂酸鉀含量的測(cè)定造成影響。

2.5 樣品中肉桂酸鉀含量的測(cè)定

精密稱(chēng)取香辣蘿卜干1.000 0 g，按上述樣品處理方法處理后上機(jī)檢測(cè)，樣品中肉桂酸鉀含量測(cè)定的液相譜圖見(jiàn)圖2。將峰面積帶入到式（1）計(jì)算樣品中肉桂酸鉀添加量為0.329 0 mg/g。

圖2 產(chǎn)品液相測(cè)定譜圖

式中：w為肉桂酸鉀的添加量，mg/g；m為樣品的質(zhì)量，g；A為峰面積，mAu·s。

3 結(jié)論

該方法能較高效、穩(wěn)定、無(wú)毒地檢測(cè)出食品中肉桂酸鉀的含量，所測(cè)得的數(shù)據(jù)可靠性高，對(duì)于測(cè)定食品及其他化工品中肉桂酸鉀的含量和鑒定商品肉桂酸鉀的質(zhì)量具有一定的參考作用。