防治蔬菜灰霉病枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的研制

敖明遠(yuǎn)，張曉云，郭慶港，曲遠(yuǎn)航，鹿秀云，崔建州，李社增*，馬 平

（1. 河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所/河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心/農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，保定 071000；2. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，保定 071000）

蔬菜（番茄、黃瓜等）灰霉病是由灰葡萄孢菌Botrytis cinerea引起的一類真菌性病害，在我國絕大多數(shù)保護(hù)地栽培蔬菜區(qū)均有發(fā)生，常造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。蔬菜灰霉病的防治主要依賴化學(xué)殺菌劑，但長期大量、頻繁使用化學(xué)農(nóng)藥導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性、化學(xué)農(nóng)藥殘留及環(huán)境污染等一系列問題[2-5]。因此，為達(dá)到減量或替代化學(xué)農(nóng)藥使用的目的，研發(fā)和利用環(huán)保高效的新型微生物殺菌劑，成為國內(nèi)外植物保護(hù)工作者的研究熱點(diǎn)。

劑型是農(nóng)藥有效成分的最終使用形式或狀態(tài)，生防微生物可通過加工成合適的劑型，達(dá)到提高其生物活性、擴(kuò)大使用方式和用途等目的。微生物殺菌劑的劑型主要有固態(tài)制劑（如粉劑、顆粒劑、水分散粒劑和可濕性粉劑等）和液態(tài)制劑（如水劑、懸浮劑等）[6]。目前，美國已有35種防治灰霉病的微生物殺菌劑通過農(nóng)藥登記，有效成分涉及枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis、解淀粉芽胞桿菌B. amyloliquefaciens、短小芽胞桿菌B. pumilus、地衣芽胞桿菌B. licheniformis、鉤狀木霉菌Trichoderma hamatum、熒光假單胞菌Pseudomonas fluorescens、奧德曼細(xì)基格孢菌Ulocladium oudemansii、鏈孢粘帚霉Gliocladium catenulatum、灰綠鏈霉菌Streptomyces griseoviridis、利迪鏈霉菌S. lydicus、酵母（Yesat）、黑酵母菌Aureobasidium pullulans、寡雄腐霉Pythium oligandrum及麝香霉Muscodor albus；相關(guān)劑型包括乳油（10個產(chǎn)品，28.6%）、懸浮劑（5個產(chǎn)品，14.3%）、顆粒劑（2個產(chǎn)品，5.7%）、可濕性粉劑（5個產(chǎn)品，14.3%）、可溶液劑（6個產(chǎn)品，17.1%）、水劑（2個產(chǎn)品，5.7%）及粉劑（1個產(chǎn)品，2.9%）7種[7]，乳油與可溶液劑為美國登記的防治灰霉病的微生物殺菌劑的主要劑型。歐盟僅有3種防治灰霉病的微生物殺菌劑通過農(nóng)藥登記，有效成分分別為解淀粉芽胞桿菌 FZB24、粉紅粘帚霉Coniothyrium minitansJ1446及釀酒酵母Saccharomyces cerevisiaeLAS02，劑型有可濕性粉劑（2個產(chǎn)品，67%）與水分散粒劑（1個產(chǎn)品，33%）2種[8]。我國已有 28個防治灰霉病的微生物殺菌劑產(chǎn)品通過國家農(nóng)藥登記，有效成分涉及哈茨木霉菌T.harzianum、木霉菌T.sp.、枯草芽胞桿菌、海洋芽胞桿菌B. marinus、甲基營養(yǎng)型芽胞桿菌B. methylotrophicus及熒光假單胞菌P. fluorescens，防治對象有草莓灰霉病、番茄灰霉病、黃瓜灰霉病、葡萄灰霉病及人參灰霉病等6種病害，但在劑型方面表現(xiàn)單一，僅有可濕性粉劑（25個產(chǎn)品，89%）和水分散粒劑（3個產(chǎn)品，11%）2種劑型[9]。相比美國而言，我國的微生物殺菌劑劑型種類單一。此外，顆粒劑、水分散粒劑、懸浮劑和可溶液劑一般被認(rèn)為是環(huán)保型制劑，而其他制劑在應(yīng)用過程中均產(chǎn)生二次污染，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足綠色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需求，因此，開發(fā)新型環(huán)保型制劑十分必要。

