天然冰片微乳凝膠的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)

葉小玲 趙瑩 王楠 張聲源 賴澤佳 袁麗婷 聶華

【摘 要】 目的：研究天然冰片微乳凝膠的處方與制備工藝，并對(duì)其質(zhì)量與穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：通過(guò)配伍試驗(yàn)與偽三元相圖篩選并優(yōu)化微乳處方與工藝，采用凝膠加入法制備天然冰片微乳凝膠，并對(duì)其外觀性狀、pH值、黏度、保濕率與藥物濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：所得天然冰片微乳凝膠處方：天然冰片2.2%、聚氧乙烯蓖麻油（EL）9.1%、1，2-丙二醇1.8%、蓖麻油3.6%、卡波姆0.6%、甘油3.8%、加水至50g;天然冰片微乳凝膠外觀澄清透明、均勻細(xì)膩、黏稠度適中、涂展性良好;平均粒徑（45.28±7.95）nm，pH值5.43±0.02，保濕率（93.55±0.29）%，黏度（41883±5）mPa·s，含天然冰片（20.34±0.21）mg/g;耐熱耐寒試驗(yàn)表明天然冰片微乳凝膠應(yīng)低溫貯存。結(jié)論：天然冰片微乳凝膠制備工藝簡(jiǎn)單，符合凝膠局部外用制劑主要指標(biāo)要求，為進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 天然冰片;微乳凝膠;正交試驗(yàn);偽三元相圖;質(zhì)量評(píng)價(jià)

【中圖分類號(hào)】R284?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）02-0027-09

Preparation and Quality Evaluation of Natural Borneol Microemulsion Gel

YE Xiaoling1，2 ZHAO Ying1，2 WANG Nan2 ZHANG Shengyuan1，2，3 LAI Zejia1 YUAM Liting1 NIE Hua1，2，3*

1.Medical College of Jiaying University， Meizhou 514031，China;

2.Guangdong Provincial Key Laboratory of Conservation and Precision Utilization of Characteristic

Agricultural Resources in Mountainous Areas， Jiaying University， Meizhou 514031， China;

3.Institute of Hakka Medicinal Bio-resources， Medical College， Jiaying University， Meizhou 514031， China

Abstract：Objective To study the prescription and preparation technology of natural borneol microemulsion gel. The quality and the stability were evaluated. Methods The prescription and preparation technology were selected and optimized through the compatibility test and thepseudo-ternary phase diagram. natural borneol microemulsion gel was prepared by adding gelation. The appearance， pH value， viscosity， moisturerate， and the drug concentration were evaluated. Results The prescription composition of natural borneol microemulsion gel was natural borneol （2.2%）， CremophorEL（9.1%）， 1，2-propanediol（1.8%）， castoroil（3.6%）， carbopol-940（0.6%）， glycerol（2%）， with ultrapure water adding to 50 g. The optimum formulation exhibited clear and transparent， uniform exquisite， moderate viscosity， and well spreadable， with the particle diameter of? （45.28±7.95）nm， pHvalueof （5.43±0.02）， moisture rate of （93.55±0.29）%， The result of heat and cold resistance test showed that the preparation was needed to be stored at low-temperature.Conclusion The preparation of CVO microemulsion gel is simple， corresponding to the main index of topical gel preparation and offering the basis for further research and development.

Key words：Natural Borneol; Microemulsion Gel; Orthogonal Test; Pseudo Ternary Phase Diagram; Quality Evaluation

天然冰片是一味重要的中藥，具有清熱止痛、防腐生肌、抗菌消炎的作用[1]，臨床上可用于治療燒燙傷、皮膚瘙癢癥[2]等疾病，因此，在外用制劑中應(yīng)用廣泛。但由于天然冰片在水中幾乎不溶，且易升華，影響了它的療效和研究開(kāi)發(fā)。近年來(lái)，微乳凝膠以其良好的生物相容性、無(wú)毒、增溶和促進(jìn)藥物透皮吸收[3]、對(duì)藥物分散性好、穩(wěn)定性高、維持血藥濃度[4]等特性引起人們的高度重視。因此，本實(shí)驗(yàn)以微乳凝膠為載體包裹天然冰片，以期提高天然冰片的溶解度和生物利用度，增加制劑穩(wěn)定性，最終提高藥物療效。

