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    核糖核酸5′端NAD+帽子修飾研究進(jìn)展

    2022-03-10 04:27:24董海嬌楊曉玉莫蓓莘陳雪梅崔潔
    生物技術(shù)通報(bào) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:真核擬南芥帽子

    董海嬌 楊曉玉 莫蓓莘 陳雪梅 崔潔

    (1. 深圳大學(xué)生命與海洋科學(xué)學(xué)院,深圳 518037;2. 深圳大學(xué)光電工程學(xué)院 光電子器件與系統(tǒng)(教育部/廣東?。┲攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,深圳 518060;3. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院,泰安 271018;4. 美國(guó)加利福尼亞大學(xué)河濱分校整合基因組學(xué)研究中心/植物科學(xué)系,美國(guó)加州河濱 92521)

    核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)分子同時(shí)具有信息分子和調(diào)控分子的雙重身份,在生命活動(dòng)的各個(gè)方面發(fā)揮著重要作用。它種類繁多,主要包括經(jīng)典的信使RNA(messenger RNA,mRNA)、核糖體RNA(ribosomal RNA,rRNA)和轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(transport RNA,tRNA),以及近年來(lái)陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)和報(bào)道的、具有基因表達(dá)調(diào)控作用的微小RNA(microRNA,miRNA)和具有免疫和防御功能的小干擾RNA(small interference RNA,siRNA)等[1-2]。隨著技術(shù)的更新和研究的深入,RNA在不同生物學(xué)過(guò)程中的功能和作用機(jī)制逐漸被揭示。

    RNA功能的發(fā)揮主要由其自身序列和結(jié)構(gòu)特征所決定,同時(shí)基于共價(jià)化學(xué)修飾的表觀轉(zhuǎn)錄組(epitranscriptome)調(diào)控也發(fā)揮了重要的作用[3]。目前,在RNA分子上已鑒定到超過(guò)170種化學(xué)修飾,它們發(fā)生在長(zhǎng)鏈分子內(nèi)部或者兩端,且多見于tRNA和rRNA上[4]。mRNA分子內(nèi)部常見的堿基修飾有N6-腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine,m6A)、5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,m5C)和假尿苷(pseudouridine,Ψ)化等,它們?cè)趍RNA的穩(wěn)定性、內(nèi)含子剪切、輸出、翻譯等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[5]。其中,mRNA的m6A修飾是近年的研究熱點(diǎn),該過(guò)程的異常會(huì)導(dǎo)致動(dòng)植物發(fā)育異常和疾病的出現(xiàn),如胚胎發(fā)育遲緩和腫瘤等[6-7]。

    7-甲基鳥嘌呤(7-methylguanosine,m7G)是真核生物mRNA 5′端特有的、經(jīng)典的加帽修飾,參與調(diào)控mRNA的穩(wěn)定性、加工、運(yùn)輸和翻譯等生物學(xué)過(guò)程,具有重要的生物學(xué)意義[8-9]。不同于真核生物,傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為原核生物mRNA 5′端以三磷酸RNA(pppRNA)為主,沒有類似m7G的帽子結(jié)構(gòu)[10]。但是2009年,研究人員利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)對(duì)細(xì)菌RNA的5′端進(jìn)行分析,鑒定到兩種新的共價(jià)修飾,即煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)和輔酶A衍生物(dephosphocoenzyme A,DP-CoA),并且NAD+帽子修飾的RNA(NAD-RNA)占比更高[11-12]。隨后,人們陸續(xù)在酵母、小鼠、人源細(xì)胞、擬南芥等真核生物中也發(fā)現(xiàn)了NAD-RNA[13-14],暗 示RNA的NAD+加 帽 是 一種非常保守的修飾機(jī)制。近年來(lái),研究人員整合酶處理捕獲和高通量測(cè)序技術(shù)(NAD captureSeq),實(shí)現(xiàn)了全轉(zhuǎn)錄組水平的NAD-RNA鑒定[15-16],為隨后NAD-RNA生物學(xué)功能及NAD+修飾代謝通路的研究奠定基礎(chǔ)。

