π-π堆積的氧化還原型阿霉素脂質體的制備與抗腫瘤活性評價

單 琪,孫東起,鄭海濤,劉鈞華,姚子涵,祝艷平,杜 源,張雷明,凌龍兵

(煙臺大學藥學院,新型制劑與生物技術藥物研究山東省高校協(xié)同創(chuàng)新中心,長效和靶向制劑國家重點實驗室,山東 煙臺 264005)

阿霉素(Doxorubicin,DOX)是目前臨床上最常用的一線抗腫瘤藥物,具有顯著抗腫瘤活性。DOX主要在肝臟代謝,其骨髓抑制和心臟毒性較大,長期使用可引起嚴重的心臟毒性和肝臟損害,導致臨床應用受限[1-3]。脂質體作為近十幾年來被廣泛關注的納米載體,在腫瘤的化學治療、基因治療等方面的靶向遞送中發(fā)揮著重要作用[4-5]。以傳統(tǒng)脂質材料(包括甘油磷脂,鞘磷脂等)為載體,藥物選擇性吸附或包裹于脂質雙分子層或脂質核中,形成納米脂質體給藥系統(tǒng),具有高生物相容性和低毒性。但傳統(tǒng)脂質體因其雙相釋藥特性,前期突釋,后期緩釋,無法實現(xiàn)在靶部位的敏感釋放且載藥量低(<10%)、穩(wěn)定性差,這可能是脂質納米載藥體系并沒有良好的體內抗腫瘤活性的原因[6-8]。到目前為止,還沒有非常有效的方法從新型“磷脂材料設計”層面根本上解決這一難題。本課題設計合成新型“功能化二倍體磷脂材料”,在傳統(tǒng)磷脂材料碳骨架基礎上,內嵌吡啶基與雙硫鍵于磷脂硬脂酸鏈合成功能化磷脂Pyr-SS-PC,并用其構建π-π堆積的DOX脂質體,結構層面賦予傳統(tǒng)載藥脂質體的“高載藥量和促釋放”功能。考察DOX包封率及體外響應釋藥行為,構建乳腺癌細胞MCF-7荷瘤裸鼠模型,研究DOX/Pyr-SS-PC Lips對實體瘤的腫瘤抑制率,為進一步研究脂質體劑型積累實驗基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜儀(美國Thermo Fisher公司);Q Exactive液相色譜-高分辨質譜聯(lián)用儀(美國Thermo Fisher公司);UltraShield核磁共振儀(瑞士Bruker公司);RE-2000B旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);Zetasizer Nano ZS90納米粒度電位儀(英國馬爾文公司);SpectraMax M3全波長掃描酶標儀(美國MD公司);JEOL JEM-1230透射電子顯微鏡(日本電子株式會社)。

1.2 材料

阿霉素(北京中碩醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司,批號J0614A,純度> 98%);大豆卵磷脂、膽固醇(上海麥克林生化科技有限公司,純度> 99%);DSPE-PEG2000(西安瑞禧生物科技有限公司);巰基十一烷酸、三苯基氯甲烷、二硫二吡啶、N,N'-羰基二咪唑(CDI)和1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)均購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清(美國Gibco公司);葡聚糖凝膠G50(上海笛柏生物科技有限公司);透析袋(MWCO 3500)(Sigma-Aldrich,美國);其他試劑均為市售分析純。MCF-7乳腺癌細胞株、HeLa宮頸癌細胞株和HepG-2肝癌細胞株(中國醫(yī)學科學腫瘤細胞庫,自行傳代);Balb/c裸鼠,SPF級,雌性,體重18～20 g。

2 方 法

2.1 Pyr-SS-PC的合成

Pyr-SS-PC磷脂的合成主要包括三步:(1)三苯基醚保護巰基十一烷酸Tri-S-COOH;(2)在CDI/DBU強催化條件下,Tri-S-COOH與GPC反應生成雙三苯基醚保護十一巰基烷酸甘油磷脂酰膽堿(Tri-S-PC);(3)脫保護的Tri-S-PC經巰基-二巰基交換反應得到吡啶基雙硫甘油磷脂酰膽堿(Pyr-SS-PC)。具體的反應路線如圖1所示。

