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    蘆薈火龍果綠茶沖劑抗氧化功能研究

    2022-03-11 21:37:19申開澤萬慶家熊宇張應龍劉莎
    安徽農(nóng)業(yè)科學 2022年4期
    關(guān)鍵詞:維生素C抗氧化

    申開澤 萬慶家 熊宇 張應龍 劉莎

    摘要 [目的]通過動物試驗和人體試食試驗,研究庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物、VC復配制成的蘆薈火龍果綠茶沖劑的抗氧化作用。[方法]動物試驗設4個處理組(對照組和0.67、1.33、4.00 g/kg 3個劑量組),給予小鼠連續(xù)灌胃30 d后進行各指標測定。人體試食試驗采用自身與組間2種對照設計,106名志愿者被隨機平均分成試食組和安慰劑對照組。[結(jié)果]受試物顯著提高動物血清SOD活性和血中GSH含量(P<0.05)。

    人體試食組血清SOD和GSH-Px活性分別較試食前提高9.32%、9.29%;與對照組試食后及自身試食前比較,SOD和GSH-Px活性均有顯著性差異(P<0.05)。[結(jié)論]結(jié)合動物試驗和人體試食試驗綜合判定,蘆薈火龍果綠茶沖劑具有抗氧化功能。

    關(guān)鍵詞 庫拉索蘆薈;紅心火龍果;綠茶提取物;維生素C;抗氧化

    中圖分類號 TS 278文獻標識碼 A

    文章編號 0517-6611(2022)04-0169-03

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2022.04.044

    開放科學(資源服務)標識碼(OSID):

    Antioxidant Function of Aloe-Pitaya-Green Tea Granules

    SHEN Kai-ze1,2,3,WAN Qing-jia2,XIONG Yu1,3 et al (1.College of Agronomy and Life Sciences,Zhaotong University,Zhaotong,Yunnan 657000;2.Yunnan Evergreen Biological Co.,Ltd.,Yuxi,Yunnan 653300;3.Research Center for Plateau Characteristic Agriculture in Northeast Yunnan,Zhaotong University,Zhaotong,Yunnan 657000)

    Abstract [Objective]To investigate the antioxidant effect of aloe-pitaya-green tea granules (AHGG) composed of Aloe vera whole-leaf freeze-dried powder (decolorized with activated carbon to remove anthraquinones before lyophilization),red pitaya (Hylocereus polyrhizus) fruit freeze-dried powder,green tea extract and VC by animal experiment and human trial.[Method]In the animal experiment,forty SPF mice were divided into four groups (control and 0.67,1.33,4.00 g/kg treatment groups).The mice were given continuous gavage for 30 days. In the human trial,106 volunteers were averagely randomized into 2 groups:Test and Placebo.[Result]The result showed that the test substance significantly increased the SOD activity and the GSH content in blood (P<0.05).The activities of serum SOD and GSH-Px in the human test group were increased by 9.32% and 9.29% respectively;compared with the control group after food test and before self test,there were significant differences in the activities of SOD and GSH-Px (P<0.05).[Conclusion] The above results manifested that AHGG existed antioxidant function.

    Key words Aloe vera;Red pitaya (Hylocereus polyrhizus);Green tea extract;Vitamin C;Antioxidant activity

    作者簡介 申開澤(1987—),男,云南鎮(zhèn)雄人,工程師,碩士,從事高原特色農(nóng)產(chǎn)品精深加工與利用研究。*通信作者,高級工程師,碩士,從事生物資源開發(fā)與利用研究。

