青蒿琥酯對急性髓系白血病細(xì)胞株MV4-11增殖凋亡的調(diào)控作用

趙小強(qiáng)，吳雅莉，張曼，程英英，楊海平

[河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院（河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院）血液內(nèi)科，河南洛陽 471000]

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是一種血液系統(tǒng)惡性腫瘤，占急性白血病的20%～25%，是由骨髓造血前體細(xì)胞的分化受阻和惡性克隆引起的過度增殖從而導(dǎo)致的骨髓衰竭，具有惡性增殖、克隆進(jìn)化、遺傳異質(zhì)性等特征[1-2]。目前，AML的臨床治療主要是化療及自體和異基因造血干細(xì)胞移植，但多數(shù)患者治療緩解后出現(xiàn)復(fù)發(fā)、耐藥，僅有40%～45%的年輕患者和不足10%的老年患者生存期超過5年[3]。因此，亟需開發(fā)新型、低毒和高效的藥物治療AML。青蒿素是從中藥青蒿（菊科植物黃花蒿Artemisid annuaL.的全草）中提取的一種含過氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯，青蒿琥酯（artesunate）是其衍生物。青蒿琥酯具有抗瘧、抗感染、抗血管生成、抗膿毒癥、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤等功效[4]。近年研究顯示，青蒿琥酯對乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、肝癌及淋巴瘤具有抑制作用[5-9]。既往體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究均顯示，青蒿琥酯對白血病細(xì)胞系及小鼠移植瘤具有明顯抑制作用[10]。本研究以AML細(xì)胞株MV4-11為實(shí)驗(yàn)對象，探討青蒿琥酯的治療作用及機(jī)制，以期為青蒿琥酯相關(guān)藥物的研發(fā)及AML的臨床治療提供參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株人AML細(xì)胞株MV4-11，購自中國科學(xué)院（上海）細(xì)胞庫。細(xì)胞以含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的IMDM培養(yǎng)液在37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1周2次半換液傳代培養(yǎng)。

1.2 藥物、試劑與儀器注射用青蒿琥酯（廣西桂林南藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20133237）；復(fù)合物C（美國Sigma公司）；四甲基偶氮唑鹽（MTT）（美國Sigma公司）；膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（上海翌圣生物科技有限公司）；引物（由上海生工生物工程股份有限公司合成）；兔抗人腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抗體、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）抗體、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化的哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（pmTOR）抗體（美國Upstate公司）；兔抗人B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）抗體、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）抗體和β-actin抗體（美國Santa Cruz公司）；山羊抗兔辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的免疫球蛋白（IgG）（英國Abcam公司）。酶標(biāo)儀（美國BioTek公司）；流式細(xì)胞儀（美國BD公司）；熒光定量PCR儀、蛋白凝膠電泳儀（美國Bio-Rad公司）。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 MTT法檢測細(xì)胞增殖能力取對數(shù)生長期MV4-11細(xì)胞，以1×105個/mL的細(xì)胞密度接種于96孔板，每孔180μL。加入不同濃度青蒿琥酯（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/mL）20μL，對照組加入等體積培養(yǎng)液，每組設(shè)置3個復(fù)孔。培養(yǎng)24、48、72 h后，每孔加入MTT（5 mg/mL）20μL，孵育4 h。終止培養(yǎng)，每孔加入DMSO 150μL，微振蕩10 min。應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測各孔490 nm波長的吸光度（OD）值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。計算細(xì)胞增殖抑制率，細(xì)胞增殖抑制率（%）＝（對照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值）/對照組OD值×100%。采用Graphpad Prism 7.0軟件計算半數(shù)抑制濃度（IC50）。選擇作用48 h的IC50作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度。設(shè)置對照組、青蒿琥酯組、復(fù)合物C組和青蒿琥酯+復(fù)合物C組，青蒿琥酯組、復(fù)合物C組分別加入1.58μg/mL青蒿琥酯、50μmol/L復(fù)合物C，青蒿琥酯+復(fù)合物C組先后加入1.58μg/mL青蒿琥酯和50μmol/L復(fù)合物C，對照組加入等體積細(xì)胞培養(yǎng)液，均作用48 h，按照上述MTT法檢測細(xì)胞存活率，細(xì)胞存活率（%）=實(shí)驗(yàn)組OD值/對照組OD值×100%。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期與凋亡收集對照組、青蒿琥酯組、復(fù)合物C組和青蒿琥酯+復(fù)合物C組細(xì)胞。以1 000 r/min（離心半徑10 cm）離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；用預(yù)冷1×PBS（4℃）洗滌2次，加入預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)75%乙醇，4℃固定18 h，離心棄上清；PBS洗滌3次，加入RNA酶（Rnase）PI染色液37℃避光染色30 min。上流式細(xì)胞儀檢測，Modfit軟件分析細(xì)胞周期。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