1 材料

1.1 儀器? FA2004電子分析天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;85-2恒溫磁力攪拌器，金壇市新航儀器廠;pH酸度計(jì)，南京科環(huán)分析儀器有限公司; UV-7504單束光紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海欣茂儀器有限公司;粒徑測(cè)定儀，美國(guó)產(chǎn);氣相色譜儀（日本島津GC-14B/FID）;Viscolead One 黏度計(jì)，紡吉萊博（Fungilab）科技（北京）有限公司;TG16-WS高速離心機(jī)，上海趙迪生物科技有限公司;XMTD-8222電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱;JP-100S超聲波清潔器，深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市科析儀器有限公司。

1.2 藥物與試劑 天然冰片（自制，含右旋龍腦98.0%）;肉豆蔻異丙酯（批號(hào)11606023）、聚氧乙烯蓖麻油EL（批號(hào)C1812053）、曲拉通X-100（批號(hào)D1728071）、油酸乙酯（批號(hào)B1626080）均購(gòu)自阿拉丁試劑有限公司;1，2-丙二醇（批號(hào)049795001430），美國(guó)陶氏;卡波姆-940（批號(hào)20170625）、蓖麻油（批號(hào)20170911）、橄欖油（批號(hào)20170501），河南省龍華藥業(yè)有限公司;吐溫-80（批號(hào)20170608），天津市大茂化學(xué)試劑廠;三乙醇胺（批號(hào)201810），天津市廣成化學(xué)試劑有限公司;甘油（批號(hào)20171201），南昌華鑫醫(yī)藥化工有限公司;乙酸乙酯（批號(hào)20190117），西隴科學(xué)股份有限公司;水為超純水;其他試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 天然冰片的提取[5-6] 稱取梅州產(chǎn)香樟樹(shù)葉150 g，水蒸氣蒸餾3.5 h，收集餾出物后，加入過(guò)量的無(wú)水硫酸鈉充分振蕩，靜置20 min;使用循環(huán)水式真空泵抽濾裝置，對(duì)混合物進(jìn)行抽濾，所得不含水分透明液體置于蒸發(fā)皿中，升華純化得白色晶體。稱量、計(jì)算天然冰片的得率。天然冰片平均得率為1.34%。

2.2 天然冰片微乳的處方篩選與優(yōu)化

2.2.1 微乳的制備[7] 稱取適量的天然冰片加入到油相中、加入適量的乳化劑和助乳化劑，水浴加熱，攪拌均勻至完全溶解，得淡黃色澄清透明的油相混合物，置于恒溫磁力攪拌下，采用水滴加入法，緩緩地將水滴入該油相混合物中乳化，即得微乳。

2.2.2 油相、乳化劑、助乳化劑的配伍試驗(yàn) 分別以蓖麻油、油酸乙酯、橄欖油、肉豆蔻酸異丙酯為油相，以聚氧乙烯蓖麻油（EL-35）、曲拉通X-100、吐溫-80為乳化劑，以1，2-丙二醇、PEG-400為助乳化劑，將油相、乳化劑與助乳化劑以1∶4∶1的比例混合，在磁力攪拌器攪拌下，加入50 mL的水，以成乳后的溶液狀態(tài)、色澤等為指標(biāo)考察乳化情況，結(jié)果見(jiàn)表1。經(jīng)過(guò)不同油相和乳化劑、助乳化劑的組合配伍實(shí)驗(yàn)得知，以橄欖油和油酸乙酯為油相的組合，所得溶液幾乎為白色乳液，并且放置后出現(xiàn)分層現(xiàn)象;以吐溫80為乳化劑的組合，所得溶液澄清，微透明，無(wú)乳光，放置出現(xiàn)分層現(xiàn)象;而曲拉通X-100為乳化劑的組合，雖能得到澄清透明并帶乳光的溶液，但得到的溶液放置易分層;以PEG400為助乳化劑的組合，所得的溶液大多為微澄清，不透明。故這五種輔料的配伍組合不適于作為微乳的輔料。從表1中的數(shù)據(jù)可知，以蓖麻油、肉豆蔻酸異丙酯為油相，以聚氧乙烯蓖麻油為乳化劑，1，2-丙二醇為助乳化劑組合所得的微乳澄明度較好，有乳光，且15000 r·min-1離心30 min后無(wú)分層，常溫避光靜置1周后微乳穩(wěn)定。

