李珍珍
(河南省永城市人民醫(yī)院腫瘤科 永城 476600)
老年高血壓非小細胞肺癌(NSCLC)在肺癌中的發(fā)生率約占80%以上[1]。近年來醫(yī)療水平的發(fā)展使得NSCLC 的治療效果有很大的改進,但其5 年存活率仍未見明顯提高[2]。高血壓是老年肺癌患者常見合并癥,可增加患者治療難度[3]。微小RNA-761(microRNA-761,miR-761)在細胞穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用,可通過靶向調控線粒體融合和分裂維持細胞穩(wěn)態(tài)[4]?;|金屬蛋白酶組織抑制因子-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2,TIMP-2)是蛋白酶活性的抑制因子[5]。Yan 等[6]研究中首次發(fā)現(xiàn)miR-761、TIMP-2 與NSCLC 有關,但其在高血壓NSCLC 預后中的作用和潛在機制尚不清楚。本研究旨在探討miR-761、TIMP-2 表達水平與高血壓 NSCLC 臨床病理特征及預后的關系。現(xiàn)報道如下:
1.1 研究對象 以2015 年6 月至2016 年 7 月我院收治的89 例高血壓NSCLC 患者癌組織為高血壓肺癌組,其中男 47 例、女 42 例,年齡 60~87 歲、平均(71.57±10.33)歲。取其癌旁組織作為癌旁對照組。同期選取87 例單純NSCLC 患者的癌組織作為肺癌組,其中男 46 例、女 41 例,年齡 60~87 歲、平均(72.42±10.26)歲,與高血壓肺癌組一般資料比較無顯著性差異(P>0.05)。納入標準:NSCLC 符合診療規(guī)范[7],并經(jīng)病理學證實;按照醫(yī)囑正規(guī)治療;知情同意書;無治療史;首次確診。排除標準:合并感染者;失訪者;臨床資料不完整者;繼發(fā)性NSCLC 者;腦血管疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(編號:2014-07-158)。
1.2 研究方法
1.2.1 癌組織miR-761 表達水平測定 采用RNA提取試劑盒(貨號:JL1545,QIAGEN 公司)從癌組織中抽提總RNA,反轉錄試劑盒(貨號:FSQ-301,上海研卉生物公司)得到cDNA,然后利用SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(貨號:DRR041A,Takara 公司)配制反應體系,在CFX384 定量分析上擴增miR-761 及其內參U6。引物由上海生工生物公司設計并合成,見表1。采用 2-△△Ct法計算 miR-761 相對表達量。
表1 qRT-PCR 引物序列
1.2.2 癌組織TIMP-2 蛋白表達的測定 取新鮮組織,10%甲醛固定標本后,對組織標本進行切片,采用免疫組織化學法檢測組織TIMP-2 蛋白表達水平,按照SP 試劑盒(貨號:CDLG-4851,武漢純度生物公司)說明書操作,用PBS 代替一抗作為陰性對照,TIMP-2 抗體(貨號:ATA38720,武漢益普生物公司)。以胞漿內出現(xiàn)棕黃色或棕褐色定義為陽性細胞。兩種計分乘積:≤2 分為低表達,≥2 分為高表達。見表2。
表2 計分標準(分)
1.3 隨訪 高血壓NSCLC 患者術后以電話或門診方式隨訪5 年,生存期從手術之日起計算,截至2021 年 7 月。
1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS22.0 處理數(shù)據(jù),計量資料用()表示,行t檢驗;計數(shù)資料用%表示,行χ2檢驗;Kaplan-Meier 分析 miR-761、TIMP-2 水平與預后的關系;多因素COX 回歸分析高血壓NSCLC 預后的影響因素。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
2.1 三組miR-761、TIMP-2 表達水平比較 高血壓肺癌組miR-761 表達水平分別高于肺癌組、癌旁對照組 (t=8.386、19.557,P=0.000、0.000),肺癌組miR-761 表達水平高于癌旁對照組(t=17.090,P=0.000)。高血壓肺癌組與肺癌組TIMP-2 高表達率比較,差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.835,P=0.176),癌旁對照組TIMP-2 高表達率分別高于肺癌組、高血壓肺癌組(χ2=5.798、14.052,P=0.016、0.000)。見表 3、圖 1。
表3 三組 miR-761、TIMP-2 表達水平比較()
表3 三組 miR-761、TIMP-2 表達水平比較()
注:與癌旁對照組比較,*P<0.05;與肺癌組比較,#P<0.05。
組別 n miR-761 TIMP-2[例(%)]癌旁對照組肺癌組高血壓肺癌組89 87 89 1.02±0.27 1.81±0.34*2.46±0.64*#56(62.92)39(44.83)*31(34.83)*
