不同產(chǎn)地訶子中11種成分的含量測定及其化學計量學綜合評價

久欣 李君 張慧文 白云霞 劉宏 王煥蕓

中圖分類號 R284.1 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2022）03-0299-09

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.03.08

摘 要 目的 建立不同產(chǎn)地訶子中11種成分的含量測定方法，為其質(zhì)量評價及優(yōu)質(zhì)種源的篩選提供參考。方法 以不同產(chǎn)地的16批訶子為檢測樣品，建立高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法測定訶子中牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁11種成分的含量。采用Shim-pack GIST-HP C18色譜柱，以0.1%甲酸溶液-甲醇為流動相進行梯度洗脫，流速為0.25 mL/min，進樣量為3 μL，柱溫為35 ℃;采用電噴霧電離源，在正、負離子電離模式下進行檢測，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測模式，霧化氣流量為3 L/min，加熱氣流量為10 L/min，接口溫度為300 ℃，脫溶劑溫度為526 ℃，加熱塊溫度為400 ℃。運用灰色關(guān)聯(lián)分析（GRA）和逼近理想解排序（TOPSIS）法對不同產(chǎn)地訶子進行比較分析和綜合評價。結(jié)果 含量測定方法學考察結(jié)果符合相關(guān)要求。16批訶子樣品中上述11種成分的含量分別為7.27～106.38、5 370.24～31 010.43、21.42～1 097.50、4.26～111.09、17 940.42～38 490.18、6 247.26～40 182.18、12 125.94～209 519.96、2.71～9.04、0.24～44.12、1.49～9.17、25.35～126.51 μg/g。GRA和TOPSIS分析結(jié)果均顯示，樣品H12（產(chǎn)地為云南）、H11（產(chǎn)地為廣西）、H5（產(chǎn)地為湖南）、H14（產(chǎn)地為廣東）、H13（產(chǎn)地為四川）、H8（產(chǎn)地為廣東）、H1（產(chǎn)地為云南）的綜合質(zhì)量相對較好。結(jié)論 所建方法快速靈敏、準確可靠，可用于訶子的內(nèi)在質(zhì)量綜合評價和優(yōu)質(zhì)種源篩選。

關(guān)鍵詞 訶子;高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜;含量測定;灰色關(guān)聯(lián)分析;逼近理想解排序法

Content determination of 11 components in Terminalia chebula from different origins and comprehensive evaluation of their chemometrics

JIU Xin1，LI Jun1，ZHANG Huiwen1，BAI Yunxia2，LIU Hong1，WANG Huanyun1（1. School of Pharmacy， Inner Mongolia Medical University， Hohhot 010110， China; 2. Baotou Medical College， Inner Mongolia University of Science and Technology， Inner Mongolia Baotou 014040， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To establish the method for the content determination of 11 components in Terminalia chebula from different origins， and to provide reference for their quality evaluation and superior provenance screening. METHODS Taking 16 batches of T. chebula from different origins as test samples， high performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry was established to determine the contents of 11 components， such as vitexin， gallic acid， methyl gallate， ethyl gallate， ellagic acid， corilagin， shikimic acid， ferulic acid， luteolin， quercetin and rutin. The determination was performed on Shim-pack GIST-HP C18 column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid solution-methanol at the flow rate of 0.25 mL/min （gradient elution）. The sample size was 3 μL， and the column temperature was 35 ℃. Electrospray ionization source was used in positive and negative ion mode， with multiple reaction monitoring. The atomized gas flow rate was 3 L/min， the heating gas flow rate was 10 L/min， the interface temperature was 300 ℃， the desolvent temperature was 526 ℃， and the heating block temperature was 400 ℃. Grey correlation analysis （GRA） and technique for order preference by similarity to ideal solution （TOPSIS） methods were used to compare， analyze and comprehensively evaluate T. chebula from different origins. RESULTS The results of content determination methodology met the relevant requirements. The contents of 11 components in 16 batches of T. chebula were 7.27-106.38， 5 370.24-31 010.43， 21.42-1 097.50， 4.26-111.09， 17 940.42-38 490.18， 6 247.26-40 182.18， 12 125.94- 209 519.96， 2.71-9.04， 0.24-44.12， 1.49-9.17 and 25.35-126.51 μg/g， respectively. The results of GRA and TOPSIS analysis showed that the comprehensive qualities of sample H12 （from Yunnan）， H11 （from Guangxi）， H5 （from Hunan）， H14 （from Guangdong），H13 （from Sichuan），H8 （from Guangdong），H1 （from Yunnan） were better.? CONCLUSIONS The established method is fast， sensitive and reliable，and can be suitable for comprehensive evaluation of the internal quality and superior provenance screening of T. chebula.

