• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雞骨香乙醇提取物舒張小鼠氣道平滑肌的作用機(jī)理研究

    2022-04-18 09:59:12姚鳳杰曾曉月沈金花
    關(guān)鍵詞:雞骨平滑肌氣管

    姚鳳杰, 曾曉月, 沈金花

    (中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 醫(yī)學(xué)生物研究所&武陵山區(qū)特色資源植物種質(zhì)保護(hù)與利用湖北重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430074)

    哮喘,是一種常見的氣道異質(zhì)性的慢性炎癥疾病,通常會(huì)導(dǎo)致可變的氣道阻塞[1]. 氣道平滑肌是調(diào)節(jié)氣道阻力的關(guān)鍵組織,其反應(yīng)過度并產(chǎn)生收縮是哮喘的主要特征[2]. 氣道平滑肌的收縮反應(yīng)與Ca2+濃度相關(guān),其收縮依賴于細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的升高[3]. 而收縮性激動(dòng)劑可以激活氣道平滑肌細(xì)胞膜表面受體和氣道平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+相關(guān)通道進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高,引起氣道平滑肌收縮[4]. 因此,可根據(jù)哮喘的發(fā)病機(jī)理設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),研究藥物的抗收縮性,從而進(jìn)一步研究藥物對(duì)哮喘的作用.

    近年來,由于環(huán)境的因素,全球范圍內(nèi)哮喘的發(fā)病率正持續(xù)上升. 然而,目前常用的支氣管擴(kuò)張藥物的治療效果有限,且副作用較多, 因此亟待開發(fā)更有效、副作用更小的哮喘治療藥物. 越來越多的證據(jù)表明,抗炎中藥對(duì)哮喘患者具有良好的治療效果,且中藥具有作用溫和、副作用少等優(yōu)點(diǎn),開發(fā)具有抗炎特性的中藥用于治療哮喘,可能成為抗哮喘藥物創(chuàng)新的有效途徑[5]. 本課題組通過已有文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出雞骨香(CrotoncrassifoliusGeisel),將其提取成分通過張力測(cè)量和膜片鉗技術(shù)等體外實(shí)驗(yàn),呼吸阻力測(cè)量等活體實(shí)驗(yàn)探究其作用機(jī)理,試圖開發(fā)出一種安全有效的中藥來抑制氣道平滑肌的異常收縮,從而緩解哮喘.

    雞骨香為大戟科,巴豆屬植物,味辛、苦,以根入藥,主要分布于我國西南地區(qū),常用于治療咽喉腫痛、關(guān)節(jié)炎、胃炎等疾病[6]. 雞骨香具有抗炎、抗腫瘤等作用,其化學(xué)成分包括萜類、揮發(fā)油類、甾醇類等[7]. 二萜類成分為雞骨香的主要化學(xué)成分,其中克羅烷型二萜chettaphanin Ⅰ、3S-methoxyl-teucvin等都具有抗炎活性[8-9]. 目前國內(nèi)外對(duì)雞骨香的藥理研究仍然有限,到目前為止,尚無有關(guān)雞骨香中的特定成分具有抑制小鼠氣道平滑肌收縮潛力的文獻(xiàn)報(bào)道. 并且有研究表明,雞骨香乙醇提取物(ethanol extracts fromCrotoncrassifoliusGeisel, EECC)具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用[10]. 因此,本文以EECC為研究對(duì)象,研究EECC在氣道平滑肌中的舒張作用及作用機(jī)制,以此探究EECC對(duì)哮喘的影響.

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    從遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司購買的SPF級(jí)7~8周雄性BALB/c小鼠120只,許可證號(hào)SCXK(遼)2020-0001,飼養(yǎng)于中南民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照中南民族大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)的要求進(jìn)行,許可證號(hào)為2016-SCUEC-AEC-0030.

    1.2 材料和儀器

    雞骨香藥材于2019年9月采自廣東湛江市草藥藥材基地(湛江市屬于熱帶季風(fēng)氣候,年均氣溫為23 ℃. 草藥藥材基地位于湛江紅壤分布區(qū),此區(qū)土壤呈酸性,地理坐標(biāo)為110°30′ N, 21°20′ E),共采集5 kg,經(jīng)中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉虹副教授鑒定為雞骨香的根莖. 將采集的雞骨香根部清洗、烘干、粉碎,干粉在4 ℃冰箱密封儲(chǔ)存?zhèn)溆?;氯化乙酰膽堿(ACh)(上海源葉);乙醇、二甲基亞砜(國藥集團(tuán));牛血清蛋白(BSA)、Pyrazole 3(Pyr 3)、Gadolinium、硝苯地平(Nifedipine)(Sigma公司).

    高鉀溶液、2 mmol·L-1Ca2+-PSS(PSS)、0 mmol·L-1Ca2+-PSS、Li-PSS溶液、電極內(nèi)液、細(xì)胞外液、木瓜蛋白酶溶液、膠原蛋白酶溶液,參考文獻(xiàn)[11]配置.