2.2.3 偽三元相圖的繪制? 根據(jù)配伍試驗(yàn)結(jié)果，分別稱取適量蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和1，2-丙二醇;IPM、聚氧乙烯蓖麻油和1，2-丙二醇，首先按乳化劑與助乳化劑的質(zhì)量比（Km）=9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、2∶8、1∶9配制一系列乳化劑與助乳化劑混合物，再將各混合物與油相分別以9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、2∶8、1∶9的質(zhì)量比混合，固定體系總質(zhì)量為1.0 g，30 ℃水浴加熱溶解，攪拌均勻得油相混合物。于恒溫磁力攪拌下，分別將該油相混合物滴入50 mL水中乳化，并進(jìn)行外觀評(píng)價(jià)，篩選出外觀澄清藍(lán)色溶液或藍(lán)白色溶液的處方。采用Origin 2017版軟件繪制蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和1，2-丙二醇;IPM、聚氧乙烯蓖麻油和1，2-丙二醇偽三元相圖，確定微乳區(qū)域，如圖1所示。由相圖結(jié)果可知，圖1-A微乳區(qū)域面積最大，在此區(qū)域內(nèi)乳化效果較好。結(jié)合配伍試驗(yàn)與偽三元相圖結(jié)果，篩選蓖麻油為油相，聚氧乙烯蓖麻油為乳化劑，1，2-丙二醇為助乳化劑，且選擇載油量最大、乳化劑用量相對(duì)少的處方為最優(yōu)處方。因此，確定蓖麻油-聚氧乙烯蓖麻油-1，2-丙二醇質(zhì)量比為2∶5∶1。

2.3 天然冰片微乳的制備工藝考察

2.3.1 乳化溫度的選擇 按質(zhì)量比為2∶5∶1分別精密稱取聚氧乙烯蓖麻油0.3125 g，1，2-丙二醇0.0625 g，蓖麻油0.125 g，總量為0.5 g，加入0.0764 g天然冰片，置于水浴加熱充分?jǐn)嚢柚寥芙?，得淡黃色清澈透明的混合油相，將該油相置于乳化溫度分別為30、40、50、60 ℃，轉(zhuǎn)速為150 r·min-1恒溫磁力攪拌下，向其逐滴滴入25 mL水充分乳化。通過(guò)研究比較在不同溫度下所制成的微乳液外觀，透光率（紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法：稱取樣品0.1 g，加水稀釋并定容至10 mL，以水為空白對(duì)照，在430 nm處測(cè)定）來(lái)探究溫度對(duì)天然冰片微乳制備的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。隨著溫度的升高，天然冰片微乳的透光率越來(lái)越低，即所得的微乳粒徑越來(lái)越大，綜合評(píng)價(jià)各評(píng)價(jià)指標(biāo)值確定最適宜的乳化溫度為30 ℃，在該溫度下，所得微乳的粒徑最小，澄清透明有藍(lán)光。

2.3.2 稀釋倍數(shù)的確定 按質(zhì)量比為2∶5∶1分別精密稱取聚氧乙烯蓖麻油0.3125 g，1，2-丙二醇0.0625 g，蓖麻油0.125 g，總量為0.5 g，加入0.0764 g天然冰片，水浴加熱，充分?jǐn)嚢枞芙猓玫接拖嗷旌衔?，將恒溫磁力攪拌器的溫度調(diào)至2.3.1項(xiàng)下確定的最佳乳化溫度，轉(zhuǎn)速為150 r·min-1，分別緩慢滴入1.25、2.5、5、10、15、25 mL水進(jìn)行乳化，制備形成微乳。通過(guò)研究比較所制成的微乳外觀性狀與透光率（紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法：稱取樣品0.1 g，加水稀釋并定容至10 mL，以水為空白對(duì)照，在430 nm處測(cè)定）兩個(gè)主要篩選指標(biāo)，確定適宜的稀釋倍數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表3。隨稀釋倍數(shù)的增大，微乳的透光率也隨著增大，即粒徑也隨著變小。當(dāng)水≥1.25 mL，即稀釋倍數(shù)≥10倍時(shí)，均能形成澄清透明淡藍(lán)色天然冰片微乳，透光率均>80%，常溫靜置24 h微乳的仍穩(wěn)定。因此，選擇油水的質(zhì)量比為1∶10。