KEYWORDS? ?Terminalia chebula; high performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry; content determination; grey correlation analysis; technique for order preference by similarity to ideal solution

訶子為使君子科植物訶子Terminalia chebula Retz.或絨毛訶子Terminalia chebula Retz. var. tomentella Kurt.的干燥成熟果實，主產(chǎn)于廣東、廣西、云南、西藏等地。訶子性平，味苦、酸、澀，歸肺、大腸經(jīng)，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功效[1]?，F(xiàn)代藥理學研究表明，訶子在抗菌[2-3]、抗氧化[4-6]、抗腹瀉[7]、修復肝損傷[8]、降血脂[9]、抗腫瘤[10]、預防動脈粥樣硬化[11]等方面具有一定作用。中藥藥理作用的發(fā)揮是多種活性成分協(xié)同作用的結(jié)果，鞣質(zhì)類、酚酸類、黃酮類、三萜類等化合物是訶子發(fā)揮藥理活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[12]。訶子中鞣質(zhì)類和酚酸類物質(zhì)通過清除氧自由基、影響氧化酶活性實現(xiàn)抗氧化作用，從而達到護肝、強心的目的[13];黃酮類物質(zhì)可以通過抑制腫瘤細胞增殖，從而達到抗腫瘤的目的[14];生物類黃酮物質(zhì)可以抑制環(huán)氧合酶的活性，預防血栓形成，在治療心血管疾病方面具有一定作用[14]。

目前，關(guān)于訶子的質(zhì)量控制研究主要以鞣質(zhì)類和酚酸類化合物作為指標性成分，而對訶子中黃酮類等其他成分的研究較少，且大多采用高效液相色譜法進行測定[15-16]，而該方法耗時長且靈敏度較低。故本研究采用高靈敏度、分析時間短的高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）法測定訶子中11種成分的含量，包括鞣質(zhì)類（鞣花酸、柯里拉京）、酚酸類（沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、莽草酸）、黃酮類（牡荊素、木犀草素、槲皮素、蘆?。┖捅奖犷悾ò⑽核幔┗衔?，并結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)分析（grey correlation analysis，GRA）和逼近理想解排序（technique for order preference by similarity to ideal solution，TOPSIS）法對不同產(chǎn)地訶子進行比較分析和綜合評價，以期為其質(zhì)量評價及優(yōu)質(zhì)種源的篩選提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

LC-MS8045型三重四極桿HPLC-ESI-MS聯(lián)用系統(tǒng)及配備的 LC-20AD型輸液泵、DGU-20A5R型在線脫氣機、SIL-20AC型自動進樣器、CTO-20A 型柱溫箱、CBM-20A型系統(tǒng)控制器、FCV-20AH2型閥切換系統(tǒng)購自日本Shimadzu公司;SB25-12 DTD型超聲波清洗儀購自寧波新芝生物科技股份有限公司;AP135W型十萬分之一電子天平購自島津企業(yè)管理（中國）有限公司;SB-1300型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購自上海愛朗儀器有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

