來自Yeosuana marina sp. JLT21內(nèi)切型海藻酸裂解酶的異源表達及酶學(xué)表征

常晴 束月蓉 王文韜 蔣昊 延泉德 錢政 高雪純 吳金鴻 張勇

（1. 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 微生物代謝國家重點實驗室，上海 200240；2. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院食品科學(xué)與工程系，上海 200240）

海藻酸鈉是褐藻中含量最豐富的多糖，約占褐藻干重的40%［1］。它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)主要是由β-D-甘露糖醛酸（β-D-mannuronic acid，M）及其C5同分異構(gòu)體α-L-古羅糖醛酸（α-L-guluronic acid，G）通過1，4-糖苷鍵連接而成的線性分子［2］，有3種嵌段聚甘露糖酸（Poly M）、聚古羅糖醛酸（Poly G）和雜聚物（Poly MG）［3］。海藻酸鈉在食品、化妝品和制藥工業(yè)中被廣泛用作穩(wěn)定劑、乳化劑、增稠劑和成膠劑［4］。一些細菌也可以合成海藻酸鈉，以使其免受抗生素和干旱等不利環(huán)境因素的影響［5］。海藻寡糖（alginate oligosaccharides，AOs）是海藻酸鈉通過物理、化學(xué)方法或海藻酸裂解酶處理解聚后的低分子聚糖產(chǎn)物，常表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗氧化、抗高血壓、抗糖尿病、抗腫瘤、抗凝血等多種生物學(xué)功能，在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用前景［6］。酶法降解海藻酸鈉生產(chǎn)海藻寡糖因具有高效性、專一性、條件溫和等優(yōu)點，已成為海藻寡糖制備領(lǐng)域研究的熱點［6］。

海藻酸裂解酶（alginate lyases，Alys）對來自海洋的海藻酸鈉降解方面發(fā)揮重要作用，可以通過β-消除機制降解海藻酸，在非還原端的C4和C5之間形成C=C雙鍵［4］。目前，已經(jīng)從海藻、海洋軟體動物、細菌、真菌和病毒中分離出了海藻酸裂解酶［7］?；诘孜飳Ｒ恍圆町?，海藻酸裂解酶被分為了Poly M型裂解酶（EC4.2.2.3）、Poly G型裂解酶（EC4.2.2.11）和雙功能型裂解酶（EC4.2.2.-）［8］。根據(jù)氨基酸序列的相似度，在Carbohydrate-Active enZYmes（CAZy）數(shù)據(jù)庫（http://www.cazy.org/）中海藻酸裂解酶可以分成10個多糖裂解酶家族（PL5、6、7、14、15、17、18、32、34和36）［9］。其中，PL7家族的海藻酸裂解酶基因在自然界中廣泛存在［6］。根據(jù)裂解方式不同，海藻酸裂解酶可分為內(nèi)切型和外切型［10］。外切型海藻酸裂解酶能將海藻酸鈉和低聚糖降解為不飽和單糖，不飽和單糖可以轉(zhuǎn)化為4-deoxy-lerythro-5-hexoseulose urinate（DEH）。作為藻類生理代謝的重要中間體，DEH也是生產(chǎn)生物乙醇和褐藻精煉的潛在碳源［11］。海藻酸內(nèi)切酶能將海藻酸裂解酶降解成聚合度不同的不飽和寡糖（ΔDP）［12］，如不飽和二糖（ΔDP2）、不飽和三糖（ΔDP3）、不飽和四糖（ΔDP4）等。內(nèi)切型海藻酸裂解酶的產(chǎn)物主要分布在ΔDP2-ΔDP5之間［6］。海藻低聚糖（DP3-6）可作為益生元促進體內(nèi)益生菌雙歧桿菌和乳桿菌的生長［13］。海藻酸裂解酶與抗生素聯(lián)用有望治療細菌黏液生物膜依賴性疾病，如它們的聯(lián)用發(fā)揮了降解細菌的多糖生物膜作用，被應(yīng)用于治療囊性纖維化［14］及提高對呼吸道黏液性銅綠假單胞菌的殺傷率［15］。在研究褐藻細胞壁發(fā)育制備基因工程藻類原生質(zhì)方面，海藻酸裂解酶也有著重要應(yīng)用價值［4］。

