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    維生素C對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺非特異性免疫的影響

    2022-02-19 20:16:55米少輝尹欣茹李軍濤張澤龍冼健安王冬梅
    河北漁業(yè) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:維生素C

    米少輝 尹欣茹 李軍濤 張澤龍 冼健安 王冬梅

    摘要:為探究維生素C作為飼料添加劑短期投喂克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)對(duì)其肝胰腺非特異性免疫的影響,并尋找出最適的添加量,將規(guī)格相同(27g±3g)、健康無(wú)傷的克氏原螯蝦暫養(yǎng)7d后分5組,對(duì)照組投喂基礎(chǔ)飼料,4個(gè)試驗(yàn)組投喂的飼料為在基礎(chǔ)飼料中添加維生素C(添加量分別:0.1、0.2、0.4、0.8g/kg)。投喂5d后,取試驗(yàn)蝦肝胰腺進(jìn)行免疫相關(guān)酶活指標(biāo)的測(cè)定,結(jié)果顯示:添加0.2g/kg的維生素C可以顯著提升克氏原螯蝦肝胰腺中SOD、CAT、T-AOC等抗氧化酶的活性,對(duì)于免疫酶ACP、AKP的活力依然有顯著提升作用。并且對(duì)于肝胰腺中MDA的含量有降低作用(P<0.05)。0.4g/kg添加組,能夠顯著提升肝胰腺中CAT活力,并且顯著降低MDA含量(P<0.05)。由此可以得出在飼料中添加0.2~0.4g/kg維生素C可以在一定程度上提升克氏原螯蝦肝胰腺的非特異性免疫。

    關(guān)鍵詞:維生素C;克氏原螯蝦;非特異性免疫

    目前,維生素C作為飼料添加劑[1],在魚[2-4]、蝦[5-6]、海參[7]、中華鱉[8]均有所研究,在飼料中適當(dāng)比例的添加維生素C投喂,均已證明適量添加維生素C可以增加水生生物的非特異性免疫以及抗應(yīng)激能力。但是發(fā)現(xiàn)其共同特點(diǎn)是均投喂30d以上,投喂時(shí)間較長(zhǎng)。添加維生素C飼料短期投喂水生生物,對(duì)其非特異性免疫影響的研究較少。因此本試驗(yàn)旨在探究飼料中添加不同水平的維生素C,投喂5d,對(duì)克氏原螯蝦非特異性免疫的影響,進(jìn)而使維生素C能更大限度地發(fā)揮作用,得以應(yīng)用。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)用的克氏原螯蝦(平均體重27.0g±3.0g)來(lái)源為海南歸耕田農(nóng)業(yè)科技有限公司。試驗(yàn)用水族箱大小為60cm×43cm×36cm。試驗(yàn)用維生素C由??谒{(lán)海中漁生物科技有限公司提供。

    1.2試驗(yàn)飼料

    試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼料為蝦料專用配合飼料(粗蛋白≥28.0%,粗脂肪≥3.0%,粗纖維≤10.0%,粗灰分≤18.0,0.6%≤總磷≤1.4%,鈣0.5~5.0,水分≤12.5%)。試驗(yàn)組飼料為在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.1、0.2、0.4、0.8g/kg的維生素C。

    1.3試驗(yàn)儀器

    超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒、微量丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒、總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)定試劑盒、過(guò)氧化氫酶(CAT)測(cè)定試劑盒、酸性磷酸酶(ACP)測(cè)定試劑盒、堿性磷酸酶(AKP)測(cè)定試劑盒、蛋白定量(TP)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程有限公司。生理鹽水(已提前配制)。

    臺(tái)式高速冷凍微量離心機(jī)、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、可見紫外分光光度計(jì)、數(shù)顯恒溫水浴鍋、多樣品組織研磨機(jī)、電子天平、2.5mL無(wú)菌注射器、1mL無(wú)菌注射器(江西三鑫醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn))、1.5mLAxygen離心管、高壓滅菌鍋、增氧機(jī)、移液槍等。