收集各組細(xì)胞，以2 000 r/min（離心半徑15 cm）離心5 min，用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞，以2 000 r/min離心5 min，洗滌細(xì)胞2次；加入300μL的1×Binding Buffer懸浮細(xì)胞，加入5μL的Annexin V-FITC避光室溫孵育15 min；上機(jī)前5 min加入5μL的PI避光染色標(biāo)記，上流式細(xì)胞儀檢測，CellQuest軟件分析細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.3 定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）法檢測細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA水平收集各組細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞2次，TRIzol試劑提取總RNA，超微量分光光度計測定其濃度及OD（260 nm）/OD（280 nm）。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：5×Mix 4μL，RNA 1μg，加DEPCH2O至20μL。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)程序：25℃，10 min；42℃，30 min；85℃，5 min。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物稀釋到1 mL。按照PCR試劑盒配制反應(yīng)體系后進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性60 s；95℃，15 s；60℃，15 s；72℃，45 s，共循環(huán)40次。待測基因qPCR引物使用Primer 3.0設(shè)計，序列見表1。采用2-△△CT法計算目的基因mRNA相對表達(dá)水平。

表1 qPCR引物序列Table 1 Primer sequence for qPCR assay

1.3.4 蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測細(xì)胞AMPK通路相關(guān)蛋白的表達(dá)收集各組細(xì)胞，PBS清洗2次，提取總蛋白，用二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒定量，蛋白變性；10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離，用濕式轉(zhuǎn)膜儀將其轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上；加入50 g/L脫脂牛奶室溫封閉1 h后，分別加入一抗 稀 釋 液AMPK（1∶500）、p-AMPK（1∶200）、

mTOR（1∶500）、p-mTOR（1∶200）、Bcl-2（1∶200）、Bax（1∶200）、β-actin（1∶1 000）4℃孵育過夜，TBST洗膜10 min×3次；再用HRP標(biāo)記的二抗（1∶2 000稀釋）室溫孵育1 h，TBST洗膜10 min×3次；用電化學(xué)發(fā)光（ECL）法于暗室中顯影，應(yīng)用ImageJ軟件分析蛋白條帶。以目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參β-actin蛋白條帶灰度值的比值，作為目的蛋白相對表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計方法采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 青蒿琥酯對MV4-11細(xì)胞生長的抑制作用圖1結(jié)果顯示：1.0、2.0、3.0、4.0μg/mL青蒿琥酯處理24、48、72 h后，MV4-11細(xì)胞生長受到抑制，隨著青蒿琥酯濃度升高、作用時間延長，細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高。青蒿琥酯作用48、72 h對MV4-11細(xì)胞的IC50分別為1.58、1.39μg/mL。后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取1.58μg/mL青蒿琥酯進(jìn)行干預(yù)。

圖1 青蒿琥酯對MV4-11細(xì)胞生長的抑制作用Figure 1 Inhibition of artesunate on growth of MV4-11 cells

2.2 各組MV4-11細(xì)胞存活率比較表2顯示：細(xì)胞存活率組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與對照組比較，青蒿琥酯組細(xì)胞存活率降低，復(fù)合物C組細(xì)胞存活率升高（P＜0.05）；與青蒿琥酯組比較，復(fù)合物C組、青蒿琥酯+復(fù)合物C組細(xì)胞存活率升高（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，青蒿琥酯+復(fù)合物C組細(xì)胞存活率降低（P＜0.05）。