水分散片劑是列于我國國家農(nóng)藥制劑標(biāo)準(zhǔn)中的劑型，指在水中崩解、有效成分分散成懸浮液的片狀制劑[10]。在加工過程中，該劑型將母藥、潤濕劑、分散劑、崩解劑、粘結(jié)劑及填料等混合后經(jīng)高壓壓制而成重量固定的片劑，具備入水后崩解快、有效成分能迅速均勻分布在溶液體系中的特點(diǎn)[11]。該類制劑運(yùn)輸、攜帶及使用方便，同時在生產(chǎn)環(huán)節(jié)和使用過程中無粉塵飛揚(yáng)，最大程度的減少了環(huán)境污染[12,13]。但由于水分散片劑的加工工藝還存在諸多問題，導(dǎo)致國內(nèi)水分散片制劑的品種較少。目前僅有2個水分散片劑產(chǎn)品通過國家農(nóng)藥登記，其有效成分分別為苯噻?！の宸恰は趸遣荩ǔ輨?，PD20211114）與1-甲基環(huán)丙烯（植物生長調(diào)節(jié)劑，PD20170964）[9]；尚無微生物農(nóng)藥水分散片劑的登記，同時有關(guān)微生物農(nóng)藥水分散片劑配方篩選的報道亦較少，王勇等[14]、呂躍東等[15,16]曾報道綠色木霉·烯酰嗎啉水分散片劑300～600倍液能夠有效防治番茄灰霉病、黃瓜枯萎病及棉花黃萎病，防效分別達(dá)到 83%～95%、81%～89%與 88%～97%。本研究以有效防治蔬菜灰霉病的生防枯草芽胞桿菌BAB-1[17]為研究對象，通過對適用助劑（崩解劑、粘結(jié)劑、分散劑）種類和用量進(jìn)行篩選，確定水分散片劑的適宜配方，并采用盆栽試驗(yàn)評價其防治效果，為該菌株進(jìn)一步產(chǎn)業(yè)化提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試藥劑：枯草芽胞桿菌BAB-1（CGMCC No. 2099）母藥，由河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所生產(chǎn)，含量為2×1010CFU/g；2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑（PD20170879），山東康惠植物保護(hù)有限公司生產(chǎn)；露娜森（PD20152429，43%氟菌·肟菌酯），拜耳股份公司生產(chǎn)。

供試助劑：3種崩解劑、5種分散劑及5種粘結(jié)劑，詳細(xì)信息見表1。

表1 供試助劑信息表Table 1 The information of tested additives

供試作物品種：黃瓜品種為津優(yōu)1號，天津科潤農(nóng)業(yè)科技股份有限公司生產(chǎn)；番茄品種為奧賽特（968），北京碩源種子有限公司生產(chǎn)。

1.2 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑配方助劑種類篩選

以枯草芽胞桿菌BAB-1菌株的存活情況為評價指標(biāo)，依據(jù)各供試助劑與菌株BAB-1間的生物相容性而確定助劑種類。針對各助劑在水中的溶解性設(shè)計(jì)以下兩種測定方法。

1.2.1 可溶于培養(yǎng)基的助劑與菌株BAB-1間生物相容性 崩解劑與分散劑均可溶于水，故采用平板菌落計(jì)數(shù)法評價這兩類助劑與菌株BAB-1的相容性。參考劉盼西等[18]方法，并略作修改。稱取BAB-1菌株母藥10.0 g，加入到含有90 mL無菌水的三角瓶中，180 r/min振蕩培養(yǎng)30 min，得到濃度為0.1 g/mL的溶液，采用系列稀釋法制成1×10-7和1×10-8g/mL稀釋液，各取100 μL分別均勻涂布于助劑終濃度為1%、3%、5%（w/v）的LB固體培養(yǎng)基（胰蛋白胨10.0 g，酵母浸粉5.0 g，氯化鈉5.0 g，瓊脂12.0 g，蒸餾水1000 mL）平板上，35 ℃恒溫培養(yǎng)12 h后記錄每個平板上的菌落數(shù)。每個供試助劑每個濃度處理重復(fù)3次，以不添加助劑的LB平板作為對照。