圖1 吡啶基雙硫磷酸膽堿Pyr-SS-PC合成路線

2.1.1 Tri-S-COOH的合成 將1 g(4.58 mmol)巰基十一烷酸溶解于20 mL無水二氯甲烷中,攪拌中逐滴加入2.55 g(9.16 mmol)三苯基氯甲烷的二氯甲烷溶液,室溫反應6 h。反應結束后,濃縮反應液,用200 mL石油醚重結晶2次,得到白色固體2.01 g,收率95.2%。1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ7.36～7.23 (m, 9H), 2.59 (s, 1H), 2.27 (s, 1H), 1.63 (s, 1H), 1.47 (s, 1H), 1.40 (d,J=7.7 Hz, 2H), 1.31 (dd,J=18.0, 5.5 Hz, 5H);13C NMR (125 MHz, CDCl3):δ177.13 (s, 1H), 145.34 (s, 7H), 129.38 (s, 14H), 129.13 (s, 15H), 127.79 (s, 3H), 64.64 (s, 2H), 34.64 (s, 2H), 30.23 (s, 5H), 28.95 (t,J=1.6 Hz, 15H), 24.81 (s, 2H)。HRMS, ESI+,m/z: Calcd for C30H36O2S [M-H]-459.24， found 459.24。

2.1.2 Tri-S-PC的合成 將0.46 g(0.99 mmol)三苯基醚保護巰基十一烷酸和0.24 g/1.49 mmol CDI溶解于15 mL無水二甲基亞砜中,35 ℃活化2 h。向上述反應體系中,繼續(xù)加入0.10 g/0.39 mmol 甘油磷酸膽堿和0.23 g(1.49 mmol)DBU,45 ℃條件下反應過夜。反應結束后,用含有10%冰醋酸的乙醚溶液沉降反應液,濃縮后利用三氯甲烷/甲醇/水(體積比65∶25∶4)柱層析,得到0.64 g雙三苯基醚保護巰基烷酸甘油磷脂酰膽堿,收率56.4%。1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ7.40～7.34 (m, 14H), 7.34～7.25 (m, 16H), 5.43 (s, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.29 (d,J=8.0 Hz, 3H), 3.99 (d,J=30.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.24 (s, 9H), 2.52 (s, 2H), 2.47～2.38 (m, 6H), 1.74 (s, 1H), 1.73～1.64 (m, 6H), 1.49～1.41 (m, 6H), 1.41～1.13 (m, 35H).13C NMR (125 MHz, CDCl3):δ174.55 (s, 1H), 174.36 (s, 2H), 145.34 (s, 14H), 129.38 (s, 28H), 129.13 (s, 29H), 127.79 (s, 14H), 69.29 (s, 2H), 68.20 (s, 2H), 66.81 (s, 2H), 64.64 (s, 5H), 64.25 (s, 2H), 60.53 (s, 1H), 54.72 (s, 5H), 34.09 (d,J=15.0 Hz, 4H), 30.23 (s, 10H), 29.07～28.74 (m, 47H), 25.33 (s, 5H)。 HRMS, ESI+,m/z: Calcd for C68H88NO8PS2[M+H]+1 142.57， found 1 142.57。

2.1.3 Pyr-SS-PC的合成 將0.2 g(0.17 mmol)雙三苯基醚保護巰基烷酸甘油磷脂酰膽堿溶解于10 mL三氟乙酸/二氯甲烷(體積比1∶1)溶液中,室溫反應4 h。無需進一步后處理,在50 ℃下,利用旋轉蒸發(fā)法除去三氟乙酸脫保護試劑。向上述體系中,加入0.15 g(0.68 mmol)二硫二吡啶的二氯甲烷溶液(10 mL),繼續(xù)室溫反應24 h。反應結束后,濃縮后利用三氯甲烷/甲醇/水(體積比65∶25∶4)柱層析,得到0.13 g雙巰十一吡啶基甘油磷脂酰膽堿,收率86.3%。1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ8.26 (dd,J=7.5, 1.4 Hz, 3H), 7.57～7.52 (m, 3H), 7.35 (dd,J=7.5, 1.4 Hz, 3H), 7.20～7.15 (m, 3H), 5.45 (s, 1H), 4.63～4.42 (m, 2H), 4.42～4.38 (m, 1H), 4.33 (s, 4H), 4.01～3.97 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.24 (s, 12H), 2.56～2.52 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 1.69 (d,J=5.9 Hz, 5H), 1.63～1.60 (m, 4H), 1.54 (dd,J=47.8, 3.9 Hz, 2H), 1.60～1.16 (m, 34H).13C NMR (125 MHz, CDCl3):δ174.55 (s, 2H), 174.36 (s, 1H), 160.01 (s, 3H), 145.72 (s, 3H), 139.66 (s, 3H), 121.37 (s, 3H), 119.67 (s, 1H), 69.29 (s, 1H), 68.20 (s, 1H), 66.81 (s, 1H), 64.25 (s, 1H), 60.53 (s, 1H), 54.72 (s, 5H), 38.03 (s, 3H), 34.09 (d,J=15.0 Hz, 3H)。 28.93 (dd,J=6.7, 5.0 Hz, 19H), 25.33 (s, 1H). HRMS, ESI+,m/z: Calcd for C40H66N3O8PS2[M+H]+876.35， found 876.35。

