改良型自體富血小板纖維蛋白聯合重組類人膠原蛋白面膜對女性面部皮膚光老化的修復效果研究▲

陳富祿 唐欷柯 彭智鵬 唐 超 粟本義 黎洪棉 韋 俊

(1 昭平縣人民醫(yī)院外科，廣西昭平縣 546800；2 南寧市第四人民醫(yī)院皮膚科，廣西南寧市 530023；3 南寧夢想整形美容醫(yī)院，廣西南寧市 530021；4 廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院整形美容外科，廣西南寧市 530021；5 廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西南寧市 530021)

隨著年齡增長，人體皮膚逐漸變薄并失去彈性和張力，易出現皺紋、松弛及干燥等老化現象。補充外源性膠原蛋白或促進內源性膠原蛋白生成是改善皮膚光老化的關鍵，在此基礎上增強局部血管化、改善血運可達到改善皮膚老化、促進面部年輕化的目的。改良型自體富血小板纖維蛋白(advanced platelet-rich fibrin，A-PRF)是在傳統(tǒng)富血小板纖維蛋白基礎上進行改良優(yōu)化的血小板濃縮物，其含有大量的血小板，激活后可釋放血管內皮生長因子、轉化生長因子-β、堿性成纖維細胞生長因子等因子，這些生長因子具有促進創(chuàng)面愈合、刺激血管生成、促進細胞增殖和遷移等功能[1-3]。重組類人膠原蛋白是一種應用基因工程技術將膠原蛋白的mRNA逆轉錄為cDNA，然后經酶切修飾后重組，再經過高密度發(fā)酵、分離、純化等工藝生產得到的新型膠原蛋白[4-7]，含有高純度、高濃度類人膠原蛋白的面膜具有極好的屏障修復能力和保濕性能，可更有效地幫助肌膚鎖住水分，補充膠原蛋白，目前已在臨床上得到廣泛應用。本研究探討A-PRF聯合重組類人膠原蛋白面膜對女性面部光老化皮膚的修復作用?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2022年1月在南寧市第四人民醫(yī)院皮膚科及南寧夢想整形美容醫(yī)院進行美容咨詢并確診為面部皮膚光老化的80例女性患者作為研究對象，通過抽簽法將其分為對照組和治療組，每組40例。皮膚光老化診斷標準：由于皮膚光老化的臨床表現呈多樣化和細微化，目前尚未形成統(tǒng)一的診斷標準，本研究主要是根據臨床表現進行診斷，即面部暴露部位出現皮膚松弛、深淺皺紋、皮膚粗糙、皮革樣外觀、色素沉著斑或色素脫失斑、紫癜、毛細血管擴張、外觀明顯改變或消失、膚色常呈灰黃等。納入標準：Fitzpatrick皮膚分型為Ⅲ～Ⅳ型；排除標準：合并感染、腫瘤、肝病、代謝及免疫等相關疾病的患者。對照組年齡24～60(38.00±8.49)歲，皮膚分型：Ⅲ型31例，Ⅳ型9例；治療組年齡24～60(38.00±9.62)歲，皮膚分型：Ⅲ型33例，Ⅳ型7例。兩組患者的年齡和皮膚分型比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，具有可比性。本研究經過南寧市第四人民醫(yī)院醫(yī)學倫理審查委員會批準，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器和材料 VISIA皮膚圖像分析儀由美國Can field科技公司生產(型號：Canfield Visia, Visia-CR, Reveal)；SOFT 5.5皮膚性質測試儀由意大利Allegation科技公司生產。重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)由西安巨子生物基因技術股份有限公司生產。

1.2.2 自體APRF的制備[8-9]無菌條件下抽取患者靜脈血20 mL至真空負壓管中，立即以1 500 r/min離心14 min。離心后全血可分為3層，最底層為紅細胞，上層為血漿，中間層即為富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)。用無菌長鑷取出中間層半固態(tài)狀的蛋白膠，剪去其下段紅細胞部分即可獲得PRF蛋白凝膠。將獲得的PRF蛋白凝膠放入另一支10 mL離心管中，4 ℃條件下靜置5 d后，PRF蛋白凝膠會持續(xù)釋放出含多種細胞因子的液態(tài)A-PRF，用無菌注射器抽吸A-PRF，收集后備用。

1.2.3 治療方法 (1)治療組用電動微針將5 mL A-PRF原液一次性導入面部皮膚光老化部位的真皮內，然后用重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)外敷，1次/d，連續(xù)使用1周。(2)對照組單純使用重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)外敷，1次/d，連續(xù)使用1周。

