青海省海北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉的調(diào)查

馬曉茜

摘要：為了解我國(guó)青海省海北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的感染情況，對(duì)該地區(qū)的海晏縣、祁連縣、剛察縣、門(mén)源回族自治縣腹規(guī)?；?chǎng)進(jìn)行樣品采集，分別采取104、89、113、142份牛血清樣品，然后利用牛病毒性腹瀉病毒血清學(xué)進(jìn)行抗體檢測(cè)，同時(shí)利用RT-PCR法對(duì)牛病毒性腹瀉病毒進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。結(jié)果顯示，海北藏族地區(qū)海晏縣、祁連縣、剛察縣、門(mén)源回族自治縣牛病毒性腹瀉病毒抗體總陽(yáng)性率為44.64%;RT-PCR檢測(cè)病毒性腹瀉病毒病原結(jié)果陽(yáng)性率分別為6.73%、6.74%、8.85%、4.23%;說(shuō)明青海省海北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒的整體免疫水平不高，且該病的病原陽(yáng)性率偏高，需要加強(qiáng)對(duì)該病的一個(gè)免疫預(yù)防。

關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒;血清學(xué);病原學(xué);調(diào)查

牛病毒性腹瀉病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬，在分類(lèi)上與邊界病毒、豬瘟病毒同為一屬，在抗原性上面具有有交叉性反應(yīng)[1-2]。該病是在美國(guó)東部地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)并分離的，我國(guó)是在上個(gè)世紀(jì)80年代首次在引進(jìn)的國(guó)外牛的流產(chǎn)胎兒中分離[3]。臨床上該病毒會(huì)感染牛、豬、羊等多種家畜，但是主要以感染牛為主。牛感染該病之后會(huì)出現(xiàn)腹瀉、發(fā)熱、白細(xì)胞減少、流產(chǎn)等癥狀，同時(shí)對(duì)犢牛還會(huì)造成先天的持續(xù)性感染，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大損失。為了了解青海省海北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒的感染情況，筆者對(duì)該地區(qū)的海晏縣、祁連縣、剛察縣、門(mén)源回族自治縣牛病毒性腹瀉病毒進(jìn)行血清學(xué)和病原學(xué)調(diào)查，為該病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品

在青海省海北藏族地區(qū)海晏縣、祁連縣、剛察縣、門(mén)源回族自治縣的規(guī)?；?chǎng)分別采取104、89、113、142份病牛血清樣品，共計(jì)448份。每份樣品的血樣采集3-5mL，置于加有肝素或EDTA抗凝劑的采血管中，2～8°C冷藏保存至實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2主要試劑

RNA提取試劑盒購(gòu)于北京天根生物科技有限公司，購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司;BVDV陽(yáng)性血清、陰性血清購(gòu)于華威特生物制藥有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1抗體效價(jià)測(cè)定

用DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（含3.5%馬血清）對(duì)待檢樣品和BVDV陽(yáng)性、陰性對(duì)照血清在96孔U型板內(nèi)進(jìn)行2倍稀釋?zhuān)?∶2、1∶4和1∶8比例進(jìn)行稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度接種2孔，每孔0.1mL。用DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（含3.5%馬血清）將牛病毒性腹瀉病毒中和抗原稀釋為200 TCID50/0.1mL。將稀釋好的中和抗原液按每孔0.1mL的量加到含有血清的96孔板中，置37°C的二氧化碳培養(yǎng)箱中和1h。最后取培養(yǎng)16～24h、長(zhǎng)成良好的MDBK96孔培養(yǎng)板細(xì)胞去中和1h的病毒，每孔0.1mL，置于37°C的二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)4d，然后計(jì)算細(xì)胞板中的血清中和抗體效價(jià)，同時(shí)記錄陽(yáng)性個(gè)數(shù)然后計(jì)算陽(yáng)性率。

1.2.2病原學(xué)檢測(cè)

取陰陽(yáng)對(duì)照和待檢樣品根據(jù)RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行提取，然后通過(guò)反轉(zhuǎn)錄方法獲得cDNA，在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀系統(tǒng)下觀(guān)察并記錄BVDV抗原陽(yáng)性份數(shù)，然后計(jì)算陽(yáng)性率。

2結(jié)論

2.1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可以看出4個(gè)縣的牛群牛病毒性腹瀉病毒血清中和試陽(yáng)性率分別為43.27%、35.96%、51.33%、45.75%，陽(yáng)性血清總的為200份，總陽(yáng)性率44.75%?？贵w陽(yáng)性率直接反映樣品病牛過(guò)往感染牛病毒性腹瀉，同時(shí)也反映母源抗體獲得情況和疫苗免疫情況，本調(diào)查結(jié)果說(shuō)明44.64%的牛只已獲得牛病毒性腹瀉免疫力。

2.2抗原檢測(cè)結(jié)果

從表2 可以看出4個(gè)縣的牛群樣品牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為6.73%、6.74%、8.85%、4.23%?？乖瓩z測(cè)結(jié)果陽(yáng)性說(shuō)明病牛感染了牛病毒性腹瀉病毒，或者為牛病毒性腹瀉病毒持續(xù)性感染牛。

3討論

牛病毒性腹瀉病毒自從1980年傳入我國(guó)，就是我國(guó)各地區(qū)多個(gè)省份普遍存在[7];有學(xué)者對(duì)內(nèi)蒙古自治區(qū)集約化養(yǎng)牛場(chǎng)病毒性腹瀉感染情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)巴彥淖爾、烏蘭浩特、呼和浩特地區(qū)的牛場(chǎng)病毒性腹瀉病毒平均陽(yáng)性率分別為48.70%、77.80%、33.33%，總血清陽(yáng)性率為58.35%[8]。王建領(lǐng)等[9]在2012年對(duì)牛病毒性腹瀉在我國(guó)的流行范圍進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該病在我國(guó)各地已經(jīng)廣泛流行。本次對(duì)青海省海北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒的血清抗體和病原進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)4個(gè)縣的448份牛血清樣品的整體抗體水平在35.96%- 51.33%，總的陽(yáng)性血清為200份，說(shuō)明這4個(gè)縣的牛病毒性腹瀉的整體免疫水平參差不齊，且抗體水平不高，說(shuō)明該地區(qū)的羊牛場(chǎng)應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)牛病毒性腹瀉的整體免疫水平，而且病原學(xué)的檢測(cè)結(jié)果牛病毒性腹瀉的陽(yáng)性率在4-23%-8.85%，充分證明了北藏族地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒的感染率偏高，也證明了對(duì)該病毒的抵抗能力偏弱，需要對(duì)牛群合理安排牛病毒性腹瀉病毒的疫苗免疫。

參考文獻(xiàn)：

[1]Tomoko Y， Takashi K， Hiroshi A， et al. Genomic analyses of bovine viral diarrhea viruses isolated from cattle imported into Japan between 1991 and 2005[J]. Vet Microbiol， 2008， 127（3-4）： 386-391.

[2]張淑琴，郭利，冷雪，等.牛病毒性腹瀉病毒 BVDV-JL 株的分離與鑒定[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33（3）：181-184.

[3]蘭宇，孟相秋，趙建增，等.牛病毒性腹瀉的免疫預(yù)防[J]. 中國(guó)動(dòng)物保健 ，2016，2（18）：29-31.