本研究購買的訶子飲片共16批（編號H1～H16），經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學藥學院生藥教研室張慧文博士鑒定，H1～H11、H13～H16為使君子科訶子T. chebula Retz.的干燥成熟果實，H12為絨毛訶子T. chebula Retz. var.? ? ?tomentella Kurt.的干燥成熟果實，16批訶子飲片的來源信息見表1。牡荊素對照品（批號V113960，純度≥98.0%）、沒食子酸對照品（批號G131992，純度≥99.0%）、沒食子酸甲酯對照品（批號M103947，純度≥98.0%）、沒食子酸乙酯對照品（批號E119029，純度≥99.0%）、鞣花酸對照品（批號E102710，純度≥96.0%）均購自阿拉丁試劑（上海）有限公司;柯里拉京對照品（批號B20672，純度≥98%）、莽草酸對照品（批號B20838，純度≥98%）均購自上海源葉生物科技有限公司;阿魏酸對照品（批號110773-201914，純度≥99.0%）、槲皮素對照品（批號100081-201810，純度≥99.1%）、蘆丁對照品（批號21020402，純度≥98.0%）均購自中國食品藥品檢定研究院;木犀草素對照品（批號DSTDM003201，純度≥98.0%）購自成都德思特生物技術(shù)有限公司;甲醇、乙腈為色譜純，水為屈臣氏蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁對照品適量，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶液定容，配制成上述11種成分的質(zhì)量濃度分別為533、502、515、508、518、513、514、510、420、566、464 μg/mL的單一對照品貯備液。精密吸取上述單一對照品貯備液10、100、35、3、1 000、100、500、3、3、3、20 μL，置于同一5 mL量瓶中，加70%甲醇溶液定容，制備成上述11種成分的質(zhì)量濃度分別為1.07、10.04、3.60、0.30、103.60、10.26、51.40、0.31、0.25、0.34、1.86 μg/mL的混合對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取訶子粉末約0.25 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，加入70%甲醇溶液25 mL，稱質(zhì)量，超聲（頻率40 kHz，功率100 W）處理30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，并用70%甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，離心（3 000 r/min）10 min，取上清液，即得供試品濃溶液。由于各成分含量差異較大，為減小誤差、提高準確度，在測定樣品中沒食子酸、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸的峰面積時，需將供試品濃溶液稀釋50倍（取20 μL供試品濃溶液，以980 μL 70%甲醇溶液進行稀釋）;在測定樣品中牡荊素、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁的峰面積時，需將供試品濃溶液稀釋3倍（取300 μL供試品濃溶液，以600 μL 70%甲醇溶液進行稀釋）。

2.2 色譜-質(zhì)譜條件

采用Shim-pack GIST-HP C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，3 μm），以0.1%甲酸溶液（A）-甲醇（B）為流動相進行梯度洗脫（0.01～1.50 min，20%B;1.50～3.00 min，20%B→75%B;3.00～5.00 min，75%B;5.00～5.50 min，75%B→95%B;5.50～7.00 min，95%B;7.00～7.01 min，95%B→20%B）;流速為0.25 mL/min;柱溫為35 ℃;進樣量為3 μL。

采用電噴霧離子源，在正（+）、負（-）離子電離模式下進行檢測，掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測模式，離子源溫度為320 ℃;霧化氣流量為3 L/min;加熱氣流量為10? ?L/min;接口溫度為300 ℃;脫溶劑溫度為526 ℃;加熱塊溫度為400 ℃。訶子中11種成分的質(zhì)譜分析參數(shù)見表2。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性考察 取“2.1.1”項下混合對照品溶液、“2.1.2”項下供試品溶液（樣品編號為H2）及空白溶液（70%甲醇溶液）適量，按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，空白溶液對待測峰無干擾，且供試品溶液圖譜中11種成分的出峰位置與對照品基本一致，表明本方法的專屬性較好。多重反應(yīng)監(jiān)測色譜圖見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.1”項下混合對照品溶液5、10、40、50、100、200、400、500、800 μL，以70%甲醇溶液分別定容至1 mL，得到系列線性工作液。取上述線性工作液，分別按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣測定，記錄峰面積。以峰面積（Y）對質(zhì)量濃度（X）進行線性回歸，繪制11個成分的標準曲線并計算其線性回歸方程。結(jié)果顯示，各成分在其相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與其峰面積均呈良好的線性關(guān)系（r均大于0.999 0），結(jié)果見表3。

2.3.3 定量限與檢測限考察 取“2.1.1”項下混合對照品溶液，以70%甲醇溶液進行倍比稀釋，然后按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣測定，并以信噪比為3計算檢測限、信噪比為10計算定量限，結(jié)果見表3。