1.2.2 不溶于培養(yǎng)基的助劑與BAB-1菌株間相容性 由于粘結(jié)劑在水中溶解性能差，故本部分主要針對粘結(jié)劑開展生物相容性研究。將供試粘結(jié)劑按1%、3%、5%（w/v）的比例與LB培養(yǎng)基混合，經(jīng)濕熱滅菌后充分混合制成LB固體培養(yǎng)基平板，將活化的菌株BAB-1單菌落劃線接種于含有不同粘結(jié)劑的平板上，30 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察其生長情況。每種供試粘結(jié)劑每個濃度處理重復(fù)3次，以不添加粘結(jié)劑的LB固體培養(yǎng)基平板作為對照。

1.3 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑崩解劑最佳用量的確定

固定水分散片劑配方中其他組分不變，采用L9(33)正交表進(jìn)行3因素3水平正交試驗(yàn)，以崩解時間作為評價指標(biāo)，確定最佳崩解劑的用量及適宜組合，試驗(yàn)因素水平設(shè)置列于表2。

表2 崩解劑優(yōu)化正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平Table 2 The factors and levels of disintegrant in orthogonal test

1.4 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑粘結(jié)劑及其用量的篩選

固定水分散片劑配方中其他組分不變，單因素更換不同比例的粘結(jié)劑壓制成水分散片劑，參考范春然[19]的方法，以片劑的外觀和可壓性作為考察指標(biāo)，片劑表面光潔度和可壓性分別分為5級，最優(yōu)的記5分，最差的記1分，以二者得分之和評價片劑優(yōu)劣，得分最高者為最佳組合。

1.5 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑分散劑用量的確定

固定水分散片劑配方中其他組分不變，單因素更換不同比例的分散劑（1%、2%、3%及 4%），壓制成水分散片劑，以懸浮率為指標(biāo)，確定分散劑的最佳用量。

1.6 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的加工方法

將一定比例的崩解劑、粘結(jié)劑及分散劑與菌株BAB-1母藥混合，經(jīng)混合機(jī)（VH-2型，上海天闔機(jī)械設(shè)備有限公司）充分混勻后，用單沖電動壓片機(jī)（DTB-3型，上海天闔機(jī)械設(shè)備有限公司生產(chǎn)）直接干粉壓片成水分散片，獲得枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑。

1.7 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑質(zhì)量指標(biāo)測定

根據(jù)《中華人民共和國藥典》中水分散片劑或微生物農(nóng)藥相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)中的測定方法對水分散片劑的活菌含量、pH值、崩解時間、片重差異、懸浮率等性狀進(jìn)行測定。

1.7.1 活菌含量測定 采用平板菌落計(jì)數(shù)法[20]，測定水分散片劑的活菌含量。

1.7.2 pH值測定 隨機(jī)抽取水分散片1片，投入50 mL水中，充分溶解攪勻測定pH值，重復(fù)6次[21]。

1.7.3 崩解時限檢查 隨機(jī)抽取水分散片1片，投入裝有200 mL水的燒杯中，水溫為15 ℃～25 ℃，當(dāng)片劑或碎片周圍氣體不再逸出，片劑應(yīng)崩解、溶解或分散于水中，此時結(jié)束計(jì)時，重復(fù)6次[21]。

1.7.4 片重差異測定 隨機(jī)抽取水分散片20片，稱量總重量，求得平均片重后，再分別稱定各片重量。每片的重量與平均質(zhì)量相比，片重差異需在±5%以內(nèi)，超過重量差異限度數(shù)量不多于2片，且不能有1片超過限度1倍[21]。

1.7.5 懸浮率測定 懸浮率測定采用國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥可濕性粉劑懸浮率測定方法GB/T14825-2006[22]。

1.8 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑對蔬菜灰霉病的防效評價

采用盆栽試驗(yàn)評價枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑對番茄灰霉病與黃瓜灰霉病的防治效果。

試驗(yàn)共設(shè)5個處理：枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑500倍水稀釋液；枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑1000倍水稀釋液；2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑500倍水稀釋液；露娜森1000倍水稀釋液以及清水對照。

選擇生長10 d左右子葉完全展開的黃瓜幼苗及生長60 d左右3～4片真葉的番茄幼苗，將不同藥液均勻噴施于黃瓜與番茄葉面（平均4 mL/株），待葉面藥液自然風(fēng)干24 h后，將番茄灰霉病病原菌灰葡萄孢菌 BC-15（河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離并保存）菌盤（φ=5mm）貼接于黃瓜葉片中部及番茄每片復(fù)葉上部3片小葉中部。每處理3次重復(fù)，每重復(fù)10株。病原菌接種后移入25 ℃恒溫、光照/黑暗（16 h/8 h）、相對濕度90%的人工氣候室內(nèi)，培養(yǎng)3 d后開始觀察發(fā)病情況，當(dāng)空白對照充分發(fā)病時，按下面的分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查各處理發(fā)病情況，并計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。