然而，目前已報道的外切型海藻酸裂解酶大多酶活力約為20-70 U/mg［15］，使得DEH前體得率較低，同時一些海藻酸裂解酶偏好單一Poly M或Poly G底物。低活力及較窄的底物譜局限了它們在生產(chǎn)海藻功能性寡糖上應(yīng)用前景。已有研究表明海藻酸鈉內(nèi)切酶和外切酶協(xié)同作用可以提高不飽和單糖得率［16］，獲得高活力、底物譜廣闊的海藻酸裂解酶是推進功能性海藻酸鈉低聚糖和生物乙醇工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵一步。

本研究通過異源表達和表征了淺海熱液中分離的Yeosuana marinasp.JLT21菌株的海藻酸裂解酶YMA-1。酶活分析顯示重組YMA-1酶能夠高效降解海藻酸鈉、Poly M和Poly G，降解海藻酸鈉主產(chǎn)物為不飽和三糖或四糖，是一種高活性及穩(wěn)定性的內(nèi)切型海藻酸裂解酶，在高效綠色制備海藻酸寡糖上有著獨特應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種與質(zhì)粒 YMA-1的編碼序列被進行Escherichia coli密碼子優(yōu)化后，在上海捷瑞生物工程有限公司合成并亞克隆進pET28b，獲得表達質(zhì)粒pET28b-yma1，酶切位點是NheI/XhoI；E.coliBL21（DE3）感受態(tài)細胞購自上海新格元生物科技有限公司。

1.1.2 主要試劑和儀器 海藻酸鈉（15-20 cps 黏度）、聚甘露糖醛酸鈉（PolyM，M.W＜6-8 kD）和聚古羅糖醛酸鈉（PolyG，M.W＜6-8 kD）購自青島博智匯力生物科技有限公司；蛋白分子量Marker購自Bio-Rad公司；卡那霉素和Bicinchoninic acid（BCA）蛋白定量試劑盒購自上海睿谷生物科技公司。

恒溫搖床Innova，德國New Brunswick Scientific；立式冷凍高速離心機，日本HITACHI；高壓均質(zhì)機，中國永聯(lián)生物；AKTA蛋白純化系統(tǒng)，重力層析柱Ni SepharoseTM6 FF，Supedex Increase 10/300 GL分子篩，美國GE Healthcare；UV-2550分光光度計，日本島津公司；差示掃描量熱儀（DSC），美國GE公司；超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜（G2-XS）。

1.1.3 培養(yǎng)基 液體LB培養(yǎng)基：10 g胰蛋白胨，5 g酵母粉，10 g氯化鈉，添加蒸餾水定容至1 L，121℃高壓蒸汽滅菌20 min。自誘導(dǎo)培養(yǎng)基：10 g胰蛋白胨，5 g酵母粉，20 mL 50×M組分，20 mL 50×5052組分，0.49 g MgSO4·7H2O，添加蒸餾水定容至1 L，115℃高壓蒸汽滅菌15 min。其中，50×M組分：449.7 g/L Na2HPO4·12 H2O，170 g /L KH2PO4，133.75 g/L NH4Cl，35.5 g/L Na2SO4；50×5052組分：30% 甘油，25 g/L 葡萄糖，100 g/L半乳糖。

1.2 方法

1.2.1 海藻酸裂解酶YMA-1序列分析 使用 Compute pI /Mw（https://web.expasy.org/protparam/）分析酶的理論分子量（Mw）和等電點（pI）。使用 SignalP 5.0（http://www.cbs.dtu.dk/servi Ces/Signa LP/）預(yù)測酶信號肽。在NCBI 數(shù)據(jù)庫中對海藻酸裂解酶YMA-1的蛋白氨基酸序列進行 BLASTp同源搜索。使用CLUSTALW將YMA-1與已知的PL7家族海藻酸裂解酶序列比對分析。使用ESPript 3.0（http://espri pt.ibcp.fr/ESPri pt/cgi-bin/ESPri pt.cgi）進行序列特征作圖。使用MEGA 7.0軟件構(gòu)建PL7家族藻酸裂解酶的系統(tǒng)進化樹。