2.3.4 精密度考察 取“2.3.2”項下相應(yīng)質(zhì)量濃度的線性工作液（即取100 μL混合對照品溶液，以70%甲醇溶液定容至1 mL制得），按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄各成分的峰面積。結(jié)果顯示，牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁峰面積的RSD分別為2.41%、1.67%、1.21%、2.53%、2.39%、1.33%、1.73%、2.75%、2.51%、2.44%、2.22%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復性考察 取同一批訶子粉末（樣品編號為H2），按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液（平行制備稀釋3倍或50倍的供試品溶液各6份），再按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣分析，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線計算出各成分的含量。結(jié)果顯示，牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁的平均含量分別為15.25、? ?5 321.82、324.17、51.23、24 934.33、7 708.67、11 940.04、2.65、0.27、2.63、44.32 μg/g，RSD分別為4.25%、4.46%、4.94%、4.57%、4.50%、4.33%、4.84%、3.92%、7.42%、4.08%、4.68%（n=6），表明本方法重復性較好。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 取訶子粉末（樣品編號為H2），按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液（分別制備稀釋3倍或50倍的供試品溶液），分別于室溫下放置0、6、12、24 h時，按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣分析，記錄峰面積。每份連續(xù)進樣測定3次，取平均值。結(jié)果顯示，牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁峰面積的RSD分別為4.94%、4.80%、4.69%、4.70%、4.64%、4.22%、4.92%、4.87%、5.18%、4.32%、4.72%（n=4），表明供試品溶液在室溫24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 加樣回收率考察 取已知含量的訶子粉末（樣品編號為H2）6份，每份約0.125 g，同時加入各成分質(zhì)量比近1 ∶ 1的牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁對照品溶液（其質(zhì)量濃度分別為180.00、671.43、38.63、127.00、3 113.79、987.53、1 542.00、64.00、30.02、35.00、58.03 μg/mL，以甲醇溶液為溶劑制得），按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液（分別制備稀釋3倍或50倍的供試品溶液），按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣分析，記錄峰面積，并計算各成分的加樣回收率。結(jié)果顯示，上述11種成分的平均加樣回收率分別為109.63%、101.97%、104.98%、95.72%、99.76%、106.29%、102.84%、104.69%、103.82%、100.48%、92.93%，RSD為1.83%～5.36%（n=6），表明本方法的準確度較好，結(jié)果見表4。

2.4 樣品含量測定

取16批訶子粉末（樣品編號為H1～H16），分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液（分別制備稀釋3倍或50倍的供試品溶液），再按“2.2”項下色譜-質(zhì)譜條件進樣分析，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線計算出16批訶子中11種成分的含量。結(jié)果顯示，16批訶子樣品中牡荊素、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁的含量分別為7.27～106.38、5 370.24～31 010.43、21.42～1 097.50、4.26～111.09、17 940.42～38 490.18、6 247.26～40 182.18、12 125.94～209 519.96、2.71～9.04、0.24～44.12、1.49～9.17、25.35～126.51 μg/g，不同產(chǎn)地訶子樣品中11種成分的含量差異較大。其中，H12號樣品中牡荊素、沒食子酸乙酯、莽草酸、木犀草素的含量遠高于其他批次訶子樣品，而其中沒食子酸甲酯、柯里拉京的含量遠低于其他批次訶子樣品，結(jié)果見表5。

3 化學計量學分析

3.1 GRA法

采用GRA法對16批訶子中11種成分的含量建立灰色模式識別數(shù)據(jù)集，首先對原始數(shù)據(jù)進行規(guī)格化處理以統(tǒng)一其量綱，再對16批樣品對應(yīng)指標（即11種成分含量）的最大值和最小值進行選擇，計算各待評價對象與最優(yōu)參考序列、最差參考序列的關(guān)聯(lián)度。其中，最優(yōu)參考序列為{Xsk}（k=1，2，…，n），是16個樣品對應(yīng)指標的最大值;最差參考序列為{Xtk}（k=1，2，…，n），是16個樣品對應(yīng)指標的最小值。按以下公式計算各樣品的相對關(guān)聯(lián)度（ri）：ri=[ri（s）ri（s）+ri（t）] （式中，ri（s）表示第i個評價對象與最優(yōu)參考序列的關(guān)聯(lián)度，ri（t）表示第i個評價對象與最差參考序列的關(guān)聯(lián)度），并按ri的大小進行排序[17]。GRA結(jié)果顯示，ri排名前7位的樣品是H12（產(chǎn)地為云南）>H11（產(chǎn)地為廣西）>H5（產(chǎn)地為湖南）>H14（產(chǎn)地為廣東）>H13（產(chǎn)地為四川）>H8（產(chǎn)地為廣東）>H1（產(chǎn)地為云南），結(jié)果見表6。