    NAD+又稱輔酶Ⅰ,是生物體內(nèi)多種脫氫酶的輔酶,可把代謝過(guò)程中由脫氫酶催化產(chǎn)生的氫離子傳遞給黃素蛋白,從而將三羧酸循環(huán)和呼吸鏈反應(yīng)串聯(lián)起來(lái)[17-18]。而NAD+作為一種全新的RNA 5′端修飾結(jié)構(gòu),從最初發(fā)現(xiàn)至今僅有十幾年的時(shí)間,特別是在真核生物中,NAD-RNA的鑒定和研究剛剛起步。本文聚焦于NAD-RNA,從其發(fā)現(xiàn)、檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展、生物學(xué)功能及其調(diào)控機(jī)制等方面對(duì)目前該領(lǐng)域取得的最新進(jìn)展進(jìn)行總結(jié),并對(duì)今后的研究做出展望。

    1 NAD-RNA的發(fā)現(xiàn)及其檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展

    NAD-RNA最早發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌(Escherichia coli)和委內(nèi)瑞拉鏈霉菌(Streptomyces venezuelae)體內(nèi)。2009年,研究人員利用分子排阻色譜(size-exclusion chromatography)分離E. coli和S. venezuelae的大分子RNA片段,然后以核酸酶P1將其消化為小分子片段,通過(guò)高分辨率LC-MS對(duì)這些小分子片段進(jìn)行分析,首次檢測(cè)到了位于RNA 5′端的NAD+帽子修飾[11]。Grudzien-Nogalska等[19]在此基礎(chǔ)上提出通過(guò)兩步法來(lái)檢測(cè)NAD-RNA的含量,即“NAD-capQ”(NAD cap detection and quantitation)法,主要包括NAD-RNA的核酸酶P1處理和游離的NAD+含量的比色法檢測(cè)。目前,NAD-capQ已成功應(yīng)用于大腸桿菌、酵母、人源細(xì)胞HEK293T和擬南芥中NADRNA的定量檢測(cè)[14,19]。最近,Wang等[13]結(jié)合offline HPLC(high performance liquid chromatography,高效液相色譜)和LC-MS/MS開發(fā)了可富集定量各種RNA帽子結(jié)構(gòu)的CapQuant檢測(cè)法,并在登革熱病毒、大腸桿菌、酵母、小鼠肝臟和腎臟以及人源B淋巴細(xì)胞的mRNA中鑒定到包括m7G、NAD+在內(nèi)的26種帽子修飾,也表明NAD+同m7G一樣存在于mRNA的5′端。

    NAD+及其代謝衍生物可參與生物體內(nèi)多種基礎(chǔ)的生理活動(dòng),在調(diào)控細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)、蛋白翻譯后修飾以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,其含量異??蓪?dǎo)致多種疾病的發(fā)生[20-21]。NADRNA是否參與上述過(guò)程,或者與其它未知的代謝和調(diào)控途徑有關(guān)呢?為了解答上述問(wèn)題,研究人員開發(fā)了NAD captureSeq,利用腺苷二磷酸核糖環(huán)化酶(adenosine diphosphate-ribosylcyclase,ADPRC)在炔醇存在條件下催化RNA 5′端NAD+發(fā)生轉(zhuǎn)糖基化反應(yīng)生成炔烴RNA(alkyne-RNA),隨后通過(guò)銅催化的炔疊氮化物環(huán)加成(a copper-catalysed azide-alkyne cycloaddition,CuAAC)反應(yīng)將alkyne-RNA轉(zhuǎn)化為生物素標(biāo)記的RNA(biotin-RNA)(圖1-A),最后借助鏈霉親和素磁珠分離biotin-RNA并進(jìn)行高通量測(cè)序,實(shí)現(xiàn)了在全基因組水平上對(duì)E. coli體內(nèi)NADRNA的分析和鑒定[15],結(jié)果表明,E. coli中NADRNA大多為特異的調(diào)控類小RNA(small RNA,sRNA)和mRNA[15]。隨后,研究人員利用NAD captureSeq先后在酵母、人源細(xì)胞、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和擬南芥中鑒定NAD+加帽修飾的RNA[14,22-24];與E. coli的研究結(jié)果類似,這些物種中的NAD-RNA主要是mRNA,另有少量的非編碼RNA,表明NAD+是一種普遍存在的RNA修飾類型,且與m7G一樣主要修飾mRNA,但可轉(zhuǎn)錄生成NAD-RNA的基因數(shù)目要少于轉(zhuǎn)錄生成m7G-RNA的基因數(shù)目。對(duì)大腸桿菌、酵母、小鼠和擬南芥中NAD-RNA生成基因的GO(gene ontology)分析結(jié)果顯示,這些基因編碼的蛋白主要涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄相關(guān)過(guò)程、蛋白翻譯及非生物脅迫響應(yīng)如冷、熱、旱、鹽、ABA、營(yíng)養(yǎng)缺失等[14-15,24-29]。

