肺結(jié)核早期進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗結(jié)合結(jié)核菌素試驗在臨床診斷中的作用

溫曉萍（廣東省惠州市職業(yè)病防治院,廣東 惠州 516001）

“肺結(jié)核”是一種臨床常見、具有一定傳染性的呼吸系統(tǒng)疾病，主要病因是結(jié)核分枝桿菌感染，對患者的生活、工作均造成嚴(yán)重影響[1]。流行病學(xué)顯示，肺結(jié)核在我國各類傳染疾病中，發(fā)病數(shù)與死亡數(shù)均高居第二位。糖尿病、塵肺病、免疫力低下、HIV感染者是肺結(jié)核易感人群，需要每年做結(jié)核病檢查，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療[2]。肺結(jié)核的臨床檢查、診斷主要采用影像學(xué)檢查，例如胸部X線檢查、CT檢查等[3]。除此之外，細(xì)菌學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢驗、病理學(xué)檢查、免疫學(xué)檢查等，在臨床診斷肺結(jié)核中也有非常好的應(yīng)用，可以提高肺結(jié)核的整體檢出率與診斷準(zhǔn)確率[4]。結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗如今在臨床診斷肺結(jié)核中有廣泛應(yīng)用，并且取得了良好的診斷效果[5]。該檢查操作簡單、費用低，對患者影響小，容易被患者接受，且無輻射傷害，適用范圍廣。但是，由于肺結(jié)核患者的年齡、病情嚴(yán)重程度不同，加上部分患者合并其他肺部疾病、重要組織器官疾病，可能對檢查結(jié)果造成干擾，降低診斷準(zhǔn)確性[6]。因此，對肺結(jié)核患者進(jìn)行單獨的結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗或結(jié)核菌素試驗，都比較容易出現(xiàn)誤診、漏診，因此考慮聯(lián)合檢驗，可提高診斷準(zhǔn)確性[7]。本次研究中，對87例2020年5月-2021年5月期間醫(yī)院收治的疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗、結(jié)核菌素試驗，探究結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗聯(lián)合診斷對肺結(jié)核早期臨床診斷的作用，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇醫(yī)院收治的87例疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行研究（時間2020年5月-2021年5月），對患者先后進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗、結(jié)核菌素試驗。87例患者中，男性、女性患者數(shù)量分別為47例和40例。其中患者最大年齡者68歲，最小年齡者28歲，年齡平均值為（48.67±2.64）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①疑似肺結(jié)核患者均通過痰結(jié)核分枝桿菌檢驗進(jìn)行肺結(jié)核鑒別診斷；②患者及家屬知情并同意參加研究，對本次研究認(rèn)可，簽署知情同意書；③患者病情穩(wěn)定，精神狀況良好；④研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)檢驗確診為惡性腫瘤者；②患者患有精神疾病，或有嚴(yán)重認(rèn)知障礙；③合并呼吸系統(tǒng)感染性疾?。虎芤缽男圆?，不愿配合、參加研究者。

1.2 方法 患者均接受結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗，以痰細(xì)胞結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為“金標(biāo)準(zhǔn)”。進(jìn)行檢驗前，由醫(yī)生對患者做病情介紹，并解釋、說明結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗的具體操作、意義、作用、注意事項及費用等，并征得患者同意。

1.2.1 結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗 使用北京萬泰試劑盒，使用空白對照管N管和含有MTB RD1基因表達(dá)的CFP10和ESAT6刺激源的T管以及含有對哺乳動物T淋巴細(xì)胞具有普遍刺激的植物血凝素PHA。使用肝素鋰采集受檢患者的全血，分裝1ml到N、T、P培養(yǎng)管，培養(yǎng)20-24小時，使用酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)后血漿中INF-γ含量來分析受試者體內(nèi)是否存在MTB致敏的T淋巴細(xì)胞。結(jié)果判斷規(guī)則：①N≥5000或N＜5000且（T-N＜14或T-N＜N/4）為不確定。②N＜5000且（T-N≥14且T-N＞N/4）為陽性。③N＜5000且（T-N＜14或T-N＜N/4）且P-N≥20為陰性。

1.2.2 結(jié)核菌素試驗 使用5IU人型純蛋白衍生物，對患者進(jìn)行皮內(nèi)注射，對患者進(jìn)行注射后72h觀察，觀察局部硬結(jié)、紅暈。紅暈、硬結(jié)直徑≥0.5cm，為陽性。僅有針眼大小紅點或紅腫，硬結(jié)直徑＜0.5cm，為陰性。