2.2 阿霉素脂質體的制備與表征

利用超聲波分散法制備阿霉素脂質體(DOX/Pyr-SS-PC Lips)。分別稱取處方量的56 mmol Pyr-SS-PC、35 mmol大豆卵磷脂、38 mmol膽固醇、6 mmol DSPE-PEG2000和6 mmol DOX溶解于15 mL的氯仿-甲醇溶液中(體積比4∶1)。充分振蕩,使其混合均勻。在35 ℃減壓旋轉蒸發(fā)30 min除去溶劑,加入15 mL磷酸鹽緩沖溶液(PBS,pH=7.4),50 ℃水化孵育1 h。將所得的混懸液置于200 W探頭下超聲20 min后,依次經過直徑800、450和220 nm聚碳酯膜制得DOX/Pyr-SS-PC Lips。

粒徑與Zeta電位測定:取上述制備的DOX/Pyr-SS-PC Lips用納米粒度電位儀(DLS)測定其粒徑、粒徑分布和Zeta電位。測試條件:溫度為25 ℃,平衡時間9 min,散射角173°。每個樣品重復測試三次。

形態(tài)觀察:采用透射電子顯微鏡(TEM)觀察脂質體形貌特征。測試方法:取5 μL DOX/Pyr-SS-PC Lips溶液滴加到300目碳膜支撐的銅網(wǎng)上,晾干后滴加磷鎢酸染色液(質量濃度2%)進行負染,濾紙拭去多余染液。室溫干燥后用TEM觀察拍照。

2.3 阿霉素脂質體的包封率的測定

采用超濾離心-紫外分光光度計法測定脂質體中DOX包封率,檢測波長為480 nm。精密移取兩份各1 mL的DOX/Pyr-SS-PC Lips,一份置于Millipore Ultra-4超濾管中,4500 r/min離心10 min。收集下清液,用色譜級甲醇稀釋10倍,紫外分光光度計測定吸光度值A1;另一份直接用色譜級甲醇稀釋10倍,測定其吸光度值A2。按下述公式計算DOX包封率(EE):EE=(A1/A2)×100%[9]。

2.4 π-π堆積作用的表征

利用紫外-可見吸收光譜檢測載藥納米脂質體Pyr-SS-PC與DOX之間存在的π-π堆積作用[10]。精確移取0.5 mL的游離DOX甲醇溶液和DOX/Pyr-SS-PC Lips,對比分析實驗組的紫外-可見吸收光譜數(shù)據(jù),判斷載體Pyr-SS-PC與藥物DOX的π-π堆積作用。

2.5 體外釋藥及血漿穩(wěn)定性

利用動態(tài)透析法考察DOX/Pyr-SS-PC Lips體外響應釋藥行為。向透析袋(MWCO 3500 U)中加入脂質體2 mL,將透析袋置于35 mL的PBS(pH=7.4)或含有10 mmol/L GSH的PBS溶出介質中透析。在37 ℃、100 r/min的恒溫振蕩器中震蕩,于1、2、4、6、12、24、48、72 h 取1 mL透析液測定480 nm下DOX的吸光度,計算DOX脂質體的累積釋放量。

取Balb/c昆明小鼠血漿適量,離心得上清液。向1 mL的血清中分別加入100 μL的DOX/Pyr-SS-PC Lips(0.1 mg DOX/mL)和同濃度、同體積的游離DOX溶液,放置于37 ℃中。在預定的時間點,取20 μL試驗用色譜級甲醇稀釋10倍,利用紫外分光光度計測定DOX于480 nm下吸光度值。

