青羊參飲片的薄層色譜鑒別方法及浸出物限度標(biāo)準(zhǔn)*

楊德泉，佘永紅，吉林芳，丁 野

(1.湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 吉首 416000；2.湖南省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410001)

青羊參始載于《植物名實(shí)圖考》[1]，為蘿藦科植物青羊參(CynanchumotophyllumSchneid.)的干燥根，含有青羊參苷元、青羊參苷甲、青羊參苷乙、本波苷元等成分[2-3]，臨床上用于治療癲癇、抑郁、子宮肌瘤、腰痛、結(jié)核等病癥[4-6].《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(2009年版)》收載名稱為“青陽(yáng)參”[7]，《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范(2010年版)》收載飲片名稱為“青陽(yáng)參”[8]，飲片標(biāo)準(zhǔn)中以成品性狀、顯微鑒別、理化反應(yīng)等為主要質(zhì)量控制項(xiàng)目.青羊參與同屬植物隔山消(C.wilfordii(Maxim.) Hemsl.)、昆明杯冠藤(C.wallichiiWight)外觀相近，常易混淆[9].為進(jìn)一步完善青羊參飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究對(duì)青羊參飲片的性狀、薄層色譜、浸出物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)研究，為制訂青羊參飲片標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù).

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

KM5200DE型超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)，AUW220D電子天平(日本島津公司)，GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上海科哲生化科技有限公司)，硅膠G薄層色譜板(Merck公司1.05626.0001，10 cm×20 cm).試劑均為分析純，水為純化水.

1.2 對(duì)照品與樣品

青羊參對(duì)照藥材購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)：660012-201501).15批青羊參飲片樣品來(lái)源于5家中藥飲片生產(chǎn)單位，具體見(jiàn)表1.

表1 青羊參飲片來(lái)源表

2 方法與結(jié)果

2.1 成品性狀

青羊參飲片的成品為類圓形或不規(guī)則形厚片.其外表皮呈黃褐色至棕褐色，有橫皺紋及橫長(zhǎng)皮孔，表皮脫落處呈黃褐色.成品質(zhì)硬，易折斷，折斷時(shí)有粉塵，折斷面呈類白色，可見(jiàn)淡黃色點(diǎn)狀突起(導(dǎo)管)，排列成不連續(xù)的環(huán)(圖1).成品氣辛香，味苦.

圖1 青羊參飲片F(xiàn)ig. 1 Decoction Pieces of Cynanchum otophyllum

2.2 薄層色譜鑒別

分別稱取15個(gè)青羊參飲片樣品粉末各0.8 g，加入40 mL乙酸乙酯，超聲處理30 min后過(guò)濾，濾液蒸干，在殘?jiān)屑尤? mL甲醇使其溶解，將溶解后溶液作為供試品溶液.另取青羊參對(duì)照藥材0.8 g，按照供試品溶液的方法配制對(duì)照藥材溶液.按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典(2020年版)》四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙醚-乙酸丁酯-冰醋酸(體積比20∶6∶3∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外燈光(365 nm)下檢視.

試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，15批供試品色譜與對(duì)照品藥材色譜在相應(yīng)的位置上均呈現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn).青羊參供試品溶液和對(duì)照藥材溶液的薄層色譜熒光斑點(diǎn)清楚，色譜一致，說(shuō)明此薄層色譜鑒別方法可用于青羊參飲片的鑒別.

Q1～Q15—青羊參飲片；S—青羊參對(duì)照藥材.圖2 青羊參飲片薄層色譜Fig. 2 Thin Layer Chromatography of Cynanchum otophyllum

2.3 浸出物測(cè)定

按《中國(guó)藥典》2020年四部通則(2201)中水溶性浸出物測(cè)定方法下的冷浸法[10]測(cè)定15批青羊參飲片的浸出物，浸出物見(jiàn)表2.15批青羊參飲片浸出物中，最低值為15.55%，最高值為22.96%，平均值為18.64%，中位值為22.41%.按平均值的80%計(jì)算浸出物的最低限度為14.91%，故建議青羊參飲片的浸出物限度定為“不得少于15.0%”.

表2 15批青羊參飲片浸出物測(cè)定數(shù)據(jù)

3 討論

3.1 青羊參飲片薄層色譜鑒別方法的選擇

青羊參經(jīng)加工為飲片后，外觀性狀有了很大的改變，因此，薄層色譜鑒別方法顯得尤為重要.已有學(xué)者對(duì)薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了研究，比如劉云懷等[11]采用正己烷—乙酸乙酯(體積比1∶3)作為展開(kāi)劑，青羊參苷元為對(duì)照品的薄層色譜方法鑒別了青羊參藥材；《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(2005年版第四冊(cè)彝族藥)[12]青羊參項(xiàng)下的薄層色譜鑒別方法是以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(體積比5∶1∶0.5)作為展開(kāi)劑，以青羊參對(duì)照藥材為對(duì)照.采用這兩種方法制備供試品溶液，前者需回流3 h，后者需回流1 h并進(jìn)行兩次萃取，兩種方法均需要較長(zhǎng)時(shí)間.本研究采用環(huán)己烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(體積比20∶6∶3∶0.2)作為展開(kāi)劑，青羊參對(duì)照藥材為對(duì)照，青羊參飲片粉末加乙酸乙酯，超聲處理30 min后過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解制備供試品溶液，供試品溶液制備過(guò)程時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便.本研究結(jié)果顯示，青羊參對(duì)照藥材溶液和供試品溶液的薄層色譜熒光斑點(diǎn)清楚，色譜一致，說(shuō)明此薄層色譜鑒別方法可靠，可作為青羊參飲片的鑒別方法.

3.2 青羊參飲片浸出物測(cè)定方法及限度的確定

青羊參飲片較少用在中成藥制劑中，主要在中醫(yī)臨床中配伍使用[4].本研究在浸出物考察試驗(yàn)中，選擇水為溶劑，使浸出物指標(biāo)能更全面反映出青羊參飲片在湯劑中的溶出率.因青羊參飲片富含淀粉粒，本研究比較了水溶性浸出物的兩種測(cè)定方法，分別是熱浸法和冷浸法.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，熱浸法樣品在經(jīng)過(guò)水回流1 h后，呈粥樣狀態(tài)，不能過(guò)濾，經(jīng)離心處理后，仍不能過(guò)濾；而冷浸法樣品經(jīng)水冷浸24 h后，能夠正常過(guò)濾，故選擇冷浸法作為青羊參飲片浸出物的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法.本研究根據(jù)15批青羊參樣品浸出物測(cè)定結(jié)果計(jì)算獲得浸出物的最低限度值，建議青羊參飲片標(biāo)準(zhǔn)的浸出物檢查限度設(shè)置為“不得少于15.0%”.

4 結(jié)論

青羊參飲片的質(zhì)量是其臨床療效的重要保證.本研究建立的青羊參飲片薄層色譜鑒別方法，以及提出的青羊參飲片水溶性浸出物檢查限度建議，為制訂青羊參飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考.