    中草藥粉碎機(jī)(天津市秦斯特儀器);BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HV-4型離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)(成都泰盟科技);IX51膜片鉗顯微鏡(日本OLYMPUS);EPC-10膜片鉗放大器(德國HEKA);小動(dòng)物肺功能儀(SCIREQ Inc.,Montreal,Canada).

    1.3 雞骨香乙醇部提取物的制備

    稱取雞骨香粉1 kg,在室溫下浸泡于體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液中7 d,固液比為1∶10. 7 d后將上清液真空抽濾得濾液,濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得乙醇浸膏. 將提取的雞骨香乙醇部放置于真空干燥箱中保存?zhèn)溆?,?shí)驗(yàn)時(shí),將EECC溶解于二甲基亞砜.

    1.4 小鼠氣管環(huán)的獲取與處理

    用頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠,取出肺與氣管,放置于冰浴的PSS溶液中. 在體視顯微鏡下清除主氣管周圍多余組織,剪取氣管三角區(qū)附近長(zhǎng)約6 mm的主氣管. 將主氣管用兩個(gè)邊長(zhǎng)約7 mm的三角鉤固定住,懸掛到張力換能器上,把主氣管初始前負(fù)荷調(diào)節(jié)到300 mg左右并持續(xù)15 min,PSS溶液每15 min更換一次,重復(fù)4次. 待4次平衡結(jié)束,使用100 μmol·L-1ACh或80 mmol·L-1高鉀溶液對(duì)主氣管進(jìn)行預(yù)刺激,待主氣管充分的收縮后,再用PSS溶液洗脫使其恢復(fù)至基線[11]. 主氣管在基線狀態(tài)下休息25 min后再開始正式實(shí)驗(yàn)(每個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均重復(fù)6次,即隨機(jī)選用6只小鼠做實(shí)驗(yàn)).

    1.5 小鼠氣道平滑肌細(xì)胞的制備

    將氣管和肺固定于盛有冰浴解離液的膠板上,清除支氣管和主氣管上的多余組織,剪除軟骨環(huán),獲取平滑肌肌條. 將肌條置于37 ℃預(yù)熱的木瓜蛋白酶溶液中消化21 min,然后將肌條轉(zhuǎn)移到37 ℃預(yù)熱的膠原蛋白酶溶液中消化3 min,再用冰浴的BSA溶液清洗肌條兩次,最后將肌條轉(zhuǎn)移到含400 μL BSA溶液的EP管中,用力彈EP管使肌條分散成單個(gè)細(xì)胞,置于4 ℃冰箱備用.

    1.6 VDLCCs電流的記錄

    利用膜片鉗系統(tǒng),采用步階式刺激方式作用于急性分離的單個(gè)氣管平滑肌細(xì)胞,通過全細(xì)胞記錄方式來記錄L型電壓依賴性鈣通道(L-type voltage dependent calcium channels, VDLCCs)電流(實(shí)驗(yàn)分為兩組,每組6只小鼠).

    1.7 小鼠呼吸系統(tǒng)阻力(respiratory system resistance,Rrs)的測(cè)量

    首先給實(shí)驗(yàn)小鼠稱重,然后根據(jù)體重皮下注射1%的戊巴比妥鈉使其麻醉. 深度麻醉小鼠后,在小鼠的氣管上用剪刀開一個(gè)小的“T”型開口,并插入專用插管. 手術(shù)后的小鼠通過插管連接肺功能儀,利用霧化頭給藥,使用不同濃度的ACh升高小鼠Rrs,測(cè)量藥物對(duì)小鼠Rrs的影響,從而反映藥物的作用(實(shí)驗(yàn)分為兩組,每組6只小鼠).

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果與分析

    2.1 EECC對(duì)高鉀誘導(dǎo)的小鼠氣道平滑肌收縮的舒張作用

    在氣道平滑肌中,必須通過多種機(jī)制嚴(yán)格調(diào)控胞內(nèi)Ca2+的濃度,以維持適當(dāng)?shù)臍獾劳〞承訹12]. 高鉀可以誘導(dǎo)VDLCCs開放,使胞外Ca2+通過VDLCCs進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),胞內(nèi)Ca2+濃度升高,導(dǎo)致氣道平滑肌反應(yīng)過度,發(fā)生收縮. EECC能夠以劑量依賴的方式完全舒張由高鉀誘導(dǎo)預(yù)收縮的小鼠主氣管,并達(dá)到最大舒張值(圖1A). 重復(fù)6次實(shí)驗(yàn),結(jié)果一致,平均最大舒張比值為(102.12 ± 0.05)%,小鼠主氣管100%舒張時(shí)EECC的濃度為0.129 mg·mL-1(圖1B). 加入10 μmol·L-1Nifedipine(VDLCCs通道的特異性阻斷劑)可以完全抑制由高鉀誘導(dǎo)的小鼠主氣管的收縮(圖1C). 而EECC并不影響靜息狀態(tài)下的正常的主氣管(圖1D). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:EECC以劑量依賴的方式抑制了高鉀誘導(dǎo)的小鼠主氣管的收縮,并且VDLCCs可能參與了該過程.