1.2.2 海藻酸裂解酶YMA-1表達和純化 將表達質(zhì)粒pET28b-yma轉(zhuǎn)化E. coliBL21（DE3）化學(xué)感受態(tài)細胞。挑取陽性單克隆接種于5 mL 補充 50 mmol/L卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng)后按1% 轉(zhuǎn)接至1.0 L加入相應(yīng)卡那霉素的自誘導(dǎo)液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至菌體達到較高密度，在培養(yǎng)液OD600高于2.0時，調(diào)節(jié)搖床培養(yǎng)條件至 18℃，200 r/min，繼續(xù)震蕩培養(yǎng)20 h，進行重組蛋白自誘導(dǎo)表達。離心收集菌體細胞并重懸于250 mmol/L Tris-HCl pH 8.0，500 mmol/L NaCL緩沖液中，于高壓均質(zhì)機破碎，13 000×g高速離心1 h，粗酶液使用5 mL Ni-NTA預(yù)裝重力柱進行純化。以牛血清蛋白作為標(biāo)準，用BCA蛋白分析試劑盒測定蛋白濃度。使用12% SDSPAGE分析海藻酸裂解酶YMA-1分子量及純度。凝膠過濾層析在 AKTA 蛋白純化系統(tǒng)的Superdex 200 increase 10/300G上進行。

1.2.3 海藻酸裂解酶YMA-1活性分析 海藻酸鹽裂解酶的活性通過檢查反應(yīng)體系在235 nm吸光度，測定海藻酸鹽裂解在C4和C5之間形成的非還原端雙鍵。反應(yīng)體系：10 mmol/L磷酸鹽緩沖液 pH 8.0，100 mmol/L氯化鈉，0.6 μg/mL純酶，0.3% 海藻酸鈉，30℃反應(yīng)5 min，煮沸5 min后終止反應(yīng)，使用紫外分光光度計讀取數(shù)值。將酶催化反應(yīng)體系在235 nm下吸光值每分鐘增加0.1所需的酶量定義為一個酶活單位（U）。

1.2.4 海藻酸裂解酶YMA-1酶學(xué)性質(zhì)分析

1.2.4.1 酶活最適pH 在不同pH的緩沖體系（pH 5.0-8.0磷酸鹽緩沖液，pH 8.0-9.0 Tris-HCl 緩沖液，pH 9.0-10.0 3-（環(huán)己胺）-1-丙磺酸緩沖液）中以0.12%海藻酸鈉為底物測定YMA-1酶活性最適pH。

1.2.4.2 酶活最適溫度和熱穩(wěn)定性 以0.12%海藻酸鈉為底物，在pH 9.0條件下測定酶催化最適溫度。使用差示掃描量熱儀（differential scanning calorimetry，DSC）測量海藻酸裂解酶YMA-1的熱穩(wěn)定性：參比池注入磷酸鹽緩沖液，樣品池注入0.5mg/mL酶液，以恒定掃描速率25-90℃加熱，每次掃描之間溫度保持1 min。蛋白質(zhì)解聚狀態(tài)的熱焓是濃度正態(tài)化 DSC峰下的面積，使用熱力學(xué)模型擬合數(shù)據(jù)，50% 蛋白去折疊時溫度即為Tm值。

1.2.4.3 金屬離子對酶活性影響 在酶反應(yīng)體系中分別加入0.5 mmol/L 不同金屬離子化合物，以加入相同體積的緩沖液作為對照組，測定其酶活力。

1.2.4.4 底物偏好性檢測 在37℃，pH 9.0條件下分別以海藻酸鈉、PolyG 和 PolyM 為底物測定酶活力，反應(yīng)時間為5 min。

1.2.5 海藻酸裂解酶YMA-1動力學(xué)分析 通過測定不同海藻酸鈉底物濃度（0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.5mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL和6 mg/mL）時酶活力，并用GraphPad Prism 8.0.2軟件進行Michaelis-Menten方程分析，計算酶促動力學(xué)參數(shù)。