    1.4飼養(yǎng)管理

    將購(gòu)買的克氏原螯蝦在大小為60cm×43cm×36cm,水深15cm的水族箱暫養(yǎng)7d后,挑選健康強(qiáng)壯、規(guī)格一致的克氏原螯蝦,共分為5組(編號(hào)A—E),每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)在試驗(yàn)箱中養(yǎng)殖克氏原螯蝦15尾。A組為對(duì)照組,投喂基礎(chǔ)飼料,各試驗(yàn)組飼料中維生素C添加量分別為:B組0.1g/kg,C組0.2g/kg,D組0.4g/kg,E組0.8g/kg。養(yǎng)殖期間水溫為23~26℃。在水族箱中增加適量的遮蔽物,防止試驗(yàn)期間成蝦自相殘殺。試驗(yàn)用水為曝氣的自來(lái)水,水體pH值控制在7.5左右。養(yǎng)殖期間均充氣養(yǎng)殖,除投喂飼料有區(qū)別外,其他變量保持一致。每天早晚投喂兩次且以晚上投喂量為主,投喂量為成蝦體重的3%~5%,各組間投喂量保持一致,具體以實(shí)際吃食情況為準(zhǔn)。暫養(yǎng)結(jié)束后開始投喂試驗(yàn),在投喂5d后,在3個(gè)平行的箱子各取3尾克氏原螯蝦,取其肝胰腺進(jìn)行酶活等生理生化指標(biāo)檢測(cè)。

    1.5樣品的采集與制備

    解剖螯蝦,取適量肝胰腺,用0.85%氯化鈉生理鹽水清洗去除污物,用濾紙吸干水分后置于離心管中放入液氮快速冷凍,然后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存,備用。

    1.6相關(guān)免疫酶活性指標(biāo)測(cè)定

    超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、丙二醛含量(MDA)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)按照試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

    1.7數(shù)據(jù)分析

    用Excel2019求得試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值以及標(biāo)準(zhǔn)差,利用軟件SPSSStatistics18.0進(jìn)行單因素方差分析(one-wayANOVA)和Duncan多重比較,試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SD)表示,(P<0.05)為差異性顯著。

    2結(jié)果與分析

    2.1飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺SOD活力的影響

    隨著飼料中維生素C添加量的增加,克氏原螯蝦肝胰腺中SOD活力呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì),其中在飼料中添加0.2g/kg維生素C能夠顯著增強(qiáng)克氏原螯蝦肝胰腺SOD活力(P<0.05),其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖1。

    柱上標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05),相同字母表示差異不顯著(P>0.05),下同。

    2.2飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺M(fèi)DA含量的影響

    隨著飼料中維生素C添加量的增加,克氏原螯蝦肝胰腺中MDA含量呈現(xiàn)出先降低后升高的趨勢(shì),其中在飼料中添加0.2、0.4g/kg維生素C能夠顯著降低克氏原螯蝦肝胰腺中MDA的含量(P<0.05),其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖2。

    2.3飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺CAT活力的影響

    隨著飼料中維生素C添加量的增加,克氏原螯蝦肝胰腺中CAT活力呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì),其中在飼料中添加0.2、0.4g/kg維生素C能夠顯著增強(qiáng)克氏原螯蝦肝胰腺CAT活力(P<0.05)。0.2g/kg添加組肝胰腺CAT活力最高,顯著高于其他試驗(yàn)組和對(duì)照組(P<0.05)。除0.2、0.4g/kg添加量外,其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖3。

    2.4飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺AKP活力的影響

    隨著飼料中維生素C添加量的增加,克氏原螯蝦肝胰腺中AKP活力變化趨勢(shì)為隨著維生素C添加量的增加,AKP活力先升高后降低,當(dāng)在飼料中添加0.2g/kg維生素C時(shí),肝胰腺中的AKP活力最高,并且顯著高于對(duì)照組,可見,在飼料中添加0.2g/kg維生素C能夠顯著增強(qiáng)克氏原螯蝦肝胰腺AKP活力(P<0.05)。除0.2g/kg添加組外,其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖4。

    2.5飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺ACP活力的影響

    隨著飼料中維生素C添加量的增加,克氏原螯蝦肝胰腺中ACP活力變化趨勢(shì)為隨著維生素C添加量的增加,ACP活力先升高后降低,當(dāng)在飼料中添加0.2g/kg維生素C時(shí),肝胰腺中的ACP活力最高,并且顯著高于對(duì)照組,可見,在飼料中添加0.2g/kg維生素C能夠顯著增強(qiáng)克氏原螯蝦肝胰腺ACP活力(P<0.05)。除0.2g/kg添加組外,其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖5。