    A.EECC以劑量依賴的方式完全舒張高鉀誘導(dǎo)收縮的主氣管;B.EECC舒張高鉀誘導(dǎo)收縮的主氣管的量效曲線(n=6);C.10 μmol·L-1 Nifedepine完全舒張高鉀誘導(dǎo)收縮的主氣管;D.EECC對(duì)靜息狀態(tài)下的正常的主氣管無影響A.EECC completely relaxed the main trachea induced by high potassium in a dose-dependent manner; B.Dose response curve of EECC in relaxing the main trachea induced by high potassium (n=6);C.10 μmol·L-1 Nifedepine completely relaxed the main trachea induced by high potassium; D.EECC had no effect on the normal main trachea at rest圖1 EECC對(duì)高鉀誘導(dǎo)預(yù)收縮的小鼠氣道平滑肌的舒張作用Fig.1 Relaxation effect of EECC on mouse airway smooth muscle with high potassium induced pre-contraction

    2.2 EECC抑制高鉀誘導(dǎo)的外部鈣內(nèi)流

    在0 mmol·L-1Ca2+條件下,高鉀不能引起主氣管收縮,當(dāng)實(shí)驗(yàn)溶液中Ca2+濃度恢復(fù)到2 mmol·L-1時(shí),主氣管異常收縮,加入0.129 mg·mL-1EECC,預(yù)收縮的主氣管完全舒張(圖2A). 提前孵育0.129 mg·mL-1EECC,實(shí)驗(yàn)溶液中的Ca2+濃度由0 mmol·L-1恢復(fù)到2 mmol·L-1后,主氣管只產(chǎn)生了微弱短暫的瞬時(shí)收縮(圖2B). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:EECC可以通過抑制VDLCCs,從而抑制外部環(huán)境中的Ca2+流入細(xì)胞質(zhì),舒張高鉀誘導(dǎo)預(yù)收縮的主氣管.

    2.3 EECC抑制VDLCCs全細(xì)胞電流

    為了進(jìn)一步探討VDLCCs在EECC舒張氣道平滑肌中的作用,采用步階電壓刺激急性分離的單個(gè)氣道平滑肌細(xì)胞,利用膜片鉗系統(tǒng)記錄VDLCCs全細(xì)胞電流. 觀察到加入Nifedipine或EECC均可抑制VDLCCs電流(圖3A). 用步階電壓(-70 mV~+40 mV)刺激細(xì)胞,隨著電壓逐漸升高,電流先升高后降低,當(dāng)加入EECC或Nifedipine時(shí),電流被抑制(圖3B). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明EECC與Nifedipine作用相似,EECC可以通過抑制VDLCCs電流即阻斷VDLCCs,從而抑制外部鈣內(nèi)流,舒張氣道平滑?。?/p>

    A.EECC阻斷了高鉀所致的鈣內(nèi)流; B.存在EECC的情況下,高鉀不能使主氣管產(chǎn)生收縮A.EECC blocked calcium influx induced by high potassium;B.In the presence of EECC, high potassium could not cause contraction of the main trachea圖2 EECC對(duì)高鉀引起的外部鈣內(nèi)流的抑制作用Fig.2 Inhibitory effect of EECC on calcium influx induced by high potassium

    A.EECC作用于VDLCCs的時(shí)間—電流圖;B.EECC作用于VDLCCs的電壓-電流圖A.Time current diagram of EECC acting on VDLCCs; B.Voltage current diagram of EECC acting on VDLCCs圖3 EECC阻斷VDLCCs電流Fig.3 EECC blocked VDLCCs current

    2.4 EECC對(duì)ACh誘導(dǎo)的小鼠氣道平滑肌收縮的舒張作用

    ACh可以激活調(diào)控Ca2+的多種離子通道,如非選擇性陽離子通道(non-selective cation channels,NSCCs)和VDLCCs等,使外部鈣內(nèi)流和內(nèi)部鈣釋放,導(dǎo)致氣道平滑肌過度收縮. EECC能夠以劑量依賴的方式舒張ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的主氣管,并達(dá)到最大舒張值(圖4A). 重復(fù)6次實(shí)驗(yàn),結(jié)果一致,平均最大舒張比值為(97.21 ± 0.39)%(圖4B),此時(shí)EECC的濃度為0.562 mg·mL-1.

