卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖對(duì)2型糖尿病患者miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平的影響*

蘇海玉，張宏穎△，楊 俐，張廣穎

河北省廊坊市人民醫(yī)院：1.內(nèi)分泌科；2.體檢中心，河北廊坊 065000

糖尿病屬于代謝紊亂性、進(jìn)展性疾病，以高血糖為主要表現(xiàn)，無(wú)特定發(fā)病年齡。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，糖尿病患病率呈急劇增長(zhǎng)趨勢(shì)[1-2]，全球糖尿病患者高達(dá)6億，其中亞洲為患病率較高地區(qū)，我國(guó)糖尿病患病率高達(dá)15%，2型糖尿病約占糖尿病的90%[3]。目前，2型糖尿病臨床治療以胰島素、雙胍類、格列奈類等降糖藥物為主，其中二甲雙胍為一線藥物，但單一治療無(wú)法滿足患者降糖需求，且存在不同程度的不良反應(yīng)[4-5]。本研究采用卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖對(duì)2型糖尿病患者進(jìn)行治療，對(duì)微小RNA(miR)-144、NOD樣受體3炎性小體(NLRP3)mRNA、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平的變化情況進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年7月本院收治的2型糖尿病患者186例，依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為單藥治療組、聯(lián)合治療組，每組93例。單藥治療組中男51例，女42例；年齡38～64歲，平均(51.1±10.9)歲；病程5～17個(gè)月，平均(11.1±5.0)個(gè)月。聯(lián)合治療組中男49例，女44例；年齡35～65歲，平均(50.0±12.6)歲；病程7～15個(gè)月，平均(11.1±3.4)個(gè)月。兩組患者性別、年齡、病程等一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)頒布的2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：病歷資料不全者；合并心、肺、肝、腎等臟器功能不全者；1型糖尿病及繼發(fā)性糖尿病者；合并嚴(yán)重感染、急性心腦血管疾病者；凝血功能、內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂者；妊娠期或哺乳期女性；對(duì)研究中藥物過(guò)敏或不耐受者。

1.2方法

1.2.1治療方法 對(duì)所有研究對(duì)象給予控制飲食、適量運(yùn)動(dòng)等常規(guī)治療：采用低鹽、低脂飲食，制訂合理的膳食計(jì)劃，并適當(dāng)運(yùn)動(dòng)。單藥治療組患者采用阿卡波糖片進(jìn)行治療，藥物規(guī)格為50毫克/片，藥物使用劑量為50毫克/次，3次/天，餐時(shí)咀嚼服用。聯(lián)合治療組采用阿卡波糖片聯(lián)合卡格列凈進(jìn)行治療?？ǜ窳袃粢?guī)格為100毫克/片，使用劑量為100毫克/次，1次/天，于餐前用溫水送服。阿卡波糖片服用劑量、方法與單藥治療組保持一致。兩組患者均連續(xù)治療4個(gè)月。

1．2.2檢測(cè)方法 分別抽取患者治療前后空腹靜脈血6 mL，2 500 r/min離心15 min，分離上清液至無(wú)RNA酶的EP管內(nèi)，于-70 ℃環(huán)境中保存、待用。(1)使用血糖檢測(cè)儀對(duì)兩組患者治療前后血糖指標(biāo)[餐后2 h血糖(PBG)、空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)]進(jìn)行檢測(cè)；使用免疫化學(xué)發(fā)光法對(duì)餐后2 h胰島素(2 h INS)、空腹胰島素(FINS)水平進(jìn)行檢測(cè)。(2)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-17A、IL-23、MCP-1水平。(3)采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)miR-144、NLRP3 mRNA表達(dá)水平。首先提取細(xì)胞總RNA，對(duì)提取總RNA的純度、含量進(jìn)行檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄處理獲取cDNA，使用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25 ℃ 10 min,40 ℃ 60 min,85 ℃ 5 min；設(shè)置擴(kuò)增條件:94 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán)，采用2-ΔΔCt計(jì)算出需要檢測(cè)的miR-144、NLRP3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較兩組患者治療前后PBG、FPG、HbA1c、2 h INS、FINS水平。(2)比較兩組患者治療前后炎癥因子血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平。(3)比較兩組患者治療前后血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平。(4)分析miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平與炎癥因子的相關(guān)性。(5)療效評(píng)估。以顯效、有效、無(wú)效對(duì)患者療效進(jìn)行評(píng)估。顯效：患者FPG<6.1 mmol/L，PBG<7.2 mmol/L；有效：患者FPG<7.2 mmol/L，PBG<10.0 mmol/L；無(wú)效：患者FPG、PBG水平變化未達(dá)到顯效、有效的標(biāo)準(zhǔn)。治療有效率=(顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血糖、胰島素水平比較 兩組患者治療前PBG、FPG、HbA1c、2 h INS、FINS水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組以上指標(biāo)水平均低于治療前(P<0.05)。治療后，兩組2 h INS、FINS水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；聯(lián)合治療組治療后PBG、FPG、HbA1c水平低于單藥治療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者血糖、胰島素水平比較

2.2兩組患者炎癥因子水平比較 治療前兩組患者血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平降低，且聯(lián)合治療組血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平低于單藥治療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者炎癥因子水平比較

2.3兩組患者血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較 兩組患者治療前血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平降低，且聯(lián)合治療組血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平明顯低于單藥治療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較