2.4 單因素考察空白凝膠處方

2.4.1 凝膠的制備 稱取適量卡波姆-940，加入適量甘油潤(rùn)濕，加水至25 g，充分?jǐn)嚢杈鶆?，靜置24 h，使凝膠基質(zhì)得到充分溶脹，加入體積分?jǐn)?shù)為20%三乙醇胺溶液，對(duì)凝膠基質(zhì)的pH進(jìn)行調(diào)節(jié)，于離心機(jī)中以5000 r·min-1離心5 min脫氣，即得。

2.4.2 卡波姆-940用量的篩選 稱取適量卡波姆-940粉末，加水至25 g，攪拌均勻，靜置24 h使其充分溶脹，以凝膠基質(zhì)的的外觀性狀、黏稠程度、涂抹性能和黏度[（25±2）℃，4號(hào)轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速為12 r/min]為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探究卡波姆-940用量分別為0.3%、0.5%、0.8%、1.1%、1.3%、1.5%對(duì)凝膠的影響。其中，外觀包括凝膠的澄清透明度，有無(wú)光澤，有無(wú)沉淀等。涂展性分為輕質(zhì)-快速鋪展、中質(zhì)-慢速鋪展與厚質(zhì)-難以鋪展[3]，卡波姆-940用量的篩選結(jié)果見(jiàn)表4，當(dāng)卡波姆的用量范圍在0.8%～1.2%時(shí)，凝膠的外觀澄清透明，均勻細(xì)膩，黏稠度適中且涂展性良好。

2.4.3 甘油用量的篩選 稱取卡波姆0.15 g，分別加入5%、8%、10%、12%、15%的甘油潤(rùn)濕，加水至25 g，攪拌均勻，靜置24 h使其充分溶脹，以凝膠的外觀、粘稠度、油膩感、涂抹性能、黏度與保濕率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察甘油的用量范圍，結(jié)果見(jiàn)表5。研究發(fā)現(xiàn)凝膠的粘稠度隨甘油的用量的增加而增大，當(dāng)甘油用量≥10%時(shí)，油膩性，粘稠度，涂展性越來(lái)越強(qiáng)，降低了凝膠的質(zhì)感，保濕性差異不明顯。當(dāng)甘油用量為5%～8%時(shí)，凝膠的粘稠度適中，不油膩，容易涂展。因此，選擇甘油的用量范圍為5%～8%。

2.4.4 pH值的篩選 稱取卡波姆0.15 g，甘油0.95 g潤(rùn)濕，加水至25 g，攪拌均勻，靜置24 h，使凝膠基質(zhì)得到充分溶脹，加入20%三乙醇胺溶液調(diào)節(jié)凝膠基質(zhì)的pH分別至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，以凝膠的外觀性狀、粘稠度、成型效果、涂抹性能和黏度為篩選指標(biāo)，研究出pH的用量范圍，結(jié)果見(jiàn)表6。研究發(fā)現(xiàn)，凝膠的粘稠度隨pH的增大而增大。當(dāng)調(diào)節(jié)pH為4.0時(shí)，很容易涂展，粘稠度較低，流動(dòng)性也較強(qiáng)，不符合凝膠劑的要求，當(dāng)調(diào)節(jié)pH值為7.0時(shí)，過(guò)于粘稠，涂展性能較差，出現(xiàn)結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，也不符合凝膠劑的要求。因此，確定凝膠的pH范圍為5.0～6.0。