1.2.3 痰細(xì)胞結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng) 患者自己留痰，留取晨間痰、即時痰和夜間痰，作為痰液樣本。樣本在帶螺旋的塑料痰盒放置并冷藏送檢。選擇結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基，做好樣本編號、填寫患者信息后，將4%氫氧化鈉溶液6-10mL加入檢驗樣本，進(jìn)行0.5-1.0min的振蕩處理，放置在室溫下靜置15min。將預(yù)處理后的0.1mL痰稀釋液在培養(yǎng)基中接種，并放置在37℃環(huán)境中孵育。觀察記錄接種后的痰結(jié)核分枝桿菌培育情況，從接種3-7d后開始。培養(yǎng)基上的菌落通過染色處理觀察分析是否為結(jié)核分枝桿菌。菌落占培養(yǎng)基斜面面積超過1/4則認(rèn)定為陽性。連續(xù)觀察至第8周，培養(yǎng)基上依然無菌落生長，視為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) 對比單獨進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗、結(jié)核菌素試驗，以及聯(lián)合檢驗對肺結(jié)核早期診斷的準(zhǔn)確性。標(biāo)準(zhǔn)為痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，對陽性、陰性結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計。計算診斷符合率、靈敏度、特異度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS25.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究中獲取數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用(±s)形式表示，進(jìn)行t檢驗；計數(shù)資料采用[n(%)]形式表示，進(jìn)行χ2檢驗，P＜0.05表示數(shù)據(jù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

87例疑似肺結(jié)核患者通過痰細(xì)胞結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，陽性病例56例、陰性病例31例。結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗診斷結(jié)果：陽性52例，陰性35例，其中真陽性48例、真陰性27例，假陽性（誤診）4例和假陰性（漏診）8例。結(jié)核菌素試驗結(jié)果：陽性50例，陰性37例，其中真陽性47例、真陰性28例，假陽性（誤診）3例和假陰性（漏診）9例。聯(lián)合檢驗結(jié)果：陽性56例，陰性31例，其中真陽性54例、真陰性29例，假陽性（誤診）和假陰性（漏診）各2例。見表1。

表1 肺結(jié)核早期診斷中不同檢驗方式診斷準(zhǔn)確性比較[n(%)]

3 討論

結(jié)核病是結(jié)核分枝桿菌感染引起的一種較為常見的呼吸系統(tǒng)疾病，具有傳染性，疾病危害范圍廣，社會危害大[8-10]。結(jié)核病早期診斷對于及時采取有效治療措施，阻止病情發(fā)展，降低傳染性有重要作用。影像學(xué)檢查雖然在結(jié)核病的鑒別診斷中有較高的準(zhǔn)確性，但是檢查費用高，且無法對病情的嚴(yán)重程度及疾病類型進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，應(yīng)用有限制。痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)是目前臨床上診斷結(jié)核病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是診斷所需時間比較長[11-13]。結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗、結(jié)核菌素試驗?zāi)壳霸谂R床診斷結(jié)核病中應(yīng)用逐漸增多，診斷準(zhǔn)確性方面存在一些差異。徐麗丹[14]等的研究中對兒童結(jié)核感染患兒進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗與結(jié)核菌素試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗的整體效果好于結(jié)核菌素試驗。張小軍[15]等的研究中指出，結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗聯(lián)合結(jié)核菌素試驗對于肺結(jié)核早期診斷有很高的價值，聯(lián)合檢驗的敏感度高，假陰性率低，與本次研究結(jié)果相近。本研究中聯(lián)合檢驗的診斷準(zhǔn)確性明顯高于單獨檢驗。分析原因為：結(jié)核菌素試驗使用純蛋白衍生物，采用皮內(nèi)注射法觀察注射局部的紅腫、硬結(jié)程度，能為接種卡介苗提供依據(jù)[16-19]。該檢驗操作簡單、方便，但是因為檢驗成分是結(jié)核菌素純蛋白衍生物，其中抗原成分與卡介苗、肺結(jié)核分枝桿菌相同，使得部分接種過卡介苗人群或者免疫低下、使用過免疫抑制劑的人群發(fā)生交叉反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性診斷結(jié)果[20-21]。結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗通過人體結(jié)核桿菌特異性抗原進(jìn)行刺激，對人體T淋巴細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)答進(jìn)行了解，通過培養(yǎng)后檢測T淋巴細(xì)胞濃度，確定受檢者是否被結(jié)核分枝桿菌感染。檢驗時間短，且不會受到卡介苗的影響[22]。

本研究中，聯(lián)合檢驗的診斷準(zhǔn)確性明顯高于單獨檢驗，說明聯(lián)合進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗可以提高對肺結(jié)核的診斷準(zhǔn)確性。

綜上所述，肺結(jié)核早期診斷中聯(lián)合應(yīng)用結(jié)核感染T細(xì)胞檢驗與結(jié)核菌素試驗具有重要作用，值得推廣使用。