    A.EECC劑量依賴地舒張ACh誘導(dǎo)收縮的主氣管;B.EECC舒張ACh誘導(dǎo)收縮的主氣管的量效曲線(n=6)A.EECC relaxed the main trachea induced by ACh in a dose-dependent manner;B.Dose response curve of EECC in relaxing the main trachea induced by ACh (n=6)圖4 EECC對(duì)ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的小鼠氣道平滑肌的舒張作用Fig.4 Relaxation effect of EECC on ACh-induced pre-contraction mouse airway smooth muscle

    2.5 排除VDLCCs 后,EECC依然能夠舒張氣道平滑肌

    用高鉀誘導(dǎo)小鼠主氣管收縮并達(dá)到穩(wěn)定后,加入Nifedipine,小鼠主氣管完全舒張,再加入0.129 mg·mL-1EECC,發(fā)現(xiàn)小鼠主氣管的張力值沒有發(fā)生變化(圖5A). 先用 Nifedipine阻斷VDLCCs后,加入高鉀,小鼠主氣管沒有發(fā)生收縮,再加入0.129 mg·mL-1

    A.10 μmol·L-1 Nifedipine完全舒張主氣管后,EECC對(duì)主氣管的影響;B.提前孵育10 μmol·L-1 Nifedipine,EECC對(duì)高鉀刺激的主氣管的影響;C.10 μmol·L-1 Nifedipine部分舒張主氣管后,EECC對(duì)主氣管的影響;D.提前孵育10 μmol·L-1 Nifedipine,EECC對(duì)ACh刺激的主氣管的影響A.The effect of EECC on the main trachea was observed after complete relaxation of the main trachea by 10 μmol·L-1 Nifedepine;B.Effects of early incubation with 10 μmol·L-1 Nifedipine and EECC on high potassium stimulated main trachea;C.The effect of EECC on the main trachea was observed after partial relaxation of the main trachea by 10 μmol·L-1 Nifedepine;D.Effects of early incubation with 10 μmol·L-1 Nifedipine and EECC on ACh stimulated main trachea圖5 排除VDLCCs后,EECC對(duì)ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的小鼠氣道平滑肌的舒張作用Fig.5 Relaxation effect of EECC on ACh-induced pre-contraction mouse airway smooth muscle without VDLCCs

    EECC,小鼠主氣管的張力值依然沒有變化(圖5B). 用ACh誘導(dǎo)小鼠主氣管收縮并達(dá)到穩(wěn)定后,加入Nifedipine,小鼠主氣管部分舒張,再加入0.562 mg·mL-1EECC,小鼠主氣管完全舒張(圖5C). 先用 Nifedipine抑制VDLCCs后,再加入ACh,小鼠主氣管仍能收縮并達(dá)到穩(wěn)定,該收縮可被0.562 mg·mL-1EECC抑制(圖5D). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:EECC可以通過阻斷VDLCCs從而使氣道平滑肌舒張,并且EECC不僅抑制VDLCCs,還可能通過抑制其它通道從而舒張小鼠氣道平滑肌.

    A.EECC阻斷了ACh誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流;B.孵育EECC可以抑制鈣內(nèi)流引起的主氣管收縮;C.排除VDLCCs后,EECC對(duì)ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的主氣管的影響;D.三種不同通道阻斷劑作用后,EECC仍能舒張ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的主氣管;E) Pyr 3,Gadolinium和EECC舒張作用統(tǒng)計(jì)圖A.EECC blocked the calcium influx induced by ACh; B.EECC inhibited the contraction of main trachea induced by calcium influx;C.Effect of EECC on ACh-induced pre-contracted main trachea after excluding VDLCCs; D.EECC relaxed ACh pre-contracted main trachea after three different channel blockers; E.Statistical chart of relaxation of Pyr 3, Gadolinium and EECC注:*、**、***分別表示p<0.05,p<0.01,p<0.001;NS表示無顯著性差異.下圖同.圖6 EECC對(duì)ACh引起的外部鈣內(nèi)流和內(nèi)部鈣釋放的抑制作用Fig.6 Inhibitory effect of EECC on ACh-induced external calcium influx and internal calcium release

    2.6 EECC抑制ACh誘導(dǎo)的外部鈣內(nèi)流和內(nèi)部鈣釋放

    在0 mmol·L-1Ca2+條件下,加入ACh,主氣管只能產(chǎn)生微弱的收縮,當(dāng)實(shí)驗(yàn)溶液中Ca2+濃度恢復(fù)到2 mmol·L-1時(shí),主氣管發(fā)生持續(xù)收縮并達(dá)到穩(wěn)定,加入0.562 mg·mL-1EECC能抑制這種收縮(圖6A). 提前孵育0.562 mg·mL-1EECC,即使加入ACh,實(shí)驗(yàn)溶液中的Ca2+濃度由0 mmol·L-1恢復(fù)到2 mmol·L-1時(shí),主氣管也只產(chǎn)生短暫微弱的收縮(圖6B). 根據(jù)以上結(jié)果推測(cè):EECC通過阻斷VDLCCs和NSCCs,抑制ACh誘導(dǎo)的內(nèi)部鈣釋放和外部鈣內(nèi)流.