    2.6飼料中維生素C添加量對(duì)克氏原螯蝦肝胰腺T-AOC變化的影響

    克氏原螯蝦肝胰腺中的總抗氧化能力,隨著飼料中維生素C添加量的增加,呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì),其中肝胰腺T-AOC在維生素C添加量為0.2g/kg時(shí)最優(yōu),當(dāng)在飼料中添加0.2g/kg維生素C時(shí),肝胰腺中的T-AOC顯著高于對(duì)照組,可見,在飼料中添加0.2g/kg維生素C能夠顯著增強(qiáng)克氏原螯蝦肝胰腺T-AOC(P<0.05)。除0.2g/kg添加組外,其他各維生素C添加組與對(duì)照組相比均不存在明顯差異(P>0.05)。見圖6。

    3討論

    SOD和CAT是生物體內(nèi)抗氧化指標(biāo)的指示酶,在機(jī)體內(nèi)主要參與機(jī)體內(nèi)自由基的清除,從而維持機(jī)體內(nèi)自由基的動(dòng)態(tài)平衡[9]。MDA是自由基引起脂質(zhì)過(guò)氧化所產(chǎn)生的產(chǎn)物,其含量的高低可以間接反應(yīng)機(jī)體自由基的含量以及脂質(zhì)的過(guò)氧化程度[10]。T-AOC反應(yīng)抗氧化系統(tǒng)整體水平,主要抑制過(guò)氧化鏈產(chǎn)生,達(dá)到消除自由基的效應(yīng)[11]。AKP和ACP是生物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶,主要參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝,在免疫系統(tǒng)中也發(fā)揮著重要作用,同樣可以間接反應(yīng)機(jī)體的免疫能力[12]。另外,甲殼動(dòng)物氧化代謝的主要場(chǎng)所為肝胰腺而非血清[13],所以本試驗(yàn)主要研究維生素C添加對(duì)肝胰腺中免疫指標(biāo)的影響。

    有研究表明維生素作為飼料添加劑的應(yīng)用具有增強(qiáng)蝦類免疫力以及抗氧化能力的重要作用,并降低機(jī)體的應(yīng)激性,增加對(duì)外界環(huán)境因子劇烈變化的抵抗能力[14]。王偉慶等[15]研究發(fā)現(xiàn),在中國(guó)對(duì)蝦的飼料中添加適量的維生素C衍生物維生素C多聚磷酸酯(LAPP),能夠提高其抵抗副溶血弧菌的能力,提高其機(jī)體的免疫性能。另外,LAPP的添加提高了中國(guó)對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬金黃色葡萄球菌的能力,表明其對(duì)細(xì)菌感染的抗病性得到提高。宋理平等[16]的研究表明,維生素C能夠增加中國(guó)明對(duì)蝦(Penaeuschinensis)幼體的免疫力。維生素C和β-葡聚糖協(xié)同使用,使對(duì)蝦幼體對(duì)于哈維氏弧菌的抵抗力增強(qiáng),同時(shí)增強(qiáng)了免疫酶的活性以及提高了免疫保護(hù)率。王文婧等[17]研究發(fā)現(xiàn),大劑量投喂維生素C能夠提高凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)肝胰腺溶菌酶(LZM)和酸性磷酸酶(ACP)的活性,對(duì)于輕度擁擠脅迫造成的凡納濱對(duì)蝦免疫機(jī)能的變化有一定的緩沖作用,但是不能消除脅迫對(duì)其所造成的影響。Kong等[18]研究發(fā)現(xiàn),在克氏原螯蝦日糧中添加250.12mg/kg和321.38mg/kgVc均能提升克氏原螯蝦的非特異性免疫。上述研究與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。

    4結(jié)論

    在本試驗(yàn)中,添加0.2g/kg的維生素C可以顯著提升克氏原螯蝦肝胰腺中SOD、CAT、T-AOC等抗氧化酶的活性,對(duì)于免疫酶ACP、AKP的活力有顯著提升作用,并且對(duì)于肝胰腺中MDA的含量有降低作用。0.4g/kg添加組,能夠顯著提升肝胰腺中CAT活力,并且顯著降低MDA含量。由此可以得出,在飼料中添加0.2~0.4g/kg維生素C可以在一定程度上提升克氏原螯蝦肝胰腺的非特異性免疫。

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    (收稿日期:2021-09-30;修回日期:2021-12-16)

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