病情嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，無病斑；1級，病斑面積占葉面積5%以下；3級，病斑面積占葉面積5%～15%；5級，病斑面積占葉面積16%～25%；7級，病斑面積占葉面積26%～50%；9級，病斑面積占葉面積50%以上。病情指數(shù)＝Σ（各級病葉數(shù)×相應(yīng)病級值）/（調(diào)查葉總數(shù)×最高病級值）×100，防治效果（%）＝（對照病情指數(shù)－處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)×100。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)分析皆采用minitab16軟件進(jìn)行處理；應(yīng)用SPSS 19.0軟件鄧肯氏新復(fù)極差多重比較法對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 助劑與枯草芽胞桿菌BAB-1的生物相容性

采用平板菌落計(jì)數(shù)法研究3種崩解劑及5種分散劑與枯草芽胞桿菌BAB-1的生物相容性。結(jié)果表明，崩解劑酒石酸、碳酸氫鈉、氯化鈉與菌株BAB-1生物相容性較好，在1%、3%及5%濃度時該菌株均可良好生長且無顯著性差異（圖1A-C）。分散劑NNO與菌株BAB-1生物相容性最好，在1%、3%與5%濃度下該菌株均可良好生長且與對照無顯著性差異；GY-D10與菌株BAB-1生物相容性較好，在1%與3%濃度下不影響該菌株生長，但5%濃度時菌株BAB-1生長顯著低于對照。MF在1%和3%濃度時，菌株BAB-1生長顯著低于與對照，5%濃度時則完全受到抑制。木質(zhì)素磺酸鈉和SP-2836與BAB-1菌株生物相容性較差，僅在1%濃度時菌株BAB-1能夠生長，并顯著低于對照，3%和5%濃度時則完全受到抑制（圖2A-C）。

圖1 不同崩解劑對枯草芽胞桿菌BAB-1生長的影響Fig. 1 The effect of different disintegrants on the growth ofB. subtilisBAB-1

圖2 不同分散劑對枯草芽胞桿菌BAB-1生長的影響Fig. 2 The effect of different dispersants on the growth ofB. subtilisBAB-1

采用毒性平板法評價了5種粘結(jié)劑與枯草芽胞桿菌BAB-1的生物相容性。結(jié)果表明，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，除PVP-K30在高濃度（5%）對枯草芽胞桿菌BAB-1生長表現(xiàn)抑制作用外，其他粘結(jié)劑PEG6000、淀粉、糊精、乳糖均不影響B(tài)AB-1菌株的生長（圖3A-E）。

圖3 不同粘結(jié)劑與枯草芽胞桿菌BAB-1的生物相容性評價Fig. 3 The biocompatibility evaluation between different binders andB. subtilisBAB-1

2.2 崩解劑適宜用量的確定

以崩解時間為指標(biāo)，對碳酸氫鈉、酒石酸和氯化鈉3種崩解劑的最適用量進(jìn)行篩選。正交試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明，各因素水平組合間崩解時間差異較大，直觀分析結(jié)果表明處理9（A3B3C2）崩解時間最短（274 s）；而正交試驗(yàn)結(jié)果分析表明，碳酸氫鈉（B）的 delta值最大，說明碳酸氫鈉的用量對水分散片劑崩解時間的影響最大，其次為酒石酸（A），氯化鈉（C）的影響最小（表3），因此最佳組合應(yīng)為A2B3C2。經(jīng)進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證，A2B3C2與A3B3C2兩種組合崩解時間無顯著性差異。對正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析（表4）表明，因素B的P＜0.05，即碳酸氫鈉對崩解時間的影響顯著（P=0.05）；因素A的P＜0.10，即酒石酸對崩解時間有一定的影響；因素C的P＞0.10，即氯化鈉對其無顯著性影響。因此，綜合直觀分析與方差分析的結(jié)果，再加上成本因素考慮，選擇A1B3C1為最佳組合，即酒石酸5%、碳酸氫鈉為25%、氯化鈉為0.5%。