    為了驗(yàn)證以上推測(cè),首先用Nifedipine阻斷VDLCCs. 在0 mmol·L-1Ca2+條件下,加入ACh,主氣管只產(chǎn)生了微弱的收縮,當(dāng)實(shí)驗(yàn)溶液中Ca2+濃度恢復(fù)到2 mmol·L-1時(shí),主氣管發(fā)生持續(xù)穩(wěn)定收縮并達(dá)到最大收縮值. 直接加入0.562 mg·mL-1EECC,小鼠主氣管可以完全舒張(圖6C). 依次加入NSCCs中兩種TRP通道的特異性阻斷劑Pyr 3和Gadolinium,再加入EECC,發(fā)現(xiàn)兩種阻斷劑和EECC各舒張一部分預(yù)收縮的小鼠主氣管(圖6D、6E). 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:VDLCCs和NSCCs參與ACh引起的氣道平滑肌的收縮,EECC可以通過阻斷VDLCCs和NSCCs從而抑制內(nèi)部鈣釋放和外部鈣內(nèi)流.

    2.7 EECC抑制Na+/Ca2+交換

    Na+/Ca2+交換體(Na+/Ca2+exchangers,NCX)是一種介導(dǎo)Ca2+內(nèi)流的重要離子通道,氣道平滑肌的基礎(chǔ)張力可通過連續(xù)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+和Na+濃度來保持[13]. 當(dāng)實(shí)驗(yàn)溶液為含Na+的PSS時(shí),加入ACh,小鼠主氣管會(huì)收縮,此收縮可以被0.562 mg·mL-1EECC抑制(圖7A). 當(dāng)實(shí)驗(yàn)溶液為L(zhǎng)i-PSS(用Li+替Na+)致使實(shí)驗(yàn)溶液中無Na+時(shí),小鼠主氣管的基礎(chǔ)張力升高,加入ACh,

    A.EECC抑制ACh引起的主氣管收縮;B.EECC抑制Na+/Ca2+交換;C.是A)和B)中的基礎(chǔ)張力值、ACh收縮值和EECC舒張值的統(tǒng)計(jì)圖A.EECC inhibited the contraction caused by ACh; B.EECC inhibited Na+/Ca2+ exchange;C.A statistical map of the basic tension values, ACh contraction and EECC relaxation values in A. and B.圖7 EECC對(duì)Na+/Ca2+交換的抑制作用Fig.7 Inhibitory effect of EECC on Na+/Ca2+ exchange

    小鼠主氣管產(chǎn)生收縮,0.562 mg·mL-1EECC可將此收縮舒張到基礎(chǔ)張力以下(圖7B). 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)比并統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可知,小鼠主氣管的基礎(chǔ)張力及收縮值有顯著性差異(圖7C). 以上實(shí)驗(yàn)說明:EECC可以通過抑制NCX通道,從而抑制ACh引起的氣道平滑肌的收縮.

    2.8 EECC對(duì)組織活性的影響

    為了研究EECC對(duì)小鼠組織活性的影響,設(shè)計(jì)以下實(shí)驗(yàn):加入EECC舒張高鉀或ACh預(yù)收縮的主氣管,用PSS洗脫EECC后,再加入高鉀或ACh刺激主氣管,主氣管可以再次收縮并達(dá)到穩(wěn)定(圖8A、8C). 經(jīng)過6次實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可得,用ACh或高鉀刺激主氣管前后兩次的收縮值具有明顯差異(圖8B、8D). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:EECC對(duì)小鼠組織活性有一定的影響.

    A-B.EECC對(duì)ACh預(yù)刺激的組織活性的影響(n=6);C-D.EECC對(duì)高鉀預(yù)刺激的組織活性的影響(n=6)A-B.The effect of EECC on tissue activity stimulated by ACh (n=6); C-D.The effect of EECC on tissue activity stimulated by high potassium (n=6)圖8 EECC對(duì)氣管組織活性的影響Fig.8 Effect of EECC on airway tissue activity

    2.9 EECC對(duì)呼吸系統(tǒng)阻力(Rrs)的影響

    上述實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞和組織水平驗(yàn)證了EECC可以舒張小鼠氣道平滑肌,為了進(jìn)一步驗(yàn)證EECC在活體水平上對(duì)小鼠影響,設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn):麻醉的小鼠吸入霧化的ACh(濃度梯度為0~50 mg·mL-1),小鼠氣管收縮,Rrs升高. 加入5.62 mg·mL-1EECC,利用肺功能儀檢測(cè)藥物對(duì)小鼠Rrs的影響. 經(jīng)6次實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可得:EECC能夠顯著降低ACh引起的小鼠Rrs的上升(圖9). 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:在活體水平上,EECC也可以舒張小鼠氣道平滑肌.

    圖9 EECC對(duì)小鼠呼吸系統(tǒng)阻力的影響Fig.9 Effect of EECC on mouse respiratory system resistance

    3 結(jié)論

    哮喘是一種很難治愈的慢性支氣管疾病,病理特征是氣道重塑、氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性[14-15]. 由于目前常用的藥物無法治愈哮喘并具有一定副作用,因此,通過探究哮喘的發(fā)病機(jī)制及藥物的作用機(jī)理來開發(fā)用于治療哮喘的新型藥物極其重要. 本文以中藥雞骨香為研究材料,從細(xì)胞、組織和活體水平探討其對(duì)氣道平滑肌的舒張作用及作用機(jī)制.