圖1 高血壓肺癌組(左)、肺癌組(中)與癌旁對照組(右)中TIMP-2蛋白表達(×400)
2.2 癌組織miR-761、TIMP-2 表達與臨床病理特征的關系 以miR-761 表達水平平均值(2.46)為界,將患者分為miR-761 高表達組45 例,miR-761低表達組44 例。miR-761 高表達組、TIMP-2 低表達組腫瘤≥3.0 cm、有淋巴結轉移、組織低分化、TNMⅢ-Ⅳ期患者比例高于miR-761 低表達組、TIMP-2高表達組(P<0.05)。見表4。
表4 癌組織miR-761、TIMP-2 表達與臨床病理特征的關系[例(%)]
2.3 癌組織miR-761、TIMP-2 表達水平與高血壓NSCLC 預后的關系 miR-761 高表達者5 年生存率(31.11%) 低于 miR-761 低表達者(59.09%)(χ2=7.039,P<0.05)。 TIMP-2 高 表 達 者 5 年 生 存 率(64.52%)高于TIMP-2 低表達者(34.48%)(χ2=7.364,P<0.05)。見圖 2 至圖 3。
圖2 癌組織miR-761 表達水平與預后的關系
圖3 癌組織TIMP-2 表達水平與預后的關系
2.4 高血壓NSCLC 預后的影響因素分析 以組織分化程度、腫瘤大小、miR-761、TNM 分期、淋巴結轉移、TIMP-2 為自變量,將是否死亡作為因變量,COX回歸顯示,miR-761、TIMP-2 是高血壓 NSCLC 患者預后的影響因素(P<0.05)。見表5。
表5 高血壓NSCLC 預后的影響因素分析
NSCLC 是肺癌最常見的組織類型,其發(fā)病率和死亡率逐年上升[8]。大多數(shù)NSCLC 患者早期癥狀不典型,多數(shù)患者就診時已屬晚期,且老年患者常合并高血壓等并發(fā)癥,使其治療較為困難,造成患者生存率很低[9]。目前隨著研究的進一步深入,miRNA 或某些特定基因的檢測有利于精確地預測肺癌患者的預后[10]。因此,探究高血壓NSCLC 發(fā)病相關因子及其分子生物學特點對疾病的診治可能有重要意義。
研究表明,miR-761 可通過作用靶點干擾腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲等功能[11]。不同腫瘤中miR-761發(fā)揮的作用亦不同,在乳腺癌、肝癌等腫瘤中miR-761 可作為原癌基因促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展,在結直腸癌等腫瘤中miR-761 可發(fā)揮抑癌基因的功能[12]。本研究結果中,miR-761 在高血壓NSCLC 患者癌組織中高表達,與Zhang 等[13]研究中miR-761 的趨勢基本一致;且與腫瘤大小、組織分化程度、淋巴結轉移、TNM 分期等臨床病理參數(shù)有一定的關系。這說明miR-761 可能通過靶向作用其下游因子,影響腫瘤的侵襲和遷移,進而參與高血壓NSCLC 的病情進展。此外,本研究中miR-761 高表達高血壓NSCLC 患者五年生存率(31.11%)低于miR-761 低表達患者(59.09%),且miR-761 是影響患者預后的獨立危險因素。進一步提示miR-761 高表達不利于患者預后,其高表達后可能影響腫瘤細胞的轉移,加速患者病情進展,縮短其生存期。
TIMP-2 是基質金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)抑制因子的一種,可激活MMP,同時又能與激活后的MMP 結合,參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[14]。研究表明,TIMP-2 在 NSCLC 患者血清中呈明顯低表達[15]。本研究結果顯示,與高血壓NSCLC 患者癌旁組織及單純NSCLC 患者癌組織相比,高血壓NSCLC 患者癌組織TIMP-2 表達水平降低,與黃茜等[16]及He 等[17]研究結果相似;且TIMP-2 低表達患者腫瘤≥3.0 cm、有淋巴結轉移、組織低分化、TNM Ⅲ-Ⅳ期患者比例高于TIMP-2 高表達患者。提示NSCLC 患者TIMP-2 低表達,而合并高血壓會進一步降低TIMP-2 的表達量,TIMP-2有望作為淋巴結轉移、組織分化等及腫瘤轉移程度的參考指標。此外,本研究中TIMP-2 低表達患者預后較差,其可能是通過影響MMP 的激活和表達,而MMP 可通過調節(jié)腫瘤血管新生等,參與腫瘤的侵襲和遷移,影響患者預后。
綜上所述,癌組織miR-761、TIMP-2 表達與高血壓NSCLC 的進展、預后可能有密切聯(lián)系,為臨床治療提供新的研究思路,同時對提高高血壓NSCLC的診療效果有重要意義。然而本研究作為回顧性研究,樣本受區(qū)域限制且數(shù)量有限,miR-761、TIMP-2間的具體作用機制仍需通過動物及細胞試驗驗證,有待今后納入更多樣本進一步深入探究。