表3 崩解劑配比優(yōu)化的正交試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The results of orthogonal test to optimize disintegrant proportion

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析表Table 4 Analysis of variance of orthogonal design results

2.3 粘結(jié)劑的篩選

以水分散片劑的外觀和可壓性作為評價指標(biāo)，對粘結(jié)劑的種類及含量進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，以 2% PEG6000和 5%乳糖配方壓片形成的水分散片劑得分最高（10）（表5）。該組合形成的片劑硬度適中，表面光滑平整，綜合性能優(yōu)于其他粘結(jié)劑組合。

表5 不同粘結(jié)劑及其用量對水分散片劑質(zhì)量的影響Table 5 The effect of different binders and their dosages on BAB-1 WT quality

2.4 分散劑的篩選

2.1結(jié)果表明分散劑NNO和GY-D10與枯草芽胞桿菌BAB-1生物相容性較好，結(jié)合成本考慮，選擇NNO作為水分散片劑的分散劑。通過單因素試驗(yàn)評價了不同NNO用量對水分散片劑懸浮率的影響，結(jié)果表明，隨著NNO用量的增加，水分散片劑的懸浮率逐漸提高，當(dāng)用量為4%時，懸浮率最高達(dá)到69.1%，因此選擇4%為最佳用量（圖4）。

圖4 不同NNO用量對水分散片劑懸浮率的影響Fig. 4 The effect of different dosages of NNO on suspension rate of BAB-1 WT

2.5 水分散片劑最佳配方的確定及主要性能指標(biāo)

通過以上配方篩選試驗(yàn)，確定了枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑適宜配方。崩解劑：酒石酸5%、碳酸氫鈉25%、氯化鈉0.5%；粘結(jié)劑：乳糖5%、PEG6000 2%；分散劑NNO 4%；菌株BAB-1母藥補(bǔ)足至100%。最終研制成枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑，該片劑的直徑為1.5 cm、厚度0.4 cm、硬度適中、表面光滑平整，片重為（1.5681±0.0080）g，有效成分含量為 100億CFU/g，崩解時間272.17 s，pH值5.75，懸浮率為73.77%（表6）。

表6 枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的主要性狀Table 6 The main characteristics ofBacillus subtilisBAB-1 WT

2.6 枯草芽胞桿菌 BAB-1水分散片劑對番茄和黃瓜灰霉病防治效果

通過溫室盆栽試驗(yàn)評價了該制劑對黃瓜灰霉病和番茄灰霉病的防治效果。結(jié)果表明，當(dāng)清水對照處理病情指數(shù)達(dá)到33.75（黃瓜灰霉病）和37.51（番茄灰霉?。r，枯草芽胞桿菌水分散片劑500倍與1000倍水稀釋液處理能顯著降低黃瓜和番茄灰霉病的病情指數(shù)，表明兩處理的防治效果顯著（表7）。該制劑兩個濃度處理對黃瓜灰霉病的防治效果分別為84.11%和79.48%，與對照藥劑露娜森的防治效果無顯著性差異，但顯著高于2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑。同時該制劑500倍水稀釋液對番茄灰霉病的防治效果為75.15%，與對照藥劑露娜森無顯著性差異，顯著高于2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑；但該制劑1000倍水稀釋液對番茄灰霉病的防治效果為59.32%，與2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑無顯著性差異。

表7 100億CFU/g枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑對黃瓜和番茄灰霉病的防治效果Table 7 Control efficacy of 10 billion CFU/gBacillus subtilisBAB-1 WT against gray mold on cucumber and tomato

3 討論

在“農(nóng)藥和化肥”雙減的國家戰(zhàn)略驅(qū)動下，微生物殺菌劑成為植物保護(hù)領(lǐng)域中最熱門的研發(fā)重點(diǎn)之一，但在微生物殺菌劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中仍存在許多問題，其中制劑工藝創(chuàng)新被列為重要關(guān)鍵技術(shù)。微生物殺菌劑制劑優(yōu)劣及其加工工藝是決定生防菌能否走向市場的關(guān)鍵因素[23]。

