梅花鹿感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的診斷及中西醫(yī)結(jié)合治療

羅 柳 湯德元 曾智勇 黃 濤 張 森 楊志剛 晏仁潭 韓超逸

(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng)，550025)

1 臨床癥狀

2020年5月下旬，貴州省某動(dòng)物園存欄的20頭梅花鹿(Cervusnippon)部分出現(xiàn)食欲減退、精神沉郁等癥狀，病程2～3 d，隨后腹瀉、胃部脹大、食欲廢絕，有6頭梅花鹿接連發(fā)病死亡(圖1)。經(jīng)詢問(wèn)飼養(yǎng)管理人員發(fā)現(xiàn)，梅花鹿沒有出現(xiàn)明顯的發(fā)熱，現(xiàn)場(chǎng)測(cè)量3頭發(fā)病梅花鹿的體溫分別為38.7、39.6、41.5 ℃，其臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁，不食，皮溫不穩(wěn)，耳、鼻、四肢末端發(fā)涼，口腔黏膜暗紅，腹部有疼痛反應(yīng)，有仰頭蹬腿的表現(xiàn)，且呼吸急促，排出惡臭糞便。

圖1 患病與病死梅花鹿臨床癥狀

2 剖檢結(jié)果

將發(fā)病死亡梅花鹿進(jìn)行剖檢(圖2)，可見其腹膜充血嚴(yán)重并帶有出血點(diǎn)，腸黏膜充血出血脹氣，胃膜充血出血且胃內(nèi)有大量未消化草料，腹膜與腹壁多處粘黏，脾臟充血，肺部充血，腎臟腫大，肝臟腫大且有多處梗死灶。

圖2 病死梅花鹿剖檢結(jié)果

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌制作肺部觸片及腸道觸片，進(jìn)行革蘭氏染色(圖3A、B)。無(wú)菌采集發(fā)病梅花鹿的病料，接種在涂布10%胎牛血清的LB固體培養(yǎng)基上，37 ℃恒溫箱中厭氧培養(yǎng)12 h，可見白濁環(huán)狀菌落。挑取部分該菌落涂于載玻片進(jìn)行革蘭氏染色，在光學(xué)顯微鏡下可見兩端鈍圓的藍(lán)紫色革蘭陽(yáng)性、短粗的桿菌(圖3C)。

圖3 病死梅花鹿鏡檢結(jié)果

3.2 生化特性鑒定

按照細(xì)菌微量生化鑒定管說(shuō)明書進(jìn)行操作，從培養(yǎng)基中挑選部分菌落，接種于細(xì)菌微量生化鑒定管中進(jìn)行生化特性鑒定。結(jié)果表明：該細(xì)菌對(duì)葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖和果糖呈陽(yáng)性，且產(chǎn)酸產(chǎn)氣；對(duì)木糖、甘露醇和山梨醇呈陰性；在含鐵牛乳試驗(yàn)中出現(xiàn)“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象；硫化氫試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)呈陽(yáng)性；靛基質(zhì)試驗(yàn)呈陰性。結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)特性及生化特性鑒定結(jié)果，判斷分離菌為產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)。

3.3 支原體PCR檢測(cè)結(jié)果

將送檢的梅花鹿病料無(wú)菌采取病變及周邊部位，混合研磨，液氮反復(fù)凍融3次，勻漿器磨20 min后收集勻漿，12 000 r/min 離心10 min，取上清液，用TaKaRa MinBEST Viral DNARNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒分別提取核酸。

進(jìn)行支原體PCR擴(kuò)增。反應(yīng)結(jié)束后取5 μL PCR產(chǎn)物于1%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測(cè)(90 V，35 min)，用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。結(jié)果未檢測(cè)出支原體的特異性條帶(圖4)。

圖4 病死梅花鹿病變組織核酸PCR擴(kuò)增結(jié)果

4 治療方案

西獸醫(yī)治療：青霉素鈉80萬(wàn)IU×6支/頭，用10 mL生理鹽水稀釋后，配合慶大霉素8萬(wàn)IU×6支/頭，用麻醉槍肌內(nèi)注射，2次/d，連用6 d。

外部清理消毒：水槽及料槽清洗消毒，在料槽中添加新的潔凈草料。水槽中添加葡萄糖、維生素C，按6 g/頭口服飼喂6 d。12 h后更換水槽飲用水重新投藥，投藥2 d后未有新發(fā)病梅花鹿，已發(fā)病梅花鹿逐漸恢復(fù)飲食，投藥3 d后停止投放葡萄糖，維生素C投藥6 d。

中獸醫(yī)治療：中獸醫(yī)辯證該病屬里證，因疫癘所致。疫癘，是一種外感致病因素，一般具有較強(qiáng)傳染性，發(fā)病急驟，蔓延迅速[1]。疫癘流行主要受氣候反常變化、環(huán)境衛(wèi)生不良等因素的影響。由于貴州地區(qū)的氣溫變化較大，降雨較多，本次梅花鹿發(fā)病應(yīng)屬外邪入里。治療方劑采用《傷寒論》的“白頭翁湯”加減，組方為白頭翁15 g、黃柏15 g、黃連15 g、郁金10 g、豬苓15 g、茯苓15 g，候溫飼喂，每頭每天1劑，連用6 d后梅花鹿群基本恢復(fù)正常。

5 討論

通過(guò)對(duì)發(fā)病梅花鹿的臨床癥狀、病理變化及革蘭氏染色觀察，判斷其患有產(chǎn)氣莢膜梭菌感染。采取了中藥內(nèi)服、外部清理消毒及抗生素投喂的綜合治療方法，經(jīng)過(guò)1 d的治療，沒有新增死亡病例。經(jīng)過(guò)6 d的治療后，發(fā)病梅花鹿全部被治愈。

產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(也稱魏氏梭菌)感染引起的病畜多種器官出血、急性病變和突然死亡為主要特征的疾病。該病病程短，致死率極高，應(yīng)以預(yù)防為主，并加強(qiáng)管理[2]。第一，建議梅花鹿園區(qū)及周邊使用0.1% KMnO4水溶液進(jìn)行徹底消毒，對(duì)發(fā)病死亡的梅花鹿進(jìn)行無(wú)害化處理，如鋪墊及覆蓋生石灰深埋、焚燒等[3]；第二，對(duì)發(fā)病梅花鹿進(jìn)行隔離，防止產(chǎn)氣莢膜梭菌感染擴(kuò)散及交叉感染園內(nèi)其他動(dòng)物；第三，保證食物干凈新鮮衛(wèi)生，營(yíng)養(yǎng)均衡，提高機(jī)體抵抗力，嚴(yán)禁飼喂發(fā)霉變質(zhì)飼料，保證梅花鹿體內(nèi)腸道正常菌群平衡[4]。為防止應(yīng)激情況，應(yīng)提前在飲水中添加電解多維，同時(shí)對(duì)圈舍、水槽、料槽及飼養(yǎng)工具進(jìn)行清潔和消毒，保持潔凈和干燥，提高動(dòng)物的生活環(huán)境質(zhì)量，從而預(yù)防疫病發(fā)生。建議該動(dòng)物園采用鹿猝死病三聯(lián)菌苗，或?qū)⒈镜胤蛛x菌株經(jīng)甲醛滅活后，使用氫氧化鋁作為佐劑制成滅活苗接種，可有效防止產(chǎn)氣莢膜梭菌病的發(fā)生。