1.2.6 海藻酸裂解酶YMA-1降解產(chǎn)物分析 建立1 mL反應(yīng)體系：10 g/L海藻酸鈉，10 mmol/L Tris-HCl 緩沖液 pH 8.0，10 U YMA-1，37℃反應(yīng)12 h，煮沸5 min，加入兩倍體積無水乙醇過夜沉淀蛋白，13 000×g高速離心15 min后冷凍干燥；將凍干的產(chǎn)物溶解于乙腈；使用超高效液色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜（G2-XS）檢測產(chǎn)物，色譜柱為ACQUITY UPLC BEH Amide column，流動相為含甲酸銨緩沖液（10 mmol/L）、乙腈和超純水。

2 結(jié)果

2.1 海藻酸裂解酶YMA-1的序列特征

前期海洋嗜熱菌Yeosuana marinastrain JLT21基因組已被測序并于NCBI數(shù)據(jù)庫中釋放（NCBI Accession：NZ_JAAKGI010000005）。分析該嗜熱菌基因組序列發(fā)現(xiàn)，其編碼一個推測的海藻酸裂解酶YMA-1（Protein ID：WP_166963834.1）。該酶含有306個氨基酸殘基，SignalP 5.0預(yù)測其N端25位氨基酸殘基為信號肽，提示了該酶可能是細菌分泌表達蛋白。通過在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLASTp 分析表明，與YMA-1 序列同源性最高的是Formosa agariphilaPL7家族海藻酸裂解酶（WP_038531553.1），序列相似性76.8%。此外，為了分析YMA-1的蛋白序列進化特征，使用MEGA 7.0構(gòu)建YMA-1與已知的海藻酸裂解酶Neighbor-Joining進化樹，結(jié)果表明YMA-1與PL7家族海藻酸裂解酶在系統(tǒng)進化樹上形成一個深分支的簇（圖1-A）。而通過將YMA-1的蛋白氨基酸序列與PL7家族已知的海藻酸裂解酶進行多序列比對分析，揭示了YMA-1具有PL 7家族3個高度保守的區(qū)域：SA3（RSELRE）、SA4（YFKAGNYFQ）和SA5（QIH），4個典型的催化殘基R（Arg121）、Q（Gln168）、H（His170）和 Y（Tyr284）（圖1-B）。這些序列特征表明YMA-1是海藻酸裂解酶PL 7家族一新酶分子。

圖1 海藻酸裂解酶YMA-1的系統(tǒng)進化樹及PL7家族酶氨基酸序列比對分析Fig.1 Phylogenetic tree of alginate lyase YMA-1 and amino acid sequence alignment analysis of PL7 family enzyme

2.2 海藻酸裂解酶YMA-1的異源表達與純化

為了大量獲得YMA-1酶，在E. coliBL21（DE3）中重組酶被自誘導(dǎo)表達，經(jīng)培養(yǎng)條件優(yōu)化，Ni柱親和層析初步純化，重組酶的產(chǎn)率可達到不低于700 mg/L培養(yǎng)液。SDS-PAGE分析（圖 2-A）表明，純化的YMA-1重組酶分子量約為39 kD，接近預(yù)測的理論分子量38.5 kD，親和層析純化的酶蛋白純度在90%以上。分子篩層析結(jié)果（圖2-B）表明重組酶YMA-1在溶液中主要以單體形式存在。

圖2 海藻酸裂解酶YMA-1的重組表達及純化分析Fig.2 Recombinant expression，purification and analysis of alginate lyase YMA-1

2.3 海藻酸裂解酶YMA-1的酶學(xué)性質(zhì)

2.3.1 海藻酸裂解酶YMA-1酶催化的最適pH，最適溫度及熱穩(wěn)定性 海藻酸裂解酶YMA-1酶在不同pH緩存體系（pH 5.0-10.0）中催化活性如圖3-A所示，重組酶在pH 7.0-9.0條件下催化活性較高，最高活性出現(xiàn)在pH 9.0，活性達到4.7×103U/mg。在不同溫度（10-60℃）下測定了重組酶YMA-1的活性，YMA-1表現(xiàn)出嗜熱酶催化特性，在55℃時比活力最高，為1.3×104U/mg，10℃ 催化活性仍具有最大活性的31%（圖3-B）。為了分析YMA-1的熱動力學(xué)穩(wěn)定性，使用了差示掃描量熱法（DSC）測定了重組酶YMA-1熔融溫度Tm值，即在該溫度下有50%重組酶去折疊，YMA-1的Tm值為37℃（圖3-C）。