    收稿日期 2021-09-30

    近年來,隨著人們對美好生活的向往目標逐年提高,人們對具有抗氧化功能食品的需求也與日俱增[1]。多種天然抗氧化劑復配有助于機體保持良好的抗氧化平衡狀態(tài),因此是研究抗氧化功能食品的重要方向[2]。植物中許多天然抗氧化活性物質(zhì)在抗衰老、抗炎、保護肝臟等方面發(fā)揮著重要作用[3]。庫拉索蘆薈(Aloe vera)含多糖、蒽醌、蒽酮、色酮、黃酮等功能成分,具有抗氧化、保護化學性肝損傷、調(diào)節(jié)血糖、修復胃黏膜、抗炎等多種功能[4-5],是我國可用于保健食品的2個蘆薈品種之一,也是唯一可用于普通食品的蘆薈品種。紅心火龍果(Hylocereus polyrhizus)[6]、綠茶[7]、VC[8]等是抗氧化功能明確的功能原料?;诖?,以庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物、VC為主要原料,輔以結(jié)晶果糖、羅漢果甜苷開發(fā)制成保健食品蘆薈火龍果綠茶沖劑。該研究參照原國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的國食藥監(jiān)?;?012〕107號文件中的《抗氧化功能評價方法》,先后通過動物試驗和人體試食試驗綜合驗證該復配物的抗氧化功能。

    1 材料與方法

    1.1 動物試驗

    1.1.1 受試樣品。

    蘆薈火龍果綠茶沖劑,人口服推薦量為1次/d,每次8 g,折合每日服用庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉1.5 g,紅心火龍果凍干粉1.5 g,茶多酚0.3 g,VC 0.1 g。

    1.1.2 實驗動物。SPF級ICR雄性老齡小鼠40只(8~10月齡),購買自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(湘)2011-0003,使用許可證號:SYXK(湘)2015-0012號。在屏障環(huán)境中進行試驗,試驗期間溫度控制在21~24 ℃,相對濕度控制在52%~58%。

    1.1.3 主要儀器與試劑。

    AL204電子天平,梅特勒-托利多儀器有限公司;離心機,湖南湘儀實驗儀器有限公司;UV1700紫外可見分光光度計,上海奧析科學儀器有限公司。MDA、蛋白質(zhì)羰基、SOD、GSH測試盒:上海恒遠生物科技有限公司。

    1.1.4 劑量分組及受試物給予。

    按人體推薦量的5、10、30倍分別設0.67、1.33、4.00 g/kg 3個劑量組,并設1個空白對照組。分別取樣品6.70、13.30、40.00 g用蒸餾水溶解并定容至200 mL即得樣品組,對照組灌胃等體積蒸餾水。

    1.1.5 試驗方法。試驗前,將試驗小鼠稱重后,各采20 pL尾尖血,用蒸餾水溶解至0.5 mL制成4%溶血液,測定MDA含量水平。按MDA水平將小鼠分為3個劑量組和1個對照組,分別給予受試動物灌胃,持續(xù)30 d,1次/d,每次按20 mL/kg進行灌胃。第31天,采尾尖血測定4%溶血液MDA含量、GSH含量;摘眼球采血離心,取血清測定蛋白質(zhì)羰基含量和SOD活性。

    1.1.6 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結(jié)果判定。

    運用Excel和SPSS進行統(tǒng)計分析。MDA含量、蛋白質(zhì)羰基含量、SOD活力、GSH含量4項指標中3項陽性,即可判定試驗結(jié)果陽性。

    1.2 人體試食試驗

    1.2.1 受試樣品。一個樣品同“1.1.1”,另1個為安慰劑(以微晶纖維素、麥芽糊精、結(jié)晶果糖、低聚果糖、羅漢果粉、莧菜紅、檸檬、亮藍和食用香精按一定配比制成,在包裝、外觀、色澤及口感上與試驗樣品基本一致),隨機編號為1號、2號,人口服1次/d,每次1袋,用200 mL溫水沖服。

    1.2.2 主要儀器及試劑。

    KX-21N全自動三分類血液分析儀,日本希森美康Sysmex公司;Modular P全自動生化分析儀,德國Roche公司;MEK-5216K型血球計數(shù)儀,日本光電工業(yè)株式會社;CA尿液分析儀,德國SIEMENS公司。SOD試劑盒、MDA試劑盒、GSH-Px試劑盒,上海恒遠生物科技有限公司。