差異：各評價單元與最優(yōu)評價單元的距離;差異=[（ri或Ci最大值-各評價單元ri或Ci）/ri或Ci最大值]×100%

3.2 TOPSIS法

采用TOPSIS法對16批次訶子中11種成分的含量進行歸一化處理，再根據(jù)歸一化矩陣結(jié)果選出最優(yōu)方案和最劣方案，計算出各評價對象與最優(yōu)方案和最劣方案之間的距離，根據(jù)公式計算各評價對象與最優(yōu)方案的接近程度（Ci）：Ci=[Di-Di++Di-] （Di+表示第i個評價對象與最優(yōu)方案之間的歐氏距離，Di-表示第i個評價對象與最劣方案之間的歐氏距離），并按照Ci大小將各評價對象進行排序，該值越大，說明評價對象的綜合質(zhì)量越好[18]。TOPSIS分析結(jié)果顯示，Ci排名前7位的樣品是H12（產(chǎn)地為云南）>H11（產(chǎn)地為廣西）>H1（產(chǎn)地為云南）>H13（產(chǎn)地為四川）>H5（產(chǎn)地為湖南）>H14（產(chǎn)地為廣東）>H8（產(chǎn)地為廣東），結(jié)果見表6。

3.3 GRA和TOPSIS分析結(jié)果比較

由表6可知，GRA和TOPSIS分析結(jié)果基本一致，GRA中ri排名前7位的樣品是H12、H11、H5、H14、H13、H8、H1，TOPSIS分析中Ci排名前7位的樣品是H12、H11、H1、H13、H5、H14、H8。2種分析結(jié)果均表明，樣品H12、H11、H5、H14、H13、H8、H1的綜合質(zhì)量相對較好;ri與Ci排名均靠后的樣品是H15、H2、H16、H4，表明這4批訶子的綜合質(zhì)量相對較差。GRA的最大差異為84.9%，TOPSIS分析的最大差異為78.1%，說明與TOPSIS法相比，GRA法能更好地區(qū)分樣品質(zhì)量的優(yōu)劣。

4 討論

4.1 訶子中11種指標成分的選擇

現(xiàn)代研究表明，鞣質(zhì)類、酚酸類和黃酮類物質(zhì)是訶子中的主要活性成分，含量較高，其抗氧化、抗菌、抗癌、促進平滑肌收縮等藥理作用與訶子的臨床功效相對應(yīng)，是訶子質(zhì)量評價的重要指標[12，19]。鞣質(zhì)類成分中的鞣花酸和柯里拉京可通過解除致癌物毒性、調(diào)節(jié)不同癌細胞的信號通路而發(fā)揮抗癌的藥理作用[20-21]。訶子中酚酸類成分——沒食子酸清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化的能力均遠高于維生素C[22];而莽草酸及其衍生物具有明顯的抗血栓和抑制血小板聚集作用[23]。阿魏酸是訶子中的苯丙酸類成分，可通過胞外信號調(diào)節(jié)激酶信號通路抑制炎癥因子表達，從而發(fā)揮抗炎的藥理作用[24]。牡荊素是中草藥中具生物活性的黃酮類化合物[25]，具有抗炎、保護神經(jīng)和抗低氧/缺血損傷的作用[26-27];木犀草素作為天然黃酮類化合物，具有抗菌[28]、保護神經(jīng)[29]、保護心臟[30]等作用，且可以通過抑制腫瘤細胞增殖、促進細胞凋亡等機制達到抗腫瘤的目的[31-32]。因此，本研究選擇鞣質(zhì)類（鞣花酸、柯里拉京）、酚酸類（沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、莽草酸）、黃酮類（牡荊素、木犀草素、槲皮素、蘆?。┖捅奖犷悾ò⑽核幔┕?1種成分的含量作為不同產(chǎn)地訶子質(zhì)量評價指標。

4.2 樣品提取條件的選擇

本研究前期對訶子提取方法（加熱回流法和超聲法）進行了考察，發(fā)現(xiàn)兩者并無太大區(qū)別，因此選擇了操作簡便、高效的超聲法進行樣品提取。訶子中大多數(shù)成分極性較大，且易溶于甲醇溶液中，因此本研究選擇甲醇為提取溶劑。同時，本研究對不同甲醇體積分數(shù)（50%、70%、80%、100%）、不同藥材與溶劑比（1 ∶ 50、? ?1 ∶ 80、1 ∶ 100，m/V）、不同提取時間（20、30、60 min）進行了單因素考察，最終確定了提取優(yōu)化條件為取0.25 g訶子粉末，加25 mL 70%甲醇，超聲提取30 min。