2.3.2 金屬離子對海藻酸裂解酶YMA-1酶活性影響 金屬離子對酶常有著激活或抑制作用，為了分析各種金屬離子對海藻酸裂解酶YMA-1酶催化的影響，不同金屬離子與酶孵育后，測定酶催化活性。結(jié)果如圖3-D所示，值得注意的是Cu2+離子對YMA-1酶活性有顯著促進作用，Ni2+對YMA-1酶活性表現(xiàn)出一定抑制作用，其他金屬離子對該酶活性無較大影響。

圖3 海藻酸裂解酶YMA-1在不同pH、溫度和金屬離子條件下活性分析Fig.3 Activities of alginate lyase YMA-1 under different pH，temperature and metal ions

2.3.3 海藻酸裂解酶YMA-1的底物偏好性 為了分析海藻酸裂解酶YMA-1對不同底物的偏好性，測定了酶對不同結(jié)構(gòu)的底物催化活性。如圖4-B所示，該酶在37℃，pH 9.0條件下，對海藻酸鈉、PolyM和PolyG的催化比活力分別為（5 201.21±86.46）U/mg、（6 399.73±253.12）U/mg和（3 751.68±116.25）U/mg。YMA-1對不同底物酶活力Poly M＞海藻酸鈉＞ Poly G；對3種不同結(jié)構(gòu)的底物均具有高催化活性，表明該酶是一種雙功能海藻酸裂解酶。雙功能酶的寬底物譜，將利于YMA-1在制備褐藻寡糖中應(yīng)用。

圖4 海藻酸裂解酶YMA-1的底物偏好性分析Fig.4 Substrate preference of alginate lyase YMA-1

2.3.4 海藻酸裂解酶YMA-1的催化動力學(xué) 為了分析使用海藻酸裂解酶YMA-1的催化效率及底物親和力，通過 Michaelis-Menten方程計算酶催化動力學(xué)參數(shù)kcat和Km，重組酶YMA-1催化海藻酸鈉的米氏常數(shù)Km為0.6 mg/mL，kcat為5 000 s-1（圖5）。

圖5 海藻酸裂解酶YMA-1催化酶動力學(xué)米氏圖Fig.5 Michaelis-Menten kinetics of alginate lyase YMA-1

2.4 海藻酸裂解酶YMA-1降解產(chǎn)物的質(zhì)譜分析

高效液相色譜（HPLC）結(jié)果（圖6-A）顯示，海藻酸裂解酶YMA-1催化海藻酸降解獲得4種產(chǎn)物保留時間分別為3.92 min，4.04 min，4.13 min和4.23 min。使用負離子電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）鑒定降解產(chǎn)物分子量。ESI-MS證實這4種催化降解最終產(chǎn)物分別為不飽和二糖（ΔDP2）（［M-H］-=351.0）、不飽和三糖（ΔDP3）（［M-H］-=527.09）、不飽和四糖（ΔDP4）（［M-H］-=703.12）和不飽和五糖（ΔDP5）（［M-H］-=879.15）（圖6-B）。LC-MS分 析 確 認 了YMA-1降解海藻酸鈉主要產(chǎn)物為不飽和三糖和四糖，不能產(chǎn)生單糖，為典型的內(nèi)切型海藻酸裂解酶。

圖6 海藻酸裂解酶YMA-1催化海藻酸鈉降解的寡糖產(chǎn)物分析Fig.6 LC-MS analysis of the oligosaccharide products from degrading sodium alginates by YMA-1 catalysis

