金銀花配方顆粒中綠原酸提取工藝的研究

上官同強(qiáng) 孟令江 滕海達(dá) 劉爽

關(guān)鍵詞：金銀花配方顆粒;綠原酸;提取工藝條件

【中圖分類號】 R28 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）06--02

中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代工業(yè)的提取、濃縮、干燥、精制成顆粒，其性味功效與原飲片一致，不含糖、防腐劑和其他賦形劑。用其代替中藥飲片供中醫(yī)飲片臨床辨證討論，隨證加減，配方使用，既能保持原中藥飲片的藥效，又保證了中醫(yī)臨床的用藥特色[1]。

金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬的干燥花蕾，為常用藥，具有清熱解毒，抗病毒等功能，其功能性成分主要包括揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、黃酮類、環(huán)烯醚萜苷類、三萜皂苷類等成分。，其中綠原酸類物質(zhì)是金銀花有機(jī)酸的主要有效成分[2]，綠原酸（CGA）是由咖啡酸的羧基和奎尼酸的羥基縮合而成的縮酚酸，是植物細(xì)胞通過莽草酸途徑合成的一種苯丙素類物質(zhì)，其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵、多元酚和鄰二酚羥基，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂、降血糖和免疫調(diào)節(jié)等多方面的藥理作用，在食品、醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用[3]。本試驗(yàn)以綠原酸提取量、出膏率、為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)對人參配方顆粒提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1工藝研究資料

1.1劑型選擇

配方顆粒要求即為顆粒，故本品為顆粒劑

1.2提取工藝研究

1.2.1材料與儀器

儀器：美國Agilengt 1260 Infinity II高效液相色譜系統(tǒng)，G7129A 1260 Infinity II樣品瓶進(jìn)樣器，G7129A 1260 ICC集成式柱溫箱，G7114A 1260 Infinity II紫外檢測器，G7111A 1260 Infinity II四元梯度泵，8301AA工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)OpenLAB CDS ChemStation Workstation;TP-A500電子天平;日本Shimadzu UV-2600紫外可見分光光度計(jì);電熱恒溫水浴鍋（DK-98-Ⅱ）;電熱恒溫干燥箱（WGLL-125BZ型）。

材料：金銀花對照藥材：批號為121060-201608，購買于中國食品藥品檢定研究院。

綠原酸對照品：批號為110753-201716，購買于中國食品藥品檢定研究院。供試品：供試品：批號171801701、171801702、171801703。試劑：乙腈為色譜純（Fisher Chemicals），水為娃哈哈純凈水，其余試劑為分析純。

1.2.2提取工藝路線的設(shè)計(jì)

根據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見稿）》第一章第三條的規(guī)定，配方顆粒的定義為：中藥配方顆粒是由單味中藥飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒而成，在中醫(yī)臨床配方后，供患者沖服使用。故采用水提取法。

1.2.3觀察指標(biāo)：以綠原酸提取量和出膏率為指標(biāo)，分別對加水倍量、提取次數(shù)、提取時(shí)間等工藝參數(shù)進(jìn)行考察，通過對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，選取與綠原酸含量和出膏率與標(biāo)準(zhǔn)煎劑最接近的提取工藝參數(shù)作為人參配方顆粒的最優(yōu)提取工藝。

1.3含量標(biāo)準(zhǔn)

參考《中國藥典》2015年版一部金銀花綠原酸含量限度為1.5%，木犀草苷含量限度為0.050%。為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，內(nèi)控綠原酸含量規(guī)定為不得少于1.5%，木犀草苷含量規(guī)定為不得少于0.050%。

2方法與結(jié)果

2.1樣品的測定方法

2.1.1吸水量測定

取金銀花100g，加入10倍量水浸泡，直至藥材完全浸透，濾出未被吸收的水，稱量浸潤后藥材重量，計(jì)算藥材吸水量，結(jié)果為373ml/100g。

2.1.2綠原酸的含量測定方法：照高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動相;檢測波長為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。

對照品溶液的制備取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（200W，45kHz）30分鐘，放冷。再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇定容至刻度搖勻，即得

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.1.3木犀草苷的含量測定：照高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm，5μm），以乙腈為流動相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。

對照品溶液的制備取木犀草苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率45kHz）1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.1.4出膏率的測定將提取液濃縮至約100ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱重，按下式計(jì)算出膏率。

出膏率（%）=W＼WO×100%式中：W為浸膏重量;WO為藥材重量。

2.2提取工藝條件的研究

2.2.1 水提工藝的正交試驗(yàn)

對提取工藝影響較大的因素有加水倍量、提取時(shí)間、提取次數(shù)。藥材吸水量測定結(jié)果顯示吸水量等于藥材總量的3.73倍，因此選擇加水倍量為10、12、14。以干膏綠原酸提取量作為評分標(biāo)準(zhǔn)，采用L9（34）正交表進(jìn)行提取工藝的優(yōu)化篩選，因素水平見表1。