2.4.5 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化凝膠處方 由單因素篩選結(jié)果，初步得出了空白凝膠的配方組成及其各成分的用量范圍：卡波姆-940用量X1%～X2%，甘油用量Y1%～Y2%，20%體積分?jǐn)?shù)三乙醇胺溶液調(diào)節(jié)pH值Z1～Z2。設(shè)計(jì)卡波姆-940的質(zhì)量（A）、甘油的質(zhì)量（B）、pH值（C）為篩選因子，并且為每個(gè)因子選擇3個(gè)水平，采用L9（34）因素水平表進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以空白凝膠基質(zhì)外觀、粘稠度、油膩性與涂抹性能，保濕率為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)各占20分，計(jì)算出綜合評(píng)分進(jìn)行比較，篩選空白凝膠最佳組成和比例。正交設(shè)計(jì)因素水平及結(jié)果見(jiàn)表7，方差分析結(jié)果見(jiàn)表8。

根據(jù)表7結(jié)果，選擇直觀分析方法，通過(guò)對(duì)正交設(shè)計(jì)的結(jié)果進(jìn)行極差比較分析，得出空白凝膠的影響因素依次為A（卡波姆-940用量）>C（pH值）>B（甘油用量），即卡波姆-940用量對(duì)凝膠基質(zhì)的影響最大，其次是pH值的影響，甘油用量對(duì)凝膠基質(zhì)的影響最小。由正交設(shè)計(jì)結(jié)果可以篩選出最優(yōu)凝膠基質(zhì)處方為A1B1C1。根據(jù)凝膠處方篩選的方差分析可得，卡波姆-940和甘油的處方用量，與pH值三者的F值均<19.00（表8），表明3者對(duì)凝膠基質(zhì)處方的綜合評(píng)分都無(wú)顯著性影響（P>0.05）。因此，可以得出空白凝膠基質(zhì)的最佳處方為A1B1C1，即0.8%卡波姆、5%甘油、調(diào)節(jié)pH值為5.1。

2.5 天然冰片微乳凝膠的制備 根據(jù)配伍試驗(yàn)與偽三元相圖篩選并優(yōu)化處方，結(jié)合制備工藝考察及凝膠處方篩選方法，得天然冰片微乳凝膠制備方法如下：稱取天然冰片0.3 g加入到0.5 g蓖麻油中、加入聚氧乙烯蓖麻油（EL）1.25 g和1，2-丙二醇0.25 g，于30 ℃水浴加熱至完全溶解，攪拌均勻得黃色澄清透明油狀混合物，將該油相混合物于30 ℃恒溫磁力攪拌下，將其緩緩滴入5 mL水中乳化，制得澄清透明、淡藍(lán)乳光的天然冰片微乳。稱取0.084 g卡波姆-940，加入甘油0.525 g潤(rùn)濕，加水至10.8 g，攪拌均勻，靜置24 h使其充分溶脹作為凝膠基質(zhì)。將天然冰片微乳緩慢加至已溶脹好的凝膠基質(zhì)中，攪拌均勻，滴加體積分?jǐn)?shù)為20%三乙醇胺溶液調(diào)pH值至5.43，于4000 r/min離心5 min除去氣泡，獲得澄清均勻細(xì)膩、黏稠度適中，且涂展性良好的天然冰片微乳凝膠。

2.6 微乳凝膠的質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.6.1 外觀性狀 所制成的微乳凝膠為外觀淡藍(lán)色澄清，均勻細(xì)膩、黏稠度適中，無(wú)油膩性，且涂展性良好的半固體。

2.6.2 微乳粒徑大小測(cè)定 取3份微乳液，用水稀釋5倍，用0.2 μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液采用粒徑測(cè)定儀測(cè)定其粒徑，粒徑分布圖與平均粒徑（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）及多分散體系數(shù)平均值見(jiàn)表10與圖2。

由表9與圖2的結(jié)果表明，天然冰片微乳的平均粒徑為（45.28±7.95）nm，多分散系數(shù)為（0.258±0.126），粒度分布均勻。

2.6.3 pH值測(cè)定 取3批微乳凝膠中分別稱取1 g置于小燒杯中，并加入25 mL的水稀釋，用pH計(jì)分別測(cè)定其pH值。結(jié)果得出，微乳凝膠的pH 值分別為5.43、5.45、5.41，所得的pH值符合外用制劑關(guān)于pH的要求。