    哮喘的重要癥狀之一是氣道平滑肌的過度收縮[16]. 本文通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)EECC以濃度依賴的方式舒張高鉀或ACh誘導(dǎo)預(yù)收縮的氣道平滑肌. 氣道平滑肌收縮是一個(gè)復(fù)雜的電生理過程,涉及多種離子通道,這些離子通道參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平和氣道平滑肌舒張與收縮[17]. 組織水平實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EECC通過阻斷VDLCCs、NSCCs和NCX,抑制高鉀或ACh引起的外部鈣內(nèi)流和內(nèi)部鈣釋放. 細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)證明EECC可阻斷VDLCCs電流. 活體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)EECC能夠顯著降低小鼠的Rrs. 一系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EECC具有舒張氣道平滑肌的作用. 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示雞骨香有望成為一種新型的用于治療哮喘的中藥,進(jìn)一步豐富了防治哮喘的天然藥物的研究基礎(chǔ). 本文初步探討了EECC舒張氣道平滑肌的作用機(jī)理,但仍可對(duì)其進(jìn)行深入研究:一方面,可以建立哮喘模型深入研究EECC對(duì)哮喘相關(guān)的炎癥因子及蛋白表達(dá)的影響;另一方面,可以進(jìn)一步探究EECC中的化學(xué)成分如chettaphanin Ⅰ等對(duì)氣道平滑肌的舒張作用及作用機(jī)制.