方法：分別稱取金銀花9份，每份100g，按正交表進(jìn)行試驗(yàn)，加水回流提取，濾過，濾液濃縮干燥后、測定干膏重量及水分，照中國藥典2015年版一部金銀花含量測定項(xiàng)下方法測定綠原酸含量，以每1g飲片綠原酸的提取量作為綜合評分標(biāo)準(zhǔn)，并對其進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

結(jié)果表明，以綠原酸提取量為評分指標(biāo)，影響提取工藝的因素作用順序?yàn)樘崛〈螖?shù)>加水量>提取時(shí)間，由表3可知，A（提取時(shí)間）、B（提取次數(shù)）、C（加水量）因素均無顯著性影響，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際考慮，確定金銀花最佳提取工藝為A1B2C3，也即加水14倍，提取2次，每次0.5小時(shí)。

2.2.2最佳提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果篩選的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。取金銀花，共3份，分別加水14倍提取2次，每次提取0.5小時(shí)，提取液濾過，減壓濃縮，干燥，稱重，計(jì)算出膏率并測定綠原酸提取量，結(jié)果見表4。

由表4結(jié)果可知，三批金銀花中綠原酸的提取量分別為11.95mg/g、11.23mg/g、11.12mg/g，RSD值為3.94%，篩選出的提取工藝穩(wěn)定可行。確定金銀花配方顆粒的提取工藝為：金銀花加水14倍，提取2次，每次0.5小時(shí)。

2.2.3金銀花質(zhì)量的含量檢測

照正文色譜條件，對三批金銀花配方顆粒進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表19。

根據(jù)測定結(jié)果，結(jié)合實(shí)際情況，擬定本品按干燥品計(jì)算，每1g含綠原酸（C16H18O9）不得少于20.0mg，含木犀草苷（C21H20O11）不得少0.40mg。符合《中國藥典》2015年版一部金銀花綠原酸含量限度為1.5%，木犀草苷含量限度為0.050%。

3結(jié)論

通過正交實(shí)驗(yàn)，確定最佳提取工藝為：金銀花加水14倍，提取2次，每次0.5小時(shí)。經(jīng)重復(fù)試驗(yàn)提示，篩選得到的金銀花配方顆粒綠原酸最佳提取工藝條件穩(wěn)定可行，且綠原酸提取量與出膏率都較高。

4討論

中藥配方顆粒克服了中藥飲片煎煮時(shí)、服用量大的缺點(diǎn)，避免了因煎煮費(fèi)時(shí)、服用量大的缺點(diǎn)，避免了因煎煮方法不當(dāng)而直接影響藥物藥效。有利中藥工業(yè)化、產(chǎn)業(yè)化、，進(jìn)一步加深與國際市場的聯(lián)系。中藥劑型的進(jìn)步為全人類的發(fā)展提供了便利[4]。但我們也要認(rèn)識到中藥配方顆粒的研究和發(fā)展還不成熟，還有很多我們沒有攻克的難題，如中藥配方顆粒成本較高、復(fù)方合煎與單煎混合液化學(xué)成分的異同等等[5]，因此加快推進(jìn)中藥顆粒配方技術(shù)的進(jìn)步，是現(xiàn)階段需要解決的問題。

綠原酸和木犀草苷是金銀花中兩種有效的生理活性物質(zhì)，綠原酸是抗菌解毒，消炎利膽的主要活性物質(zhì)，而木犀草苷則具有抗腫瘤、抗誘變、抗感染等藥理活性。2005年新版中華人民共和國國藥典將忍冬（Lonicera japonica Thunb）作為金銀花藥材的唯一來源，規(guī)定綠原酸和木犀草苷作為金銀花的質(zhì)量檢測指標(biāo)。因此研究金銀花顆粒中綠原酸的最佳提取工藝時(shí)，要充分考慮木犀草苷的提取量。

綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚三個(gè)不穩(wěn)定部分。在從植物提取過程中，往往通過水解和分子內(nèi)酯基遷移而發(fā)生異構(gòu)化。由于綠原酸本身的不穩(wěn)定性，提取時(shí)不能高溫、強(qiáng)光及長時(shí)間加熱。因此，生產(chǎn)金銀花配方顆粒時(shí)，盡量做到提取后立刻濃縮，即使需要放置，需對儲液罐增加冷卻系統(tǒng)。以減少綠原酸的損耗。

參考文獻(xiàn)：

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[3]王慶華，杜婷婷，張智慧，等.綠原酸的藥理作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（10）：2273-2280.

[4]陳平.中藥配方顆粒對豐富、發(fā)展傳統(tǒng)中藥湯劑的作用與意義[J].中華中醫(yī)藥雜志，2005，020（005）：314-315.

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基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目，項(xiàng)目名稱：蒙中藥配方顆粒提取工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究