2.6 體外細胞毒性實驗

DOX/Pyr-SS-PC Lips的體外細胞毒性采用噻唑藍(MTT)法進行評價,并以游離鹽酸阿霉素水溶液作為陽性對照組[11]。取對數(shù)生長期的人乳腺癌細胞MCF-7、宮頸癌細胞HeLa和肝癌細胞HepG-2按1×104個/孔接種于96孔板中,在5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱內孵育過夜。設置不含DOX的RPMI-1640培養(yǎng)基為空白組,向培養(yǎng)板中分別加入不同濃度的游離DOX和DOX/Pyr-SS-PC Lips,每組設置6復孔。于加藥后培養(yǎng)24 h,每孔加入20 μL、5 mg/mL MTT溶液繼續(xù)孵育4 h。棄去上清液,每孔加入150 μL DMSO,利用酶標儀檢測490 nm處每孔吸光度(A),吸光度以平均值作為最終結果。計算細胞增殖抑制率:細胞抑制率=[1-(A實驗組-A空白組)/(A對照組-A空白組)]×100%。

采用回歸方程式計算游離DOX和DOX/Pyr-SS-PC Lips對3株細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。

2.7 體內抗腫瘤活性

(1)荷MCF-7腫瘤裸鼠模型:Balb/c裸鼠飼養(yǎng)在標準清潔級SPF環(huán)境中,溫度18～25 ℃、濕度40%～60%。收集濃度為1×107個/mL的人乳腺癌MCF-7細胞懸液,并接種于Balb/c裸鼠右側腋窩皮下,200 μL/只。

(2)給藥方式:待腫瘤體積生長至100～150 mm3,隨機分為3組,每組4只,按照如下給藥方案,尾靜脈注射給藥。I. 0.9%生理鹽水注射液組(0.1 mL/10 g,間隔1 d給藥,共給藥8次);II.游離DOX注射液組(5 mg DOX/kg,間隔1 d給藥,共給藥8次);III. DOX/Pyr-SS-PC Lips(5 mg DOX/kg,間隔1 d給藥,共給藥8次)。

(3)抑瘤率:給藥結束后,將各實驗組裸鼠經乙醚麻醉后脫頸處死,手術剝取瘤塊稱重,并計算抑瘤率。抑瘤率=[(給藥組平均瘤重-模型組平均瘤重)/模型組平均瘤重]×100%。

2.8 統(tǒng)計學方法

3 結果與討論

3.1 Pyr-SS-PC的合成及表征

根據(jù)圖1實驗反應路線合成吡啶基雙硫Pyr-SS-PC磷脂,并利用HRMS、1H NMR和13C NMR 對各合成中間體與產物進行詳細的結構表征。首先,巰基十一烷酸在堿性TEA催化環(huán)境下,與巰基保護劑三苯基氯甲烷(TriCl)反應,得到Tri-S-COOH;之后,Tri-S-COOH與甘油磷酸膽堿(GPC)在CDI/DBU強催化條件下,生成Tri-S-PC偶聯(lián)物。最后,通過巰基—二巰基交換反應,二硫二吡啶與巰基脫保護的Tri-S-PC反應以獲得產物吡啶基雙硫甘油磷脂酰膽堿Pyr-SS-PC。

利用HRMS、1H NMR和13C NMR對Pyr-SS-PC的精準化學結構進行表征(圖2)。

圖2 Pyr-SS-PC磷脂結構表征

如圖2(a)所示,Pyr-SS-PC產物分子離子峰為876.35([M+H]+),與理論計算值876.35([M+H]+)相一致,初步證明產物結構。由核磁氫譜圖2(b)可知,在磷脂Pyr-SS-PC中,化學位移3.34處信號峰歸屬于GPC中親水頭膽堿結構-N+(CH3)3的甲基質子峰;化學位移1.24～1.68處信號峰歸屬于巰基十一烷酸中亞甲基-CH2-質子峰;此外,在7.05～8.42化學位移處出現(xiàn)了典型的Pyr-SS-PC中吡啶環(huán)結構質子氫信號峰,特征性證明Pyr-SS-PC磷脂的成功合成。就核磁碳譜圖2(c)而言,在54.7(-N+(CH3)3)、28.9(-CH2-)及119.6～149.5(Pyridyl)等處信號峰同樣存在,進一步說明產物合成。

綜上,HRMS、1H NMR和13C NMR的檢測結果表明,已成功制備新型π-π堆積吡啶基雙硫Pyr-SS-PC磷脂,且反應轉化率良好、純度高,為下一步納米脂質體制備及表征提供充足的產物來源。

