BDNF及其受體TrkB在癌癥合并創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙患者外周血中的表達及意義

王娜 余丙清 姜波 金濤 劉敏捷 顏文萍

近些年我國惡性腫瘤發(fā)病率及患病人數(shù)均呈明顯升高的趨勢[1]。多數(shù)患者被確診為癌癥后會出現(xiàn)較大的心理負擔(dān)及壓力，其中創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（posttraumatic stress disorder，PTSD）在癌癥患者的發(fā)生率為5%～19%，此外還有5%～13%的癌癥患者表現(xiàn)為PTSD的亞臨床癥狀[2-3]。有研究顯示，癌癥合并PTSD患者的療效及生活質(zhì)量更差，極易出現(xiàn)各種抑郁、焦慮等心理問題，故應(yīng)及時發(fā)現(xiàn)并予以有效干預(yù)才可取得良好的治療效果[4]。既往動物實驗研究證實，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）及其受體酪氨酸激酶 B（tyrosine kinase B，TrkB）在慢性應(yīng)激抑郁發(fā)病機制中發(fā)揮著重要的作用，但其在癌癥合并PTSD患者中是否發(fā)揮同樣的作用目前尚未見相關(guān)報道[5-6]。因此，本研究擬觀察BDNF及其受體TrkB在癌癥合并PTSD患者外周血中的表達，分析其與抑郁、焦慮嚴(yán)重程度的相關(guān)性關(guān)系，從而探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月-2020年1月本院收治的57例癌癥合并PTSD患者為觀察組，選擇同期55例癌癥患者為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理組織學(xué)檢查均確診為癌癥；（2）觀察組患者均符合文獻[7]中PTSD相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（3）年齡＞18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）對照組患者既往有PTSD、精神障礙個人或家族史；（2）合并意識或智力障礙；（3）合并可能影響精神狀態(tài)的疾病，如神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌、心腦血管系統(tǒng)疾??；（4）有長期飲酒或藥物依賴史；（5）處于哺乳、妊娠或月經(jīng)期。觀察組男32例，女25例，平均年齡為（56.2±10.1）歲，平均病程為（8.0±1.7）個月，受教育年限為（10.5±2.6）年；腫瘤類型：消化系統(tǒng)腫瘤20例，呼吸系統(tǒng)腫瘤15例，血液系統(tǒng)腫瘤12例，其他10例。對照組男31例，女24例，平均年齡為（57.0±9.6）歲，平均病程為（7.8±1.6）個月，受教育年限為（10.3±2.5）年；腫瘤類型：消化系統(tǒng)腫瘤18例，呼吸系統(tǒng)腫瘤17例，血液系統(tǒng)腫瘤12例，其他8例。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究方案已通過醫(yī)院倫理委員會審核和批準(zhǔn)實施，所有患者均知曉本研究方案并簽署同意書自愿參與。

1.2 方法

采用Western blot法檢測BDNF及其受體TrkB在兩組患者外周血中的表達水平，將血液組織標(biāo)本置于冰上，然后加入200 μl三去污裂解液，予以蛋白裂解處理30 min后提取總蛋白，采用Bradford法檢測提取獲得的總蛋白濃度。將蛋白濃縮液經(jīng)95 ℃變性處理后進行SDS-PAGE電泳、染色、轉(zhuǎn)膜等一系列實驗操作，在37 ℃，3%的溫度濕度條件下予以小牛血清白蛋白封閉2 h處理，加入羊抗人BDNF或TrkB多克隆抗體及人抗鼠β-actin抗體，抗體稀釋濃度均為1∶500，Santa-Cruz公司生產(chǎn)，隨后在4 ℃溫度條件下孵育過夜處理。然后加入相應(yīng)二抗，抗體稀釋濃度均為1∶200，置于室溫條件下孵育處理60 min，最后顯色處理后予以膠片曝光和洗片操作。采用配套的凝膠成像分析系統(tǒng)掃描實驗檢測獲得的蛋白條帶并予以統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果為BDNF/β-actin 或 TrkB/β-actin 灰度值。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

（1）比較兩組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平。（2）比較兩組HAMD量表評分。采用HAMD量表評估患者抑郁程度，HAMD量表包含24個評估項目，其中絕望感因子0～12分，睡眠障礙因子0～6分，全身癥狀因子0～2分，阻滯因子0～15分，認識障礙因子0～22分，焦慮/軀體化因子0～16分，總評分＜8分為無抑郁癥狀，評分8～20分為可能有抑郁，評分＞20分為輕度或中度抑郁癥狀，評分＞35分為嚴(yán)重抑郁癥狀。（3）比較兩組HAMA量表評分。采用HAMA量表評估患者焦慮程度，HAMA量表包含14個項目，精神性焦慮包括7個項目，軀體化焦慮包含7個項目，每個項目0～4分，評分≤7分為無焦慮癥狀，評分＞7分為可能有焦慮癥狀，評分＞14分為肯定有焦慮癥狀，評分＞21分為明顯焦慮癥狀，評分＞29分為嚴(yán)重焦慮癥狀。（4）分析BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA評分的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，采用Pearson法分析BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分的相關(guān)性，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平比較

觀察組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見圖1、表1。

表1 兩組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平比較（±s）

表1 兩組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平比較（±s）

組別 BDNF/β-actin TrkB/β-actin對照組（n=55） 0.942±0.150 0.893±0.121觀察組（n=57） 0.201±0.057 0.192±0.049 t值 22.398 21.053 P值 0.000 0.000

2.2 兩組HAMD量表評分比較

與對照組比較，觀察組絕望感、睡眠障礙、全身癥狀、阻滯、認識障礙、焦慮/軀體化及HAMD總分均較高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組HAMD量表評分比較[分，（±s）]