    猜你喜歡
    雞骨平滑肌氣管
    我家秘方
    雞骨柴揮發(fā)油及其主要組分γ-萜品烯對(duì)赤擬谷盜成蟲和幼蟲的防治作用
    三七雞骨湯治跌打損傷
    原發(fā)性腎上腺平滑肌肉瘤1例
    喉血管平滑肌瘤一例
    膜分離雞骨素酶解液美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的初步研究
    腸系膜巨大平滑肌瘤1例并文獻(xiàn)回顧
    氣管鏡介入治療并發(fā)大咯血的護(hù)理體會(huì)
    探討早期氣管切開術(shù)對(duì)防治重型顱腦損傷術(shù)后并發(fā)肺部感染的作用
    咽旁巨大平滑肌肉瘤一例MRI表現(xiàn)
    99re6热这里在线精品视频| 国产麻豆69| √禁漫天堂资源中文www| 99九九在线精品视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品久久久久久精品古装| 国产野战对白在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久久久久久久久久久大奶| 最新的欧美精品一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黑人猛操日本美女一级片| 丰满少妇做爰视频| 丁香六月天网| 黄频高清免费视频| 一级片'在线观看视频| 99九九在线精品视频| 91字幕亚洲| 99re6热这里在线精品视频| 久久精品成人免费网站| 亚洲国产精品一区三区| 婷婷色av中文字幕| 欧美日本中文国产一区发布| 99热国产这里只有精品6| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 美女主播在线视频| 香蕉国产在线看| 老鸭窝网址在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 男女下面插进去视频免费观看| 国产精品 国内视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 国产爽快片一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产老妇伦熟女老妇高清| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 一级黄色大片毛片| 熟女av电影| 1024视频免费在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 搡老乐熟女国产| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产有黄有色有爽视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产在线免费精品| 69精品国产乱码久久久| 精品国产国语对白av| www.自偷自拍.com| 91成人精品电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品熟女少妇八av免费久了| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 成年人免费黄色播放视频| 日本av免费视频播放| 人人澡人人妻人| 一区二区三区激情视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 在线观看免费午夜福利视频| 国产高清国产精品国产三级| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩伦理黄色片| 亚洲色图综合在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久99一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 成年美女黄网站色视频大全免费| 精品人妻一区二区三区麻豆| 在线精品无人区一区二区三| 两性夫妻黄色片| 久久99热这里只频精品6学生| 婷婷成人精品国产| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲免费av在线视频| 一本综合久久免费| 亚洲av在线观看美女高潮| 午夜福利在线免费观看网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| av不卡在线播放| 美女中出高潮动态图| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产高清国产精品国产三级| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 在线观看免费视频网站a站| 老鸭窝网址在线观看| 欧美精品av麻豆av| 欧美 日韩 精品 国产| 看免费成人av毛片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 不卡av一区二区三区| 日韩电影二区| 成人手机av| 精品少妇久久久久久888优播| 悠悠久久av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品欧美一区二区三区在线| 免费看av在线观看网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美黄色淫秽网站| 一级黄色大片毛片| 久久久国产精品麻豆| 国产成人免费观看mmmm| 五月天丁香电影| 午夜免费观看性视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美在线一区亚洲| 精品一区在线观看国产| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 最近中文字幕2019免费版| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲av综合色区一区| 黄片小视频在线播放| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜91福利影院| 欧美精品高潮呻吟av久久| a级毛片在线看网站| 91老司机精品| 午夜福利视频在线观看免费| 久久免费观看电影| 啦啦啦在线免费观看视频4| 涩涩av久久男人的天堂| 国产色视频综合| 高清不卡的av网站| 成年动漫av网址| 免费人妻精品一区二区三区视频| av电影中文网址| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲中文日韩欧美视频| 久热这里只有精品99| 后天国语完整版免费观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 两个人免费观看高清视频| 两性夫妻黄色片| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产又爽黄色视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 曰老女人黄片| 波野结衣二区三区在线| 国产片内射在线| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品人人爽人人爽视色| 男女国产视频网站| 韩国精品一区二区三区| 超色免费av| 在线观看免费高清a一片| 午夜影院在线不卡| 婷婷色综合大香蕉| 精品福利观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲av男天堂| 国产亚洲av高清不卡| 国产在线免费精品| 国产高清videossex| 欧美成人精品欧美一级黄| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 伦理电影免费视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 美女大奶头黄色视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 男女边摸边吃奶| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 99香蕉大伊视频| 99国产精品一区二区三区| 久久av网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美日韩精品网址| 人体艺术视频欧美日本| 久久综合国产亚洲精品| 日本五十路高清| 久久精品成人免费网站| 99九九在线精品视频| 另类亚洲欧美激情| 首页视频小说图片口味搜索 | 在线 av 中文字幕| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 蜜桃在线观看..| bbb黄色大片| 国产片特级美女逼逼视频| 91精品三级在线观看| 女人精品久久久久毛片| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久亚洲精品不卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 成人手机av| www.精华液| 91九色精品人成在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 另类亚洲欧美激情| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产男人的电影天堂91| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 三上悠亚av全集在线观看| 深夜精品福利| 丝袜人妻中文字幕| av又黄又爽大尺度在线免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产高清视频在线播放一区 | 一二三四社区在线视频社区8| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久影院123| 亚洲欧美激情在线| 亚洲精品一二三| 桃花免费在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 搡老岳熟女国产| 日本午夜av视频| a级毛片黄视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品一区蜜桃| 成年人免费黄色播放视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 黄色一级大片看看| 日本色播在线视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩一区二区三区影片| 日本欧美视频一区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 90打野战视频偷拍视频| 两性夫妻黄色片| 一区二区三区四区激情视频| 考比视频在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 99九九在线精品视频| 波多野结衣av一区二区av| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄片小视频在线播放| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| www.