    圖1 NAD-RNA的CuAAC(A)和SPAAC(B)反應(yīng)示意圖Fig. 1 Schematic diagram of CuAAC(A)and SPAAC(B)reactions of NAD-RNA

    盡管NAD captureSeq為人們鑒定NAD-RNA提供了有力的技術(shù)保障,但其仍存在一些缺陷。首先,在捕獲NAD-RNA的CuAAC反應(yīng)中,二價(jià)銅離子(Cu2+)的存在會(huì)導(dǎo)致一定程度的RNA降解,從而引起鏈霉親和素磁珠富集的RNA片段呈現(xiàn)一定的5′端偏好,這不利于對(duì)NAD-RNA全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本序列信息的了解以及其轉(zhuǎn)錄水平的計(jì)算;此外,該方法存在一定程度的假陽(yáng)性,近期有研究表明CuAAC反應(yīng)對(duì)真核生物m7G-RNA亦存在微弱的轉(zhuǎn)化能力,導(dǎo)致捕獲到的RNA分子中存在一定量的m7G-RNA。為了克服上述問(wèn)題,Hu等[26]在2021年提出了SPAAC-NAD-seq,用以鑒定擬南芥中的NAD-RNA;該方法首先利用anti-m7G抗體特異去除擬南芥mRNA中的m7G-RNA,然后通過(guò)不依賴Cu2+的應(yīng)變促進(jìn)的炔疊氮化物環(huán)加成(strainpromoted azide-alkyne cycloaddition,SPAAC)反 應(yīng)體系(圖1-B),捕獲NAD-RNA并進(jìn)行二代測(cè)序分析。與NAD caputureSeq相比,SPAAC-NAD-seq避免了m7G-RNA和Cu2+的干擾,因此大大提高了NAD-RNA鑒定的準(zhǔn)確性和靈敏度。除此以外,Zhang等[28-31]在2019年和2021年先后利用CuAAC和SPAAC反應(yīng)處理擬南芥和大腸桿菌RNA樣本,然后在NAD-RNA的5′端連接一段合成的RNA標(biāo)簽(tagRNA)作為接頭(adaptor),進(jìn)一步富集含接頭的NAD-RNA并通過(guò)Oxford Nanopore sequencing三代測(cè)序完成對(duì)NAD-RNA轉(zhuǎn)錄本信息的鑒定。相比NAD caputureSeq和SPAAC-NAD-seq,該策略省去了傳統(tǒng)illumina測(cè)序中的RNA片段化、cDNA合成、PCR擴(kuò)增和片段篩選步驟,進(jìn)一步簡(jiǎn)化了NADRNA測(cè)序流程。以上全基因組水平的測(cè)序研究結(jié)果均表明,NAD+加帽修飾主要發(fā)生于部分編碼蛋白的mRNA和部分具有特異調(diào)控功能的sRNA,其中真核生物中NAD+-mRNA主要來(lái)源于核基因,少數(shù)來(lái)源于線粒體基因,并為研究其具體的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。