2.4miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平與炎癥因子的相關(guān)性 miR-144相對(duì)表達(dá)水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(guān)(P<0.05)；NLRP3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(guān)(P<0.05)；MCP-1水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 miR-144、NLRP3 mRNA、MCP-1水平與炎癥因子的相關(guān)性

2.5兩組療效比較 聯(lián)合治療組治療有效率高于單藥治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.76，P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 兩組療效比較

3 討 論

糖尿病作為全球范圍內(nèi)常見(jiàn)、高發(fā)的慢性代謝性疾病，具有較高的并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。臨床研究指出，糖尿病與冠心病、高血壓等心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展具有密切聯(lián)系[7-8]。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，受我國(guó)人口老齡化加重的影響，糖尿病發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者健康及生活質(zhì)量[9]。臨床研究顯示，老年人群作為2型糖尿病主要發(fā)病群體，主要表現(xiàn)為持續(xù)性胰島素抵抗、進(jìn)行性胰島β細(xì)胞功能障礙或喪失[10]。目前，糖尿病尚無(wú)根治方法，主要通過(guò)藥物治療、飲食治療及運(yùn)動(dòng)等多種治療手段對(duì)血糖水平進(jìn)行控制[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，使用阿卡波糖聯(lián)合卡格列凈對(duì)2型糖尿病患者進(jìn)行治療，患者血糖、胰島素水平均有所下降，出現(xiàn)此結(jié)果的原因?yàn)榘⒖úㄌ呛胁伙柡铜h(huán)多醇寡糖，能夠降低患者餐后血糖峰濃度，卡格列凈對(duì)腎小管重吸收葡萄糖具有抑制作用，可有效減輕體質(zhì)量及降低血壓，兩者聯(lián)合對(duì)患者進(jìn)行治療，能夠有效降低患者的血糖、胰島素水平[13]。臨床研究結(jié)果顯示，阿卡波糖可有效改善患者胰島素抵抗，增強(qiáng)糖耐量損傷肥胖患者胰島素敏感性，有效改善糖尿病患者血脂代謝紊亂情況，降低糖尿病患者心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[14-15]。亦有臨床研究指出，鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(SGLT2)抑制劑可有效改善患者血壓、血糖等生理指標(biāo)，可有效降低腎臟疾病、嚴(yán)重心血管疾病并發(fā)癥及死亡發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，卡格列凈是SGLT2抑制劑的代表藥物[16]。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，再次佐證了兩種藥物治療2型糖尿病患者的有效性，且兩種藥物聯(lián)用有著更好療效。

研究顯示，炎癥因子的釋放與糖尿病患者血管活性因子的釋放具有密切聯(lián)系。IL-1β可對(duì)其他炎癥因子釋放產(chǎn)生誘導(dǎo)，使炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)擴(kuò)大[17-18]。IL-17A可促進(jìn)IL-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α等分泌，通過(guò)誘導(dǎo)一氧化碳合酶(NOS)、自由基生成，增加胰島β細(xì)胞損傷程度。IL-23作為前炎癥因子，在T細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞等多種炎癥因子生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用，對(duì)胰島β細(xì)胞間接或直接造成損傷，且參與抗腫瘤免疫、機(jī)體抗感染免疫、自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展[19-20]。本研究結(jié)果顯示，與單藥治療組比較，治療后聯(lián)合治療組患者IL-1β、IL-17A、IL-23水平降低，此結(jié)果說(shuō)明卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖能夠起到較好抑制炎癥的效果，有著較高的應(yīng)用價(jià)值。

微小RNA能夠?qū)Χ喾N疾病進(jìn)行輔助診斷。相關(guān)研究顯示，miR-144水平與2型糖尿病患者胰島素抵抗具有相關(guān)性，可通過(guò)抑制胰島素受體底物1的表達(dá)影響胰島素信號(hào)通路[21-22]。本研究中發(fā)現(xiàn)，與單藥治療組比較，聯(lián)合治療組患者治療后miR-144相對(duì)表達(dá)水平下降。出現(xiàn)此結(jié)果的原因可能是2型糖尿病患者處于慢性炎癥狀態(tài)，大量損傷相關(guān)模式分子(DAMPs)積累可誘導(dǎo)天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1產(chǎn)生并裝配炎性小體，介導(dǎo)炎性反應(yīng)擴(kuò)大，從而誘發(fā)2型糖尿病或致病情加重，而卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖對(duì)患者進(jìn)行治療，能夠有效抑制炎癥因子，從而改善miR-144表達(dá)。同時(shí)有研究指出，NLRP3過(guò)表達(dá)在胰島素耐受中發(fā)揮重要作用，其是調(diào)節(jié)葡萄糖內(nèi)穩(wěn)態(tài)與胰島素抵抗的重要因子[23-24]。由此可見(jiàn)，本研究使用卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖對(duì)2型糖尿病患者進(jìn)行治療，能夠改善患者胰島β細(xì)胞功能，改善胰島素抵抗，提高血糖控制效果。

綜上所述，采用卡格列凈聯(lián)合阿卡波糖對(duì)2型糖尿病患者進(jìn)行治療，有利于降低患者血糖，改善胰島素抵抗，降低炎癥因子水平，有效性更高。本研究為臨床治療2型糖尿病提供了一定參考依據(jù)。