表2 各組MV4-11細(xì)胞存活率比較Table 2 Comparison of MV4-11 cell survival rate among various groups （±s；n=3）

表2 各組MV4-11細(xì)胞存活率比較Table 2 Comparison of MV4-11 cell survival rate among various groups （±s；n=3）

①P＜0.05，與對照組比較；②P＜0.05，與青蒿琥酯組比較；③P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

細(xì)胞存活率/%100 51.67±2.84①131.24±2.36①②98.26±1.76②③578.322＜0.001組別對照組青蒿琥酯組復(fù)合物C組青蒿琥酯+復(fù)合物C組F值P值

2.3 各組MV4-11細(xì)胞周期比較表3結(jié)果顯示：G0/G1期、S期與G2/M期細(xì)胞組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與對照組比較，青蒿琥酯組G0/G1期、G2/M期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少（P＜0.05），復(fù)合物C組G0/G1期、G2/M期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增加（P＜0.05）；與青蒿琥酯組比較，復(fù)合物C組、青蒿琥酯+復(fù)合物C組G0/G1、G2/M期細(xì)胞期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增加（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，青蒿琥酯+復(fù)合物C組G0/G1期、G2/M期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少（P＜0.05）。

表3 各組MV4-11細(xì)胞周期比較Table 3 Comparison of MV4-11 cell cycle in various groups （±s，%；n=3）

表3 各組MV4-11細(xì)胞周期比較Table 3 Comparison of MV4-11 cell cycle in various groups （±s，%；n=3）

①P＜0.05，與對照組比較；②P＜0.05，與青蒿琥酯組比較；③P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

G2/M期33.21±1.36 37.68±1.79①21.95±1.47①②32.14±2.32②③245.989＜0.001組別對照組青蒿琥酯組復(fù)合物C組青蒿琥酯+復(fù)合物C組F值P值G0/G1期28.96±1.24 53.47±3.76①18.58±1.52①②31.24±1.85②③98.535＜0.001 S期37.83±1.98 8.85±0.76①59.47±2.37①②36.62±2.07②③358.705＜0.001

2.4 各組MV4-11細(xì)胞凋亡率比較表4、圖2顯示：細(xì)胞凋亡率組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與對照組比較，青蒿琥酯組細(xì)胞凋亡率升高，復(fù)合物C組細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05）；與青蒿琥酯組比較，復(fù)合物C組、青蒿琥酯+復(fù)合物C組細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，青蒿琥酯+復(fù)合物C組細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）。

圖2 各組MV4-11細(xì)胞凋亡流式散點(diǎn)圖Figure 2 Flow cytometry scatter diagram of apoptosis of MV4-11 cells in various groups

表4 各組MV4-11細(xì)胞凋亡率比較Table 4 Comparison of apoptosis rate of MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

表4 各組MV4-11細(xì)胞凋亡率比較Table 4 Comparison of apoptosis rate of MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

①P＜0.05，與對照組比較；②P＜0.05，與青蒿琥酯組比較；③P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

細(xì)胞凋亡率/%6.24±1.43 47.89±1.52①1.31±0.86①②7.43±1.25②③841.861＜0.001組別對照組青蒿琥酯組復(fù)合物C組青蒿琥酯+復(fù)合物C組F值P值

2.5 各組MV4-11細(xì)胞中Bcl-2、Bax mRNA水平比較表5結(jié)果顯示：各組細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA相對表達(dá)量組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與對照組比較，青蒿琥酯組Bax mRNA相對表達(dá)量升高，Bcl-2 mRNA相對表達(dá)量降低（均P＜0.05），復(fù)合物C組Bax mRNA相對表達(dá)量降低，Bcl-2 mRNA相對表達(dá)量升高（均P＜0.05）；與青蒿琥酯組比較，復(fù)合物C組、青蒿琥酯+復(fù)合物C組Bax mRNA相對表達(dá)量降低，Bcl-2 mRNA相對表達(dá)量升高（均P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，青蒿琥酯+復(fù)合物C組Bax mRNA相對表達(dá)量升高，Bcl-2 mRNA相對表達(dá)量降低（均P＜0.05）。