    2 NAD+帽子對(duì)RNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的影響

    已有研究結(jié)果表明,真核生物中NAD+修飾的基因大多亦可被m7G加帽[14,23]。NAD+帽子是否和m7G一樣,能夠保護(hù)RNA不被降解、招募相關(guān)蛋白參與RNA內(nèi)含子剪切、poly(A)加尾、出核和完成蛋白翻譯等生物學(xué)過(guò)程呢?大腸桿菌中的研究結(jié)果表明,NAD-RNA可以抵抗RNA焦磷酸水解酶(RNA-pyrophosphohydrolase,RppH)對(duì)其5′端的加工,進(jìn)而避免被核糖核酸酶E(ribonuclease E,RNase E)降解[15];此外,原核生物B.subtilis的NAD+加帽修飾也具有穩(wěn)定RNA的作用,可防止RNase J1介導(dǎo)的5′端到3′端降解的發(fā)生[22]。不同于上述原核生物,真核生物中廣泛存在一類具有脫帽功能的酶DXO蛋白,可以去除哺乳動(dòng)物和擬南芥體內(nèi)RNA的NAD+帽子,產(chǎn)生不穩(wěn)定的5′單磷酸RNA(pRNA),并進(jìn)一步催化將其降解,最終影響體內(nèi)NAD-RNA的水平[23,27],這表明原核和真核生物中RNA的NAD+加帽修飾可能具有不同的生物學(xué)意義。

    高通量測(cè)序如RNA-seq、翻譯組測(cè)序(ribosome profiling)等是研究RNA修飾的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程的重要手段[7,32]。目前,部分研究小組已經(jīng)開展了人源細(xì)胞HEK293T和擬南芥NAD+加帽修飾對(duì)mRNA加工和翻譯影響的初步研究工作,結(jié)果顯示NAD-RNA可順利完成內(nèi)含子剪切和poly(A)加尾過(guò)程[14,23,26,29];同時(shí),進(jìn)一步檢測(cè)到擬南芥的內(nèi)源NAD-RNA富集于多聚核糖體,暗示了NADRNA可能具有蛋白編碼的功能[14]。但是也有不同的研究結(jié)果被報(bào)道。在2017年,有研究人員將NAD+加帽和poly(A)加尾修飾的熒光素酶基因mRNA導(dǎo)入人源細(xì)胞HEK293T中,檢測(cè)熒光素酶含量,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照并無(wú)顯著差異,推測(cè)外源NAD+-mRNA在HEK293T細(xì)胞不具備蛋白翻譯的功能[23,33]。因此,關(guān)于體內(nèi)NAD-RNA是否具有蛋白編碼的能力、是否可以向胞質(zhì)運(yùn)輸以及原核生物和真核生物NADRNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的異同等仍有待深入研究。

    3 RNA的NAD+加帽和脫帽分子機(jī)制初探

    真核生物中基因轉(zhuǎn)錄成NAD -RNA的含量約占相應(yīng)轉(zhuǎn)錄本總含量的1%-6%[14,23,24,33],且體內(nèi)NAD-RNA總含量也遠(yuǎn)低于m7G-RNA的占比[13]。NAD+加帽和脫帽反應(yīng)的效率直接決定NAD-RNA的含量。不同于m7G-RNA的轉(zhuǎn)錄起始后加帽[34-37],RNA的NAD+加帽反應(yīng)可能存在兩種模式,即轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄后加帽[33]。(1)轉(zhuǎn)錄起始加帽:在體外條件下或細(xì)菌體內(nèi),NAD+可作為一種稀有的起始核苷酸(non-canonical initiating nucleotide,NCIN)在細(xì)菌RNA聚合酶(RNA polymerase,RNAP)或真核生物RNAP II作用下,替代ATP作為首位堿基轉(zhuǎn)錄形成NAD-RNA[22,38-39];相比細(xì)胞核RNAP,真核生物酵母和人的線粒體RNAP(mitochondrial RNAP,mtRNAP)可更加高效地利用NAD+合成NAD-RNA。此外,NAD+加帽的效率也受轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(transcription start site,TSS)序列(+1A)、TSS上游序列(-1R)以及細(xì)胞內(nèi)的NAD+含量等因素影響[38,40]。利用CapZyme-Seq技術(shù),研究人員分析了E. coli中約16 000個(gè)NAD-RNA基因啟動(dòng)子序列,發(fā)現(xiàn)決定NAD+加帽的啟動(dòng)子的特征序列為H-3R-2R-1A+1S+2W+3W+4,其 中A+1為TSS[41]。(2)轉(zhuǎn)錄后加帽:哺乳動(dòng)物snoRNA(small nucleolar RNA)和 scaRNA(small cajal body RNA)是大多來(lái)源于基因內(nèi)含子的非編碼小RNA[42-44],Jiao等[23]研究發(fā)現(xiàn)被核酸外切酶加工過(guò)的sno / scaRNA 5′端可被NAD+修飾,暗示哺乳動(dòng)物體內(nèi)可能存在轉(zhuǎn)錄起始后的加帽反應(yīng)。