3.2 DOX/Pyr-SS-PC Lips理化性質

Pyr-SS-PC分子結構中含有疏水烷基長鏈和親水磷脂酰膽堿,具兩親性。通過親疏水的相互作用,在水相體系中能夠發(fā)生自組裝形成納米脂質體結構?；诖?利用超聲波分散法制備DOX/Pyr-SS-PC Lips,即將兩親性Pyr-SS-PC磷脂與其他助磷脂(卵磷脂、膽固醇和DSPE-PEG2000)、藥物DOX共混合,真空旋蒸起膜后水化,形成π-π堆積高載藥量隱形DOX/Pyr-SS-PC Lips。此外,含有雙硫鍵的Pyr-SS-PC能夠賦予脂質體在腫瘤微環(huán)境還原響應特性,應激釋放負載藥物。DSPE-PEG2000嵌入可為DOX/Pyr-SS-PC Lips提供血液長循環(huán)作用,減少被內皮網(wǎng)狀系統(tǒng)(RES)攝取,避免快速消除。

利用DLS和TEM對制備的DOX/Pyr-SS-PC Lips進行粒徑、粒徑分布和納米形貌檢測,結果見圖3。DOX/Pyr-SS-PC Lips的粒徑為160.3 ± 2.6 nm,多分散系數(shù)(PDI)值 0.133,Zeta電位-30.8 mV。該結果表明,DOX/Pyr-SS-PC Lips的粒徑分布呈現(xiàn)典型的正態(tài)分布,PDI值說明脂質體粒徑分布均一集中且Zeta 電位處于-40～-20 mV,呈負電性,具有一定的穩(wěn)定性。據(jù)文獻報道,腫瘤細胞間距約100～200 nm,正常組織間距50 nm左右。良好的DOX/Pyr-SS-PC Lips粒徑分布(100～200 nm)易進入腫瘤組織而非正常組織,實現(xiàn)減毒增效[12]。

從圖3(b)可以看到,脂質體呈球形且具有明顯的磷脂雙分子層結構,視野內大小分布均勻,粒徑約為120 nm。此外,TEM圖中DOX/Pyr-SS-PC Lips粒徑要低于DLS結果,這主要歸因于脂質體在進行TEM觀察時,處于一種真空干燥的狀態(tài),外層親水性磷脂片段坍塌,造成脂質體皺縮、粒徑減小。

圖3 DOX/Pyr-SS-PC Lips理化性質表征

3.3 包封率與π-π堆積作用

按照“1.2.2”項下方法制備負載DOX的Pyr-SS-PC功能化脂質體,并以相同藥脂比的普通脂質體(DOX/Lecithin Lips)作為對照組,考察Pyr-SS-PC Lips基于藥物與磷脂材料之間π-π堆積作用的包封率(EE)和載藥量(DLC),結果見表1。

表1 不同藥脂比條件下普通DOX/Lecithin Lips與DOX/Pyr-SS-PC Lips的包封率和載藥量

如表1所示,隨著藥脂比由1∶12降至1∶20,兩種脂質體的包封率明顯增加,但載藥量降低。值得注意的是,相比于普通DOX/Lecithin Lips,Pyr-SS-PC磷脂載體與藥物DOX分子之間存在較強的π-π堆積作用,使脂質體(藥脂比1∶20)的包封率從75.23%提高到85.62%,實現(xiàn)對藥物的穩(wěn)定高效包載。

進一步,利用紫外-可見吸收光譜驗證載藥納米脂質體Pyr-SS-PC與DOX之間存在的π-π堆積作用。紫外-可見吸收光譜顯示:游離DOX在480 nm處有明顯的最大吸收峰,而DOX被負載到Pyr-SS-PC功能化脂質體時,其紫外吸收峰發(fā)生偏移至510 nm(圖4)。上述結果證明納米粒中負載DOX與Pyr-SS-PC磷脂之間存在強烈的分子間作用力π-π堆積,引發(fā)DOX吸收峰紅移。