4.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本研究前期通過對離子化模式進行確認，發(fā)現(xiàn)沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京、莽草酸、阿魏酸、木犀草素、槲皮素、蘆丁10種目標成分在負離子模式下的響應(yīng)值優(yōu)于在正離子模式的響應(yīng)值，均失去1個質(zhì)子，形成[M-H]-準分子離子峰;而牡荊素則在正離子模式下響應(yīng)強度較高，即得到1個質(zhì)子，形成[M+H]+準分子離子峰。本研究以不同碰撞能量對11種成分母離子進行撞擊得到碎片離子，選取響應(yīng)強度最高的離子對進行定量分析，在此基礎(chǔ)上，通過電壓優(yōu)化確定了最終的碰撞能量和離子對。

4.4 色譜條件的優(yōu)化

在實驗過程中，本研究考察了不同流動相體系（0.1%甲酸溶液-甲醇、0.1%甲酸溶液-乙腈、甲醇-水、乙腈-水）、不同柱溫（30、35、40 ℃）、不同稀釋溶液（水和30%、50%、70%、100%甲醇）對色譜峰峰形及各色譜峰響應(yīng)值的影響。結(jié)果顯示，以0.1%甲酸溶液-甲醇作為流動相、柱溫為35 ℃，以70%甲醇溶液對樣品進行稀釋時，所得色譜峰的峰形尖銳、各成分響應(yīng)強度較高;同時，采用梯度洗脫后能夠使11種成分在10 min內(nèi)得到有效分離。

4.5 質(zhì)量評價結(jié)果分析

本研究結(jié)果顯示，H12號樣品中所含牡荊素、沒食子酸、沒食子酸乙酯、莽草酸和木犀草素5種成分的含量遠高于其他產(chǎn)地訶子，而沒食子酸甲酯、柯里拉京的含量遠低于其他產(chǎn)地訶子，表明H12號樣品與其他產(chǎn)地訶子的化學成分組成相似，但含量差異較大。本研究所收集到的16批訶子中，有1批經(jīng)鑒定為絨毛訶子（H12）。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市面上訶子的占比較絨毛訶子高，導致本研究中絨毛訶子的樣本量較少。因此，本研究選擇適用于小樣本量的GRA和TOPSIS法對16批訶子樣本進行分析排序，這2種分析方法可以定量得出11種成分含量的相對值，消除絨毛訶子中幾種含量差異顯著的成分帶來的主觀影響，從而能更加全面、客觀、公正地對比訶子與絨毛訶子的質(zhì)量優(yōu)劣。2種分析結(jié)果均表明，樣品H12（產(chǎn)地為云南）、H11（產(chǎn)地為廣西）、H5（產(chǎn)地為湖南）、H14（產(chǎn)地為廣東）、H13（產(chǎn)地為四川）、H8（產(chǎn)地為廣東）、H1（產(chǎn)地為云南）的綜合質(zhì)量較好。

綜上所述，本研究收集了不同產(chǎn)地的16批訶子，建立了HPLC-MS/MS法進行多指標成分的含量測定，并以11種成分含量為指標，采用化學計量學中的GRA和TOPSIS法比較了16批訶子的質(zhì)量優(yōu)劣。該方法可在一定程度上解決中藥質(zhì)量評價中多指標成分評價標準不統(tǒng)一的問題，從而能夠更全面、具體地研究訶子藥材的地域性差異。本研究所建立的方法高效快捷、準確可靠，可為訶子藥材的內(nèi)在質(zhì)量綜合評價和其優(yōu)質(zhì)種源的篩選提供一定參考依據(jù)。本課題組將繼續(xù)從絨毛訶子與訶子的藥理、藥效差異方面進一步展開研究。

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（收稿日期：2021-10-06 修回日期：2021-12-29）

（編輯：林 靜）

基金項目：內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計劃項目（No.2021GG0176）;內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學基金項目（No.2019MS08157）;內(nèi)蒙古自治區(qū)蒙醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心科學研究項目（No.MYYXTYB202108）

碩士研究生。研究方向：藥物分析。E-mail：jiuxin312@qq.com

通信作者：教授，碩士生導師。研究方向：中蒙藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。E-mail：whuanyun999@163.com