    除了加帽效率,生物體內(nèi)脫帽反應(yīng)也是影響NAD-RNA含量的重要因素。DXO蛋白家族是一類可以清除真核生物體內(nèi)異常帽子修飾RNA的酶[45],如前所述,也具有清除NAD-RNA的功能。DXO的NAD+脫帽活性最早在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中被檢測(cè)到,可去除體內(nèi)部分NAD-RNA中的NAD+帽子并進(jìn)一步催化降解pRNA[23],模式植物擬南芥的DXO1蛋白也具有相似的功能[27];進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)擬南芥DXO1功能缺失時(shí),體內(nèi)的NAD-RNA可被加工成小RNA[27],暗示NAD-RNA在特定條件下可能通過(guò)小RNA介導(dǎo)的表觀調(diào)控機(jī)制發(fā)揮作用,因此增加了NAD-RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性。Nudix(nucleoside diphosphate linked to another moiety X)是另一類只具有脫帽活性的水解酶蛋白家族,E. coli的Nudix家族成員RppH可以催化三磷酸RNA(pppRNA)生成pRNA,進(jìn)而由RNase E從5′端起始將其降解[10,46];哺乳動(dòng)物Nudix家族成員Dcp2、Nudt3和Nudt16可催化體內(nèi)m7G-RNA的脫帽反應(yīng),而Nudt2、Nudt12、Nudt15、Nudt17和Nudt19則 具有體外去m7G帽子的活性[47]。最近的研究結(jié)果表明,Nudix也參與了NAD-RNA的脫帽過(guò)程,但不同于DXO蛋白,它在NAD+的煙酰胺和腺嘌呤之間發(fā)生酶解反應(yīng),并依賴于核糖核酸酶進(jìn)一步降解脫帽的pRNA,例如,NudC和RppH可分別催化E. coli和B. subtilis體內(nèi)NAD-RNA的脫帽反應(yīng),生成NMN(nicotinamide mononucleotide)和pRNA[15,22];小鼠Nudt12靶向與DXO不同的NAD-RNA,主要參與編碼線粒體蛋白的核基因mRNA的NAD+脫帽反應(yīng)[25];對(duì)哺乳動(dòng)物22個(gè)Nudix成員的脫帽活性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)除上述Nudt12外,Nudt16也具有去除RNA 5′端NAD+帽子的功能[48]。此外,真核生物糖基水解酶CD38可在體外反應(yīng)條件下將NAD-RNA分解為成ADP-RNA和煙酰胺,暗示其可能是一類新的NADRNA脫帽酶[49]。然而,目前關(guān)于生物體內(nèi)NADRNA加帽和脫帽等代謝過(guò)程以及調(diào)控途徑的研究仍處于起步階段,有待于在今后的研究中進(jìn)一步挖掘解析。