表5 各組MV4-11細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA水平比較Table 5 Comparison of Bcl-2 and Bax mRNA levels in MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

表5 各組MV4-11細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA水平比較Table 5 Comparison of Bcl-2 and Bax mRNA levels in MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

①P＜0.05，與對照組比較；②P＜0.05，與青蒿琥酯組比較；③P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

Bax mRNA相對表達(dá)量3.47±0.08 5.02±0.41①2.36±0.12①②3.58±0.13②③61.493＜0.001組別對照組青蒿琥酯組復(fù)合物C組青蒿琥酯+復(fù)合物C組F值P值Bcl-2 mRNA相對表達(dá)量5.02±0.36 2.74±0.14①7.69±0.65①②4.38±0.17②③58.468＜0.001

2.6 各組MV4-11細(xì)胞AMPK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較表6、圖3結(jié)果顯示：各組細(xì)胞p-AMPK、p-mTOR、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。與對照組比較，青蒿琥酯組p-AMPK、Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，p-mTOR、Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)（均P＜0.05），復(fù)合物C組p-AMPK、Bax蛋白表達(dá)下調(diào)，p-mTOR、Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)（均P＜0.05），青蒿琥酯+復(fù)合物C組p-AMPK蛋白表達(dá)上調(diào)，p-mTOR蛋白表達(dá)下調(diào)（均P＜0.05）；與青蒿琥酯組比較，復(fù)合物C組、青蒿琥酯+復(fù)合物C組p-AMPK、Bax蛋白表達(dá)下調(diào)，p-mTOR、Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)（均P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，青蒿琥酯+復(fù)合物C組p-AMPK、Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，p-mTOR、Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)（均P＜0.05）；AMPK、mTOR蛋白表達(dá)各組組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

圖3 各組MV4-11細(xì)胞AMPK通路相關(guān)蛋白電泳條帶比較Figure 3 Comparison of electrophoretic band size of AMPK pathway-related proteins in various groups

表6 各組MV4-11細(xì)胞AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較Table 6 Comparison of expression levels of AMPK pathway-related proteins in MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

表6 各組MV4-11細(xì)胞AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較Table 6 Comparison of expression levels of AMPK pathway-related proteins in MV4-11 cells in various groups （±s；n=3）

①P＜0.05，與對照組比較；②P＜0.05，與青蒿琥酯組比較；③P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

組別對照組青蒿琥酯組復(fù)合物C組青蒿琥酯+復(fù)合物C組F值P值Bax蛋白相對表達(dá)量0.72±0.04 1.04±0.03①0.63±0.03①②0.80±0.07②③44.759＜0.001 p-AMPK蛋白相對表達(dá)量0.83±0.03 1.02±0.02①0.32±0.02①②0.94±0.04①②③360.333＜0.001 AMPK蛋白相對表達(dá)量1.16±0.12 1.15±0.05 1.10±0.11 1.09±0.15 0.287 0..77 p-mTOR蛋白相對表達(dá)量0.98±0.06 0.49±0.07①1.13±0.01①②0.71±0.07①②③71.769＜0.001 mTOR蛋白相對表達(dá)量1.28±0.11 1.04±0.18 1.17±0.09 1.22±0.12 1.891 0.21 Bcl-2蛋白相對表達(dá)量0.72±0.09 0.48±0.02①0.97±0.12①②0.61±0.06②③43.094＜0.001