2.6.4 保濕率的測(cè)定 取3批天然冰片微乳凝膠適量，精密稱重記為（m1），置于溫度為（25±2）℃、相對(duì)濕度（RH）為40%（飽和碳酸鉀溶液）的恒溫恒濕干燥器中。放置24 h后，取出樣品，精密稱重記為（m2），根據(jù)公式：保濕率=m2/m1，計(jì)算樣品的保濕率。測(cè)得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，微乳凝膠的保濕率平均值為（93.55±0.29）%，表明其有良好的保濕性能，有利于在皮膚上涂布。

2.6.5 黏度的測(cè)定 取3批天然冰片微乳凝膠適量，采用Viscolead One黏度計(jì)測(cè)定微乳凝膠的黏度，結(jié)果天然冰片微乳凝膠的黏度分別為41889、41881、41879 mPa·s，RSD為0.01%（n=3）。

2.7 天然冰片微乳凝膠的定量測(cè)定

2.7.1 色譜條件 色譜柱：SE-30毛細(xì)管柱（30 m×250 μm×0.25 μm）;檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）;進(jìn)樣口溫度：245 ℃;檢測(cè)器溫度：245 ℃;初始柱溫80 ℃，程序升溫，升溫速度：10 ℃/min，最終柱溫220 ℃，保溫3 min;載氣：氮?dú)?流速：0.5 mL/min;進(jìn)樣量：2 μL。

2.7.2 專屬性考察 ①天然冰片對(duì)照品溶液：精密稱取天然冰片對(duì)照品15 mg，置于50 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使其溶解并稀釋至刻度，搖勻即得;②供試品溶液：精密稱取天然冰片微乳凝膠2.0 g，乙酸乙酯溶解并定容至100 mL量瓶中，超聲混勻，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1.0 mL至10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，搖勻即得;③空白對(duì)照品溶液：精密稱取不含天然冰片微乳凝膠2.0 g，乙酸乙酯溶解并定容至100 mL量瓶中，超聲混勻，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1.0 mL至10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，搖勻即得。按照上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果如圖3所示。天然冰片保留時(shí)間為9.3 min，供試品中天然冰片色譜峰與其他組分分離良好，且空白對(duì)照品無(wú)干擾。

2.7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取1 mL、2 mL、4 mL、8 mL、10 mL對(duì)照品溶液，分別置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，按上述色譜條件測(cè)定。以天然冰片對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=84965x+859.0，r=0.9994。結(jié)果天然冰片溶液在0.03～0.3 mg/mL線性關(guān)系良好。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 精密移取天然冰片對(duì)照品溶液2 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得天然冰片峰面積RSD為1.8%。

2.7.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密移取2μL供試品溶液于0、1、2、3、4、6 h后注入氣相色譜儀，測(cè)得天然冰片峰面積RSD為1.6%，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.7.2項(xiàng)下②操作制備6份供試品溶液，依法測(cè)得天然冰片平均含量為19.92 mg/g，RSD為2.0%。

2.7.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量天然冰片微乳凝膠樣品（19.92 mg/g）9份，每份1g，分別精密加入0.0995 g/mL天然冰片對(duì)照液0.16、0.2、0.24 mL各3份，按“供試品溶液”制備項(xiàng)下方法制備9份溶液，依法測(cè)得峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果平均回收率為99.93%，RSD為1.49%（n=9）。見(jiàn)表10。

2.7.8 樣品測(cè)定 分別取3批天然冰片微乳凝膠各2.0 g，乙酸乙酯溶解并定容至100 mL量瓶中，超聲混勻，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1.0～10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，搖勻即得。按照上述色譜條件測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算天然冰片微乳凝膠中含天然冰片質(zhì)量濃度。結(jié)果3批次天然冰片微乳凝膠中含天然冰片的質(zhì)量濃度分別為19.56、20.34、20.15 mg/g。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.8.1 高速離心試驗(yàn) 取3批微乳凝膠適量，分別置于10 mL離心管中， 8000 r·min-1離心15min，結(jié)果3批天然冰片微乳凝膠離心后外觀淡藍(lán)色半透明，均勻細(xì)膩，未見(jiàn)分層，無(wú)油水分離等不穩(wěn)定現(xiàn)象，涂布性能良好，表明天然冰片微乳凝膠高速離心后穩(wěn)定。