微生物殺菌劑的有效成分為活體生防微生物，因此保證制劑中各種助劑成分不影響有效成分的存活，即生防微生物與助劑生物學(xué)相容性，成為微生物殺菌劑制劑創(chuàng)制中關(guān)鍵技術(shù)問題。關(guān)于生防微生物與助劑生物學(xué)相容性的研究報道較多，李姝江等[23]通過研究發(fā)現(xiàn)載體高嶺土和白炭黑，潤濕劑十二烷基苯磺酸鈉對解淀粉芽胞桿菌BA-12的活性影響最小，可以作為可濕性粉劑研發(fā)的載體與助劑。程立君等[24]對4種穩(wěn)定劑和5種紫外保護(hù)劑進(jìn)行篩選，確定CMC-Na、糊精和黃原膠對酷綠木霉TR1菌絲生長和孢子萌發(fā)沒有影響，能夠用于木霉可濕性粉劑的研制；明亮等[25]通過篩選載體與助劑，確定了解淀粉芽胞桿菌 B1619水分散粒劑的最佳配方。而關(guān)于制備水分散片劑的助劑篩選研究報道較少。本試驗(yàn)以生物學(xué)相容性試驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)合，篩選枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的適宜助劑并確定適宜用量，為該生防微生物菌株的制劑化提供了豐富的科學(xué)數(shù)據(jù)支撐。

前期本實(shí)驗(yàn)室以枯草芽胞桿菌BAB-1為有效成分，研制了100億CFU/g枯草芽胞桿菌粉塵劑，該制劑對番茄灰霉病的室內(nèi)防效達(dá)到57.14%～71.43%；對黃瓜灰霉病的室內(nèi)防效達(dá)到48.80%[17]，該制劑對黃瓜灰霉病的防效低于本研究中水分散片劑的防效；雖然粉塵劑能夠有效降低棚室內(nèi)濕度，降低病害發(fā)生率，但該制劑在研制及使用過程中會出現(xiàn)粉塵飛揚(yáng)，易于對環(huán)境造成污染，危害人類健康。同時，以菌株BAB-1為有效成分研制了80 億CFU/mL枯草芽胞桿菌懸浮劑（PD20150190），2015—2016年噴施該制劑對溫室大棚番茄灰霉病的防治效果達(dá)到80%以上（數(shù)據(jù)未發(fā)表）。但懸浮劑貯藏、運(yùn)輸均不方便，不易推廣應(yīng)用。因此，本實(shí)驗(yàn)室開展了枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的研究。

水分散片劑同水分散粒劑一樣，具有很多優(yōu)點(diǎn)，如沒有粉塵飛揚(yáng)，對作業(yè)者安全，對環(huán)境友好；有效成分含量高、分散性好，物化性質(zhì)穩(wěn)定等[26,27]。水分散片劑采用固體包裝，貯運(yùn)方便、安全，其特殊的包裝材質(zhì)可保護(hù)有效成分不受紫外線等外界因素的影響；水分散片劑單片計(jì)量準(zhǔn)確、可直接投入噴霧器中噴霧使用，使用簡單方便，施藥者容易操作，比水分散粒劑更加方便省事；再加上其工藝和普通片劑工藝相同，對生產(chǎn)設(shè)備無特殊要求，故生產(chǎn)工藝很簡單。這些特點(diǎn)使得該劑型成為農(nóng)藥新劑型未來發(fā)展的方向之一[28,29]。

水分散片劑在我國農(nóng)藥登記中數(shù)量較少，至今僅有2個化學(xué)藥劑制劑通過登記，因此該制劑在我國是一種相對較新、發(fā)展較慢的劑型[30]，但此劑型具有無粉塵、無溶劑、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，符合環(huán)保農(nóng)藥制劑的發(fā)展趨勢[31]。枯草芽胞桿菌對人畜無毒，對環(huán)境安全，具有較強(qiáng)的抗逆能力、抑菌譜廣、有益作用多重，成為研發(fā)微生物殺菌劑的重要資源[32-34]。二者相結(jié)合，其生態(tài)效益更為顯著，但目前尚無關(guān)于枯草芽胞桿菌水分散片劑研制的相關(guān)報道。本試驗(yàn)確定了100億CFU/g枯草芽胞桿菌BAB-1水分散片劑的配方，并通過室內(nèi)盆栽試驗(yàn)證明該制劑能有效防治黃瓜灰霉病和番茄灰霉病，為該制劑盡早實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化提供了科學(xué)數(shù)據(jù)支撐。水分散片劑雖列于我國國家標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)藥劑型名稱及代碼》中，但至今未有該制劑配套的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，因此有關(guān)該制劑的評價標(biāo)準(zhǔn)需研究制定。