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，全球范圍內(nèi)白血病死亡率位于惡性腫瘤中前10位，急性髓系白血?。ˋML）的成人發(fā)病率最高，兒童位居第二，占兒童白血病死亡率50%以上[11]。AML的發(fā)病機(jī)制主要是造血干細(xì)胞或髓系造血祖細(xì)胞分化受阻導(dǎo)致幼稚造血細(xì)胞惡性增生，未成熟的髓細(xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，大量蓄積于骨髓及其他造血組織，抑制骨髓的正常造血功能。臨床表現(xiàn)為貧血、發(fā)熱、出血、白細(xì)胞減少導(dǎo)致的感染以及肝脾淋巴結(jié)腫大等[12]。目前，標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)療法可治愈40%～45%的年輕AML患者和10%～20%的成年AML患者，但對于復(fù)發(fā)及難治性疾病的患者，治愈率不超過10%，異基因造血干細(xì)胞移植是這些患者治愈的唯一希望，然而手術(shù)價格昂貴，排異反應(yīng)大，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，且常伴有系列并發(fā)癥等局限性[13]。常規(guī)化學(xué)藥物毒性高、副作用大、機(jī)體容易產(chǎn)生耐藥性。因此，需要尋找不同的溫和、高效藥物對其進(jìn)行聯(lián)合治療。

青蒿琥酯是我國經(jīng)典的一線抗瘧藥物，具有多種生物學(xué)活性，且毒副作用小、易耐受、與中藥不產(chǎn)生交叉耐藥。研究表明，青蒿琥酯具有抗腫瘤特性[14-15]，對多種急性白血病細(xì)胞株包括耐藥細(xì)胞株均具有抑制增殖和促進(jìn)凋亡的作用[16]，但其作用機(jī)制研究較少。本研究觀察青蒿琥酯對AML細(xì)胞株MV4-11增殖凋亡的影響，結(jié)果顯示，青蒿琥酯對AML細(xì)胞株MV4-11的增殖具有抑制作用，增殖抑制率呈現(xiàn)時間、劑量依賴性。流式細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，青蒿琥酯可以阻滯MV4-11細(xì)胞的G0/G1、G2/M期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）信號通路與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多個生物學(xué)過程密切相關(guān)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，調(diào)節(jié)AMPK通路，可促進(jìn)AML分化和阻斷增殖[17]。AMPK是一個異源三聚體蛋白，內(nèi)含一個催化性α亞單位和調(diào)節(jié)性β、γ亞單位，AMP結(jié)合到γ亞單位后，使蘇氨酸172位點(diǎn)變成更易磷酸化的底物，變構(gòu)激活復(fù)合體，造成胞內(nèi)鈣離子水平發(fā)生變化[18]。AMPK可對ATP低水平做出反應(yīng)，可對補(bǔ)充細(xì)胞ATP供應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行正向調(diào)控[19]，是能量代謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，對腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、自噬、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移和極性調(diào)控方面具有重要影響。Zhou等[20]研究表明，青蒿琥酯通過上調(diào)ROS并激活人膀胱癌細(xì)胞中的AMPKmTOR信號通路誘導(dǎo)自噬依賴性細(xì)胞凋亡。Xiao等[21]研究顯示，青蒿琥酯通過激活A(yù)MPK/mTOR途徑抑制口腔鱗狀癌細(xì)胞增殖。本研究取對數(shù)生長期MV4-11細(xì)胞，經(jīng)青蒿琥酯、AMPK通路阻斷劑復(fù)合物C及青蒿琥酯聯(lián)合復(fù)合物C處理后檢測Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)水平，AMPK、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)及AMPK、mTOR磷酸化水平。結(jié)果顯示，青蒿琥酯可以上調(diào)MV4-11細(xì)胞Bax mRNA的轉(zhuǎn)錄和p-AMPK、Bax蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2 mRNA的轉(zhuǎn)錄和p-mTOR、Bcl-2蛋白的表達(dá)，AMPK通路阻斷劑復(fù)合物C則呈相反的作用效果，阻斷劑和青蒿琥酯同時處理后，阻斷劑對相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的促進(jìn)或抑制作用被逆轉(zhuǎn)，提示青蒿琥酯通過調(diào)控AMPK信號通路抑制AML細(xì)胞株MV4-11的增殖，誘導(dǎo)其凋亡。

綜上所述，青蒿琥酯可以抑制MV4-11細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，其作用機(jī)制可能與激活A(yù)MPK信號通路，調(diào)控細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)，此為青蒿琥酯相關(guān)藥物的研發(fā)及應(yīng)用于AML的臨床治療提供了理論支持。