圖4 游離DOX/和DOX/Pyr-SS-PC Lips的紫外光譜

3.4 體外響應釋放行為

利用動態(tài)透析法考察DOX/Pyr-SS-PC Lips在生理環(huán)境下(PBS,pH=7.4)及模擬癌細胞內還原條件下(10 mmol/L GSH,PBS)體外響應釋藥行為。從圖5可以得出,DOX/Pyr-SS-PC Lips在37 ℃、pH=7.4的PBS緩沖溶液中24 h累積釋放量< 20%,且前期釋放速度較快、后期逐漸變緩,表現(xiàn)出一定的緩釋性。然而,在10 mmol/L GSH還原濃度下,脂質體響應釋放DOX明顯加快,大約87%的DOX在24 h內釋放。GSH體外藥物釋放結果表明DOX/Pyr-SS-PC Lips釋藥效率顯著高于中性PBS條件下釋放速率,與預期結果一致。推測其在腫瘤細胞高表達GSH環(huán)境下,能夠實現(xiàn)還原敏感觸發(fā)式DOX藥物胞內釋放,增強藥效[13]。

脂質體屬于熱力學不穩(wěn)定體系。為了測定DOX/Pyr-SS-PC Lips的體外穩(wěn)定性,進一步通過脂質體與血清共孵育考察其DOX體外存留率,結果見圖6。DOX/Pyr-SS-PC Lips在血漿中,12 h后體外存留率> 90%,說明可以較穩(wěn)定存在。這可能是由于載體Pyr-SS-PC與藥物之間存在強烈的分子間π-π堆積作用,結構更緊密,不利于藥物向外自由擴散,提高了穩(wěn)定性[14]。

圖5 DOX/Pyr-SS-PC Lips在pH=7.4和10 mmol/L GSH條件下的體外釋放曲線

圖6 DOX/Pyr-SS-PC Lips的血漿穩(wěn)定性曲線

3.5 細胞毒性

利用MTT法評估DOX/Pyr-SS-PC Lips在人乳腺癌細胞MCF-7、宮頸癌細胞HeLa和肝癌細胞HepG-2中體外細胞毒性,并計算實驗組的半數(shù)抑制濃度IC50,結果見表2。游離DOX和DOX/Pyr-SS-PC Lips對MCF-7、HeLa和HepG-2細胞均具有一定的抑制增殖作用,呈現(xiàn)出濃度依賴性特點。然而,DOX/Pyr-SS-PC Lips對于MCF-7、HeLa和HepG-2細胞的IC50均分別略低于游離DOX組IC50。該結果說明在相同濃度下,游離DOX的細胞毒性大于脂質體制劑,主要歸因于負載于脂質體中DOX存在水解釋放過程,且游離DOX能夠通過自由擴散形式進入細胞內發(fā)揮活性,而納米脂質體需要被癌細胞特異性胞吞,攝取過程的差異可能導致DOX/Pyr-SS-PC Lips體外細胞毒性較低。

表2 DOX/Pyr-SS-PC Lips對腫瘤細胞的體外細胞毒性

3.6 體內抗腫瘤活性

采用荷MCF-7乳腺癌Balb/c裸鼠為動物模型,研究DOX/Pyr-SS-PC Lips的體內抗腫瘤活性。實驗結果如圖7(a)所示,由于腫瘤的惡性增殖能力,生理鹽水組的裸鼠腫瘤塊增長迅速,給藥結束后體積達到3.23 cm3。在DOX/Pyr-SS-PC Lips給藥組腫瘤的增長受到明顯的抑制,抑瘤結束后腫瘤僅增長至0.64 cm3,腫瘤抑制率TIR%為65.9%(圖7(c)、(d)),且明顯高于游離DOX給藥組(TIR% 52.31%)。此外,給藥脂質體組和生理鹽水組的荷瘤裸鼠體重增長速率保持一致,無明顯的毒副作用(圖7(b))。以上結果說明Pyr-SS-PC Lips能有效負載DOX藥物,在動物水平上仍具有良好的抗腫瘤效果,減毒增效。

4 結 論

本研究成功合成了一種新型的π-π堆積的氧化還原型磷脂酰膽堿Pyr-SS-PC?；讦?π堆積作用,該磷脂衍生物能夠高效、穩(wěn)定地負載DOX,粒徑為160.3 ± 2.6 nm,且在腫瘤細胞內高GSH條件下響應釋藥,抑制細胞增殖。尤其突出的是,DOX/Pyr-SS-PC脂質體顯著降低游離DOX的體內毒副作用,實現(xiàn)65.9%的MCF-7腫瘤生長抑制率,為乳腺癌的體內治療奠定基礎,并有望成為一種新型的磷脂材料。