    4 NAD-RNA與生長(zhǎng)發(fā)育和環(huán)境脅迫

    生物體內(nèi)NAD-RNA的豐度和種類與生長(zhǎng)發(fā)育階段和環(huán)境因素密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),E. coli指數(shù)和穩(wěn)定生長(zhǎng)期NAD+加帽修飾的RNA有較大差異,除了兩個(gè)時(shí)期共有的79個(gè)基因外,另有50個(gè)指數(shù)生長(zhǎng)期特異表達(dá)的NAD-RNA基因以及150個(gè)穩(wěn)定生長(zhǎng)期特異表達(dá)的NAD-RNA基因[28];擬南芥幼苗和花中NAD-RNA的豐度以及可轉(zhuǎn)錄生成NAD-RNA的基因亦存在一定的差異[14],這些結(jié)果暗示基因的NAD+加帽修飾可能具有一定的時(shí)空表達(dá)特異性。與YEPD(yeast extract peptone dextrose)培養(yǎng)基相比,生長(zhǎng)在合成培養(yǎng)基上的酵母體內(nèi)NAD+-mRNA基因種類更多[24];將人源HEK293T和包皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行熱激(42℃)處理或置于葡萄糖缺失的培養(yǎng)基中培養(yǎng),NAD-RNA的含量均顯著提高[25];擬南芥幼苗NAD-RNA可響應(yīng)脫落酸(abscisic acid,ABA)處理,并且多數(shù)響應(yīng)ABA的NAD-RNA的脫帽過(guò)程不依賴DXO1[27];對(duì)可轉(zhuǎn)錄成NAD-RNA的基因進(jìn)行GO分析,它們部分富集于非生物脅迫相關(guān)的路徑[14,15,24,26-29],以上結(jié)果表明NAD-RNA的合成與代謝過(guò)程與外界環(huán)境因素也密切相關(guān),這可能與NAD+的輔酶特性有關(guān)。

    5 總結(jié)與展望

    借助于LC-MS和NAD captureSeq等技術(shù),人們發(fā)現(xiàn)了RNA 5′端的NAD+加帽這一新的修飾類型。NAD+作為一種輔酶,在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中可替代ATP作為起始?jí)A基、通過(guò)RNAP/RNAP II的催化生成NADRNA,并進(jìn)一步完成內(nèi)含子剪切、poly(A)加尾等轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程。不同于經(jīng)典的真核生物m7G帽子,NAD+加帽修飾在原核和真核生物RNA上均可檢測(cè)到,并且該修飾對(duì)RNA在原核和真核生物中穩(wěn)定性的影響存在差異;同時(shí),真核生物中NAD-RNA的占比遠(yuǎn)低于m7G-RNA。基于此,我們推測(cè)NADRNA的起源進(jìn)化可能要早于m7G-RNA,早期在原核生物中NAD+加帽具有保護(hù)RNA不被降解、維持其穩(wěn)定性的作用;但隨著生物的進(jìn)化,NAD-RNA可能發(fā)生了功能分化,被真核生物識(shí)別為異常RNA,進(jìn)而被DXO等脫帽酶脫帽并進(jìn)一步降解,與此同時(shí)真核生物RNA被特有的m7G帽子所保護(hù)而不被降解并完成后續(xù)一系列的轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯等過(guò)程,逐漸替代NAD-RNA占主導(dǎo)地位。

    后續(xù)可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究,來(lái)驗(yàn)證上述猜測(cè):(1)開展關(guān)于NAD-RNA和m7G-RNA代謝通路重要基因的進(jìn)化分析;(2)鑒定與NAD+加帽、脫帽、識(shí)別等過(guò)程相關(guān)的基因,并通過(guò)這些基因的功能研究解析NAD-RNA的變化對(duì)生物體的影響;(3)NAD-mRNA能否完成正常的蛋白翻譯過(guò)程,與m7G-RNA一樣以蛋白形式發(fā)揮功能?或者直接以RNA形式作為調(diào)控因子發(fā)揮功能?(4)NAD+修飾的非編碼RNA是否具有調(diào)控功能?

    除了NAD-RNA,近年來(lái)在生物體內(nèi)還檢測(cè)到了許多其他類型加帽修飾的RNA,比如dpCoA-RNA、FAD-RNA、UDP-Glc-RNA和UDP-GlcNAc-RNA等,它們?cè)隗w內(nèi)的含量也遠(yuǎn)低于m7G-RNA[13]。然而,這些RNA序列信息以及與NAD-RNA、m7G-RNA是否存在著關(guān)聯(lián)仍然未知。相信隨著后續(xù)相關(guān)分析技術(shù)的突破,將會(huì)促進(jìn)該領(lǐng)域相關(guān)研究工作的開展,進(jìn)一步拓展和豐富RNA生物學(xué)基礎(chǔ)理論知識(shí)。

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