3 討論

本研究表達并鑒定了PL-7家族海藻酸裂解酶的一個新成員YMA-1。PL-7家族海藻酸降解酶含有3個高度保守區(qū)域：（R/E）（S/T/N）EL，Q（I/V）H，YFKAG（V/I）YNQ。保守區(qū)域形成了jelly-roll β-sandwich空腔區(qū)域，具有識別、結(jié)合底物和催化功能［17］。Zhu等［4］提出Q（I/V）H結(jié)構(gòu)域異亮氨酸（I）或纈氨酸（V）對于海藻酸裂解酶底物偏好性具有決定作用。保守區(qū)域為QVH結(jié)構(gòu)域的海藻酸裂解酶偏好降解Poly M底物，而保守區(qū)域為QIH結(jié)構(gòu)域的海藻酸裂解偏好降解Poly MG或Poly G底物。通過重組酶YMA-1與PL-7家族8個結(jié)構(gòu)已知的海藻酸裂解酶進行序列比對分析，證明該酶具有3個高度保守的區(qū)域RSELRE、YFKAGNYFQ和QIH，以及4個典型的催化殘基Arg121、Gln168、His170和Tyr284，具有PL-7家族海藻酸裂解酶典型序列結(jié)構(gòu)特征。海藻酸裂解酶YMA-1對不同底物的偏好性順序由高到低依次為PolyM，海藻酸鈉，PolyG。在37℃ 時催化3種不同底物比活力均在3 500 U/mg以上，是PL-7家族少見的高效雙功能型海藻酸裂解酶。

天然酶的催化及生化特性多與其來源生物體的生存環(huán)境密切相關(guān)［6］。例如，深海Agarivoranssp.JAM的冷適應(yīng)性海藻酸裂解酶A1m在pH 9.0-10.0和30℃時活性最高［18］。PL-7家族海藻酸裂解酶NitAly最適催化反應(yīng)條件為pH 6.0和70℃。在pH值為5-6的條件下孵育8 h，酶活力保留80%，適用于酸預(yù)處理工業(yè)化生產(chǎn)海藻酸低聚糖［19］。本研究表征來自淺海熱液系統(tǒng)耐熱菌Yeosuana marinasp.JLT21的YMA-1催化海藻酸鈉降解最適反應(yīng)條件分別為pH 7.0-9.0和55℃。重組YMA-1酶的Tm值為37℃。在最適反應(yīng)條件下，重組酶在含100 mmol/L NaCl 緩沖液中降解海藻酸鈉比活力為1.3×104U/mg，這些酶學(xué)特性與其來源菌株Yeosuana marinasp. 的耐鹽、耐熱生存環(huán)境相關(guān)。金屬離子Cu2+對重組酶降解海藻酸鈉活性有顯著促進作用，除Ni2+外，其他金屬離子對該酶活性無顯著影響，這表明重組酶YMA-1具有金屬離子耐受性，能在復(fù)雜的工業(yè)化環(huán)境中降解海藻酸鈉。

海藻酸內(nèi)切酶和外切酶的協(xié)同使用有望建立高效生產(chǎn)功能性海藻酸低聚糖和生物乙醇前體的工藝。Li等［20］報道兩種內(nèi)切型海藻酸裂解酶OalC6和OalC17的協(xié)同催化降解海藻酸鈉和海藻酸低聚物效率明顯要高于單一酶。Lu等［16］使用分離于Photobacteriumsp. FC615的內(nèi)切型海藻酸裂解酶AlyPB1和外切性海藻酸裂解AlyPB2協(xié)同作用于海藻酸鈉，使得海藻酸低聚糖降解為不飽和單糖效率提高近7倍。LC-MS分析結(jié)果表明重組酶YMA-1是一種內(nèi)切雙功能型酶，降解海藻酸鈉終產(chǎn)物多為不飽和海藻酸三糖和四糖，底物譜廣闊，可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)功能性海藻低聚糖，或與外切型海藻酸裂解酶聯(lián)合使用，提高單糖得率，用于生物能源開發(fā)。

4 結(jié)論

本研究從淺海熱液系統(tǒng)耐熱菌Yeosuana marinasp. JLT21中表征內(nèi)切型海藻酸裂解酶YMA-1。重組YMA-1酶表現(xiàn)出雙功能內(nèi)切型海藻酸裂解酶活性，對海藻酸鈉、PolyM和PolyG均具有很高的活性，降解海藻酸鈉終產(chǎn)物主要為不飽和三糖和四糖。YMA-1酶催化最適溫度為55℃，同時在低溫度下也表現(xiàn)出較高的活性。