    1.2.3 志愿者選擇。

    納入標準:18~65歲,身體健康,狀況良好,無明顯心、肝、肺、腎、腦和血液疾患,志愿受試保證配合的人群,無長期服藥史。排除標準:對該產(chǎn)品過敏者;妊娠和哺乳期婦女;合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾病患者;未按規(guī)定食用受試樣品,無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)物品而影響對結(jié)果的判斷者。

    1.2.4 試驗設計與分組。

    按知情自愿原則招募到符合標準志愿者106名,按MDA、SOD、GSH-Px水平,并盡可能考慮年齡、性別、生活飲食習慣等影響結(jié)果的主要因素,將志愿者隨機分為2組,即試食組和對照組,進行均衡性檢驗以保證組間可比性。

    1.2.5 試驗方法。

    采用雙盲法進行試驗。采用自身和組間2種對照設計。對照組和試食組按照服用方法分別食用安慰劑和試驗樣品,持續(xù)90 d。試驗期間,不改變志愿者的生活方式和飲食習慣。

    1.2.6 觀察指標。在試驗開始和結(jié)束時各檢測1次。安全性指標:試食前詢問志愿者的健康狀況,了解其精神、睡眠、飲食、大小便等情況,并測定體重、血壓、心率等;血、尿、便常規(guī)檢查,肝腎功能檢查,胸透、心電圖、腹部B超檢查;不良反應觀察。功效指標:試驗前后MDA含量變化及其下降百分率;SOD活性變化及其升高百分率;GSH-Px活性變化及升高百分率。

    1.2.7 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定。

    自身對照資料可以采用配對t檢驗,2組均數(shù)比較采用成組t檢驗,后者需進行方差齊性檢驗,對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)方差齊后,用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗;若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求,改用t’檢驗或秩和檢驗;變異系數(shù)太大(如CV>50%)的資料應用秩和檢驗。在試驗前組間比較差異無顯著性的前提下,可進行試驗后組間比較。各功效指標試驗前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計學意義,方可判定為陽性。MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性3項指標中任2項陽性,可判定試驗結(jié)果陽性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 動物試驗結(jié)果

    2.1.1 對老齡小鼠體重的影響。試驗結(jié)果顯示(表1),各劑量組受試小鼠體重及增重在試驗初始、中期、末期與對照組比較,除高劑量組中期體重外,其余均較對照有所增加,但與對照組相比均無顯著差異(P>0.05),對照組增重3.94 g,低、中、高劑量組增重3.67~4.88 g,差異不大。由此可知,受試樣品對老齡小鼠體重無明顯影響。

    2.1.2 對老齡小鼠各檢測指標的影響。

    由表2可知,與對照組相比,各受試劑量組小鼠在持續(xù)30 d灌胃受試樣品后,其溶血液中MDA含量均有所下降,其中,高劑量組與對照組差異顯著(P<0.05),表明受試樣品能顯著降低老齡小鼠血清中的過氧化脂質(zhì)含量。各劑量組小鼠血清SOD活性和全血中的GSH含量均高于對照組,且高劑量組與對照組差異顯著(P<0.05),表明樣品能提高老齡小鼠的SOD活性,提高血液中GSH含量。但受試樣品各劑量組對老齡小鼠血清中的蛋白質(zhì)羰基含量無顯著影響(P>0.05)。

    2.2 人體試食試驗結(jié)果

    2.2.1 一般情況。

    雙盲法觀察結(jié)束揭曉1號樣品為安慰劑,2號樣品為蘆薈火龍果綠茶沖劑。2組均為53例。對照組年齡(50.81±6.25)歲,男女比為18∶35;試食組年齡(51.17±5.45)歲,男女比為18∶35。試驗期間,2組各篩除3例因間斷服用樣品而不能判斷效果的受試者,2組的最后有效試驗人數(shù)均為50例,脫失率均為5.66%。