精华液| a 毛片基地| 日韩欧美一区视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 777米奇影视久久| 99久久综合免费| 青春草视频在线免费观看| 亚洲天堂av无毛| 在线观看免费高清a一片| h视频一区二区三区| 亚洲国产av影院在线观看| 激情视频va一区二区三区| 欧美在线一区亚洲| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产精品二区激情视频| 中文字幕最新亚洲高清| 男人添女人高潮全过程视频| 精品久久蜜臀av无| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲伊人久久精品综合| 好男人电影高清在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲一区中文字幕在线| 天天添夜夜摸| av国产久精品久网站免费入址| 男女床上黄色一级片免费看| 国产人伦9x9x在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美另类一区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩av免费高清视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 99久久精品国产亚洲精品| 丝袜在线中文字幕| 一区在线观看完整版| 又紧又爽又黄一区二区| 男女边摸边吃奶| 欧美性长视频在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 国产在视频线精品| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲av美国av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 少妇精品久久久久久久| 最新在线观看一区二区三区 | 十八禁人妻一区二区| 在现免费观看毛片| 天堂中文最新版在线下载| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 99国产精品免费福利视频| 国产片内射在线| avwww免费| 首页视频小说图片口味搜索 | svipshipincom国产片| 日本91视频免费播放| 99热国产这里只有精品6| 另类精品久久| 一区在线观看完整版| 一区二区三区激情视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在现免费观看毛片| 男女下面插进去视频免费观看| 高清欧美精品videossex| 黑丝袜美女国产一区| 在线观看免费高清a一片| 亚洲国产日韩一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲,欧美,日韩| 男女国产视频网站| 亚洲精品一二三| 男女高潮啪啪啪动态图| kizo精华| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久精品国产亚洲av涩爱| 制服人妻中文乱码| 深夜精品福利| 脱女人内裤的视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色播在线永久视频| 免费高清在线观看日韩| 一本久久精品| 免费观看人在逋| 咕卡用的链子| 国产熟女欧美一区二区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 女人久久www免费人成看片| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品99久久99久久久不卡| 永久免费av网站大全| 老司机影院成人| 在线看a的网站| 热99国产精品久久久久久7| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久久久网色| 母亲3免费完整高清在线观看| 手机成人av网站| 大型av网站在线播放| 欧美性长视频在线观看| av网站免费在线观看视频| 成年人午夜在线观看视频| 男女免费视频国产| 手机成人av网站| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲av高清不卡| 18在线观看网站| 少妇 在线观看| 一级片免费观看大全| 九色亚洲精品在线播放| 婷婷色麻豆天堂久久| 久热爱精品视频在线9| cao死你这个sao货| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜两性在线视频| 香蕉国产在线看| 黄色 视频免费看| 欧美日韩成人在线一区二区| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精品国产一区二区久久| 日本wwww免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久久精品人妻al黑| 美女扒开内裤让男人捅视频| 中文字幕制服av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| netflix在线观看网站| 亚洲男人天堂网一区| 日韩大片免费观看网站| 老司机亚洲免费影院| 蜜桃在线观看..| 操美女的视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 大话2 男鬼变身卡| 久久青草综合色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 99久久精品国产亚洲精品| 蜜桃国产av成人99| 人成视频在线观看免费观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 天天影视国产精品| 久久这里只有精品19| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产av国产精品国产| av视频免费观看在线观看| 在线av久久热| 免费在线观看影片大全网站 | 老司机午夜十八禁免费视频| 久久精品久久久久久久性| 永久免费av网站大全| 精品国产国语对白av| 欧美人与善性xxx| 一级毛片电影观看| av在线老鸭窝| 视频区图区小说| 成人国语在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 午夜福利一区二区在线看| 各种免费的搞黄视频| 久久久精品区二区三区| 久久中文字幕一级| 中文字幕高清在线视频| 深夜精品福利| 大片电影免费在线观看免费| 午夜精品国产一区二区电影| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲成人手机| 午夜福利,免费看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品国产a三级三级三级| 成人手机av| 精品福利观看| 国产成人精品久久久久久| 99久久综合免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日韩av免费高清视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲人成电影免费在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲视频免费观看视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| av在线老鸭窝| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产在线视频一区二区| 婷婷色综合www| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲人成电影免费在线| 国产日韩欧美在线精品| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 91九色精品人成在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一区二区av电影网| av欧美777| 青青草视频在线视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 在现免费观看毛片| 成人手机av| 乱人伦中国视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产欧美网| 人成视频在线观看免费观看| 丝袜在线中文字幕| 中文字幕色久视频| 午夜福利,免费看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 大型av网站在线播放| 在线观看www视频免费| 少妇人妻 视频| 亚洲第一av免费看| 两个人看的免费小视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 老司机在亚洲福利影院| 欧美日韩一级在线毛片| 美女午夜性视频免费| 中国国产av一级| 波野结衣二区三区在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 91国产中文字幕| 国产在线一区二区三区精| 亚洲综合色网址| 久久久欧美国产精品| 午夜免费鲁丝| 欧美激情极品国产一区二区三区| 免费在线观看日本一区| 亚洲成人国产一区在线观看 | 国产日韩欧美视频二区| 午夜福利免费观看在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲中文av在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 九草在线视频观看| av国产精品久久久久影院| 欧美人与善性xxx| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产午夜精品一二区理论片| www.熟女人妻精品国产| 考比视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 赤兔流量卡办理| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品一二三| 9色porny在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 久久久久久久精品精品| 日本黄色日本黄色录像| videosex国产| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 午夜福利免费观看在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产成人av教育| 精品视频人人做人人爽| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 999久久久国产精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 欧美日韩黄片免| 男人操女人黄网站| 国产一级毛片在线| 后天国语完整版免费观看| 妹子高潮喷水视频| 日本色播在线视频| 国产高清视频在线播放一区 | 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品国产三级专区第一集| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区二区三区av在线| 999精品在线视频| 最黄视频免费看| 成人国产一区最新在线观看 | 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 妹子高潮喷水视频| 在线观看免费午夜福利视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人欧美在线观看 | 捣出白浆h1v1| 国产1区2区3区精品| 成在线人永久免费视频| 高清欧美精品videossex| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲av美国av| 青青草视频在线视频观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 91精品伊人久久大香线蕉| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久久国产精品麻豆| 美国免费a级毛片| cao死你这个sao货| 麻豆乱淫一区二区| 观看av在线不卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 亚洲专区国产一区二区| 免费观看a级毛片全部| 男女无遮挡免费网站观看| 久久 成人 亚洲| 一级片免费观看大全| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 两个人免费观看高清视频| 好男人视频免费观看在线| 久久99精品国语久久久| 波多野结衣av一区二区av| xxxhd国产人妻xxx| 老鸭窝网址在线观看| 日本五十路高清| 国产成人av激情在线播放| 男女下面插进去视频免费观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲精品国产色婷婷电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 多毛熟女@视频| 色网站视频免费| 亚洲av综合色区一区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲中文av在线| 99热全是精品| 国产男人的电影天堂91| 久久精品人人爽人人爽视色| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av福利片在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 婷婷色综合www| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久欧美国产精品| av不卡在线播放| 亚洲欧洲国产日韩| 国产不卡av网站在线观看| 99国产精品一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| a级片在线免费高清观看视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 免费在线观看黄色视频的| 宅男免费午夜| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲伊人久久精品综合| 十八禁网站网址无遮挡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 一级毛片 在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 麻豆乱淫一区二区| av网站在线播放免费| 成在线人永久免费视频| 蜜桃国产av成人99|