2.8.2 耐寒試驗(yàn) 取3批微乳凝膠適量，置于-5 ℃冰箱中放置24 h，取出后恢復(fù)至室溫，觀察樣品結(jié)果與試驗(yàn)前樣品無(wú)明顯的差別。外觀仍舊是淡藍(lán)色半透明，未出現(xiàn)分層，變稀，泛粗、浮油，沉淀物等不穩(wěn)定現(xiàn)象，均勻細(xì)膩，涂布性能良好;3批天然冰片微乳凝膠的pH值分別為5.43、5.45、5.41;黏度分別為41898、41902、41894mPa·s;含天然冰片分別為21.09、20.35、20.83 mg/g。

2.8.3 耐熱試驗(yàn) 取3批微乳凝膠適量，置于40 ℃烘箱中放置12 h，取出恢復(fù)至室溫，結(jié)果外觀是淡藍(lán)乳白色半透明，未出現(xiàn)分層，但出現(xiàn)變稀，泛粗等不穩(wěn)定現(xiàn)象，涂布性能較差;3批天然冰片微乳凝膠黏度分別為41912、41887、41893 mPa·s;含天然冰片分別為19.65、19.73、20.30 mg/g。表明制劑應(yīng)低溫儲(chǔ)存。

3 討論

3.1 偽三元相圖的繪制 隨著Km的增大，即乳/助比例的增大，研究發(fā)現(xiàn)形成的微乳區(qū)域有明顯的先增大后減小的趨勢(shì)，其可能原因是乳化劑與助乳化劑在微乳液的形成過(guò)程中所發(fā)揮的作用不同，乳化劑在微乳的形成過(guò)程中，起著決定性作用，隨著其用量的增加，微乳越易形成且粒徑更加小，而助乳化劑是起著相當(dāng)于穩(wěn)定劑的作用，穩(wěn)定所形成的微乳，其用量的減少會(huì)影響微乳的穩(wěn)定性，不利于微乳的形成與儲(chǔ)存。所以在微乳制備過(guò)程中，必須確保乳化劑和助乳化劑保持適當(dāng)?shù)谋壤?，只有這樣才能制備出優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的微乳。

3.2 乳化溫度的選擇 在乳化溫度的確定過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)乳化溫度影響微乳的外觀性狀，澄清度，透光率及粒徑的大小，天然冰片微乳凝膠的透光率隨溫度的升高而降低，這從側(cè)面反應(yīng)微乳的粒徑隨溫度的升高而增大，微乳液的外觀由澄清透明有藍(lán)光變得藍(lán)白半透明。這是因?yàn)榉请x子型表面活性劑在充當(dāng)乳化劑時(shí)，隨著微乳液溫度升高，分子熱運(yùn)動(dòng)變得越發(fā)劇烈，與氧原子結(jié)合的水分子發(fā)生脫落，分子間形成的氫鍵遭到破壞，乳化劑的親水性降低，溶解度下降，使原來(lái)澄明的溶液變渾濁，影響其對(duì)油相的乳化能力[8]，因此為了保證最大的乳化效果，選擇30 ℃作為乳化的穩(wěn)定。

3.3 天然冰片微乳凝膠的制備 微乳凝膠常規(guī)的性狀是澄清透明或半透明，有淡藍(lán)光的，微乳與凝膠的加入方式對(duì)其有一定的影響，本實(shí)驗(yàn)前期采用卡波姆直接加入到微乳中，結(jié)果所制成的天然冰片微乳凝膠都是乳白色的，不透明這可能是因?yàn)楫?dāng)卡波姆-940粉末溶于微乳的水相時(shí)，改變了微乳處方中的油/水比例，破壞天然冰片微乳結(jié)構(gòu)，從而影響微乳的形成與穩(wěn)定。后期改用微乳緩慢加入凝膠基質(zhì)中，邊加邊攪拌，所得的微乳藍(lán)白色半透明，成型性好，粘稠度適中，符合外用制劑的相關(guān)要求。

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（收稿日期：2020-12-02 編輯：陶希睿）