    2.2.2 安全性指標。

    試驗前后,試食組和對照組各項安全指標均正常,未見與試驗樣品有關(guān)的不良反應。

    2.2.3 功效指標。由表3~5可知,試食前,試食組和對照組人群的血清MDA、SOD、GSH-Px水平無顯著差異(P>0.05),說明2組間具有可比性。試食后,試食組的MDA含量平均下降2.89%,但與對照組相比無顯著差異;而血清SOD活性和GSH-Px活性較試食前均顯著升高(P<0.05),升高率分別為9.32%和9.29%,且與對照組試食后也呈顯著差異(P<0.05)。這表明按照既定的服用方法食用該產(chǎn)品90 d,試驗樣品能顯著提高受試者血清中的SOD和GSH-Px活性,對人體有抗氧化作用。

    3 結(jié)論與討論

    動物試驗結(jié)果表明,經(jīng)口灌胃給予30 d,高劑量組老齡小鼠血中MDA含量顯著降低(P<0.05),血清SOD活性和血中GSH含量均顯著提高(P<0.05),3項指標陽性,可判定蘆薈火龍果綠茶沖劑對老齡小鼠有抗氧化作用。進一步開展的人體試食試驗結(jié)果表明,連續(xù)90 d,按1次/d食用8 g蘆薈火龍果綠茶沖劑,受試人群各安全性指標均在正常范圍,其血清SOD活性、GSH-px活性分別較試食前提高9.32%、9.29%,與自身試食前及對照組試食后比較均呈顯著差異(P<0.05),2項試驗指標結(jié)果陽性,從而進一步驗證了蘆薈火龍果綠茶沖劑的抗氧化功能。

    有研究表明,不同抗氧化劑協(xié)同有助于減輕或避免單一抗氧化劑負荷過重而造成傷害,且比單一抗氧化劑有更強的抗氧化作用[9-10]。該研究采用庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物3種植物原料并添加VC開發(fā)出具有抗氧化功能的保健食品。庫拉索蘆薈鮮葉皮與凝膠肉之間含大量蒽醌類物質(zhì)[5],該研究使用的庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉系庫拉索全葉汁經(jīng)活性炭脫色除去蒽醌而制成,以多糖作為標志性成分,而多糖是庫拉索蘆薈抗氧化功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[11-12]。紅心火龍果因含有多糖、甜菜紅素、多酚及黃酮等物質(zhì)而表現(xiàn)出較好的抗氧化活性[13-15]。該研究使用的紅心火龍果凍干粉系紅心火龍果經(jīng)去皮、搗漿、離心去籽、冷凍干燥、粉碎等工藝制成,最大程度地保留了其

    中的營養(yǎng)成分,有利于其功能成分綜合發(fā)揮抗氧化作用。綠茶中的茶多酚、多糖、多肽等都具有抗氧化活性,其中尤以茶多酚活性突出[16-18],該研究使用的綠茶提取物即以茶多酚為功能和標志性成分。VC的使用量根據(jù)中國居民膳食指南推薦為100 mg/d[19],在其中既作為功效成分發(fā)揮抗氧化功能,又作為風味調(diào)味劑豐富和改善口感。

    該研究按照保健食品抗氧化功能評價方法,先后采用動物功能試驗和人體試食試驗,綜合驗證了蘆薈火龍果綠茶沖劑具有抗氧化功能。受試樣品基于多種功能物質(zhì)協(xié)同作用的理論進行復配,未來可進一步探究受試樣品中庫拉索蘆薈、紅心火龍果、茶多酚和VC協(xié)同發(fā)揮抗氧化作用的內(nèi)在機理,并開展多中心、大樣本的隨機對照臨床試驗,以對其抗氧化功能進行更深入的研究和更廣泛的驗證。

    參考文獻

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    3410500338263

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