表2 兩組HAMD量表評分比較[分，（±s）]

組別 絕望感 睡眠障礙 全身癥狀 阻滯 認識障礙 焦慮/軀體化 總分對照組（n=55） 1.32±0.41 1.22±0.46 0.64±0.23 1.61±0.57 1.06±0.30 2.61±1.04 7.23±0.89觀察組（n=57） 4.12±1.17 4.07±1.22 1.27±0.28 7.08±2.33 5.83±1.72 5.69±2.48 28.05±7.74 t值 12.115 12.078 7.221 14.608 13.375 6.632 8.138 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 兩組HAMA量表評分比較

觀察組精神性焦慮、軀體性焦慮及HAMA總分均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組HAMA量表評分比較[分，（±s）]

表3 兩組HAMA量表評分比較[分，（±s）]

組別 精神性焦慮 軀體性焦慮 總分對照組（n=55） 5.12±1.65 1.61±0.35 6.77±1.54觀察組（n=57） 13.23±3.42 11.05±4.97 24.31±6.49 t值 8.357 9.094 7.325 P值 0.000 0.000 0.000

2.4 BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分的相關(guān)性分析

BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分均呈負相關(guān)（P＜0.05），見表4。

表4 BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分的相關(guān)性分析

3 討論

人類日常生活中存在各種各樣的急性應(yīng)激反應(yīng)，是機體適應(yīng)社會、心理及內(nèi)外環(huán)境等因素刺激時而表現(xiàn)出的重要生物學(xué)特性[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致海馬組織內(nèi)的神經(jīng)突觸出現(xiàn)明顯萎縮，而神經(jīng)突觸棘數(shù)量則顯著減少，通過上述病理改變進而破壞海馬組織內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)，最終對人類學(xué)習(xí)、記憶等生理功能產(chǎn)生影響[9-10]。PTSD則是較為常見的應(yīng)激反應(yīng)，其是指機體在遇到異常威脅或災(zāi)難所致的延遲性發(fā)生，并且呈長時間持續(xù)存在的精神障礙[11]。作為一種嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)刺激因素，癌癥可誘發(fā)較為明顯的PTSD癥狀，患者不但要面臨放化療及手術(shù)治療所引起的不良反應(yīng)，還要面臨PTSD引起的其他問題，如抑郁、焦慮等，嚴(yán)重者甚至存在自殺的傾向[12]。積極探討癌癥合并PTSD的發(fā)生機制，分析其與抑郁、焦慮的相關(guān)性關(guān)系均是有效防治癌癥患者PTSD的關(guān)鍵。

BDNF是一種重要的神經(jīng)系統(tǒng)細胞因子，其不但在發(fā)育期對人類胚胎組織的神經(jīng)系統(tǒng)分化、發(fā)育、成熟及神經(jīng)突觸形成等生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵性的作用，而且在成年期還可起到調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)生理功能的重要作用[13]。此外，BDNF也是人類遺傳基因與外界環(huán)境、神經(jīng)突觸可塑性及神經(jīng)細胞凋亡等之間必需的信息傳遞環(huán)節(jié)，在各種精神系統(tǒng)異常疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著極為重要的作用[14]。TrkB則是一種廣泛存在于神經(jīng)細胞膜上的跨膜蛋白，主要由原癌基因家族編碼產(chǎn)生，在神經(jīng)細胞分化、增殖、發(fā)育成熟及細胞信號傳遞等生理過程中均發(fā)揮重要作用[15]。TrkB是BDNF的特異性受體，兩者均廣泛存在于人體大腦尤其是海馬組織中[16]。BDNF與TrkB特異性結(jié)合后可導(dǎo)致后者磷酸化，從而激活PI3K/AKT、MAPK等一系列下游信號傳導(dǎo)通路，進而激活環(huán)磷酸腺苷（cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，導(dǎo)致海馬組織內(nèi)的BDNF及抗凋亡反應(yīng)蛋白（Bcl-2）的表達水平顯著性升高，最終明顯增加神經(jīng)突觸的可塑性，確保神經(jīng)細胞的生存及神經(jīng)突觸的形成[17]。BDNF/TrkB信號通路調(diào)控人類神經(jīng)系統(tǒng)生理功能具有重要的意義，也是目前治療抑郁癥的作用靶點之一[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，BDNF與PTSD的發(fā)生發(fā)展可能存在一定的聯(lián)系，但仍有不同意見，且尚未見BDNF/TrkB信號通路與癌癥合并PTSD的文獻報道，也無BDNF及其受體TrkB蛋白表達與抑郁、焦慮嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[19]。本研究顯示，觀察組外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示癌癥合并PTSD患者的BDNF、TrkB表達受到明顯抑制，使得神經(jīng)系統(tǒng)功能較未合并PTSD的癌癥患者低下。觀察組HAMD及HAMA量表評分均高于對照組，提示癌癥合并PTSD患者的抑郁、焦慮癥狀明顯重于對照組。進一步分析BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分的相關(guān)性關(guān)系，結(jié)果顯示，BDNF及其受體TrkB蛋白表達與HAMD、HAMA量表評分均呈負相關(guān)（P＜0.05），提示外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達可反映癌癥合并PTSD患者的抑郁、焦慮癥狀的嚴(yán)重程度。

綜上所述，癌癥合并PTSD患者外周血BDNF及其受體TrkB蛋白表達水平明顯下降，在診斷癌癥患者是否合并PTSD和評估抑郁、焦慮癥狀嚴(yán)重程度方面均具有一定價值。