1.3 觀察指標 分別于治療前、治療后1周及1個月，同時采用VISIA皮膚圖像分析儀和SOFT 5.5皮膚性質測試儀對兩組患者的皮膚性質進行定量分析和評價。定量分析和評價方法如下：治療前后均由同一名醫(yī)生和同一名護士采用同一相機、在同一光源下、以同一角度對面部區(qū)域進行攝影并存檔；測試條件為室溫24 ℃，濕度40%～50%；患者在測試前30 min進入測試環(huán)境中安靜待測。(1)SOFT 5.5皮膚性質檢測儀主要檢測皮膚的pH值、水分、彈性和油脂分泌情況。將檢測儀的探頭垂直置于皮膚上5～10 s，待測定值穩(wěn)定后讀取數值，取5次測定的平均值計算，皮膚pH值為5.0～7.0說明不易衰老，水分和彈性的SOFT 5.5數值越大提示光老化程度越輕，油脂的SOFT 5.5數值越大提示光老化程度越嚴重。(2)VISIA皮膚圖像分析儀主要檢測皮膚色素斑、皺紋、紋理和毛孔情況。首先清潔面部，15 min后用VISIA皮膚圖像分析儀拍攝患者面部圖像，分析區(qū)域盡量避免反光區(qū)域和頭發(fā)干擾，所有皮膚檢測均由同一醫(yī)生操作。測定時VISIA皮膚圖像分析儀自動生成VISIA 絕對分值，皮膚色素斑、皺紋、紋理、毛孔的VISIA值越大，提示皮膚衰老越嚴重。(3)不良反應：觀察治療后1周至1個月的不良反應發(fā)生情況，包括紅腫、過敏、發(fā)熱。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行數據分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差(x±s)表示，組內治療前后比較采用配對t檢驗，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組治療后的表現 兩組患者治療后1周及1個月，面部皮膚狀態(tài)均獲得不同程度的改善，其中治療組患者皮膚的皺紋、紋理、毛孔、水分、彈性和油脂方面的改善明顯優(yōu)于對照組，表現為細膩度及光澤度明顯增加、細紋減少，主觀感受皮膚滋潤并有飽滿感和彈性等。兩組患者在觀察期間均無不良反應發(fā)生。典型案例見圖1。

圖1 典型案例

2.2 兩組VISIA絕對分值比較 治療前，兩組患者的皮膚紋理、毛孔、色素斑、皺紋的VISIA絕對分值比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。治療組患者治療后1周及1個月的紋理VISIA絕對分值低于治療前且低于對照組，對照組患者治療后1個月的紋理VISIA絕對分值低于治療前(均P<0.05)，但治療后1周的紋理VISIA絕對分值與治療前差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；兩組治療后1周及1個月的毛孔VISIA絕對分值均低于治療前，且治療組患者治療后1個月的毛孔VISIA絕對分值低于對照組(均P<0.05)；兩組患者治療后1周及1個月的色素斑VISIA絕對分值與治療前比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，治療組與對照組間的差異亦無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；治療組患者治療后1周及1個月的皺紋VISIA絕對分值均低于治療前且低于對照組，對照組患者治療后1個月紋理VISIA的絕對分值低于治療前(均P<0.05)，但治療后1周的絕對分值與治療前差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者各項指標的VISIA絕對分值比較 (x±s)

2.3 兩組SOFT 5.5數值比較 治療前，兩組患者的皮膚pH值，水分、彈性和油脂的SOFT 5.5數值比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。治療后1周及1個月，治療組患者的皮膚pH值，水分、彈性的SOFT 5.5數值均高于治療前且高于對照組，油脂的SOFT 5.5數值均低于治療前且低于對照組(均P<0.05)；而對照組患者治療后1周和1個月的皮膚pH值，水分、彈性的SOFT 5.5數值，以及治療后1周油脂的SOFT 5.5數值與治療前比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；治療后1個月，對照組患者油脂的SOFT 5.5數值低于治療前(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者各項指標的SOFT 5.5數值比較 (x±s)

3 討 論

隨著年齡增長，皮膚中的成纖維細胞合成能力降低，導致膠原蛋白含量減少和結構改變，使皮膚變薄并失去彈性和張力，還可導致皮下脂肪減少、真皮纖維斷裂、汗腺及皮脂腺分泌減少，從而出現皺紋、松弛及干燥等老化現象。為老化的皮膚補充膠原蛋白是抗衰老的關鍵，這是因為膠原蛋白進入皮膚后可引導上皮細胞遷移至缺損區(qū)，使上皮細胞產生趨化因子如血小板生長因子、纖維連接蛋白等，促進自身成纖維細胞合成膠原和其他細胞外間質成分，從而達到改善皮膚老化的目的[10]。類人膠原蛋白是人工合成且與天然膠原蛋白極其相似的高分子材料，其具有良好的組織相容性和易被吸收等優(yōu)點，被廣泛應用于抗皮膚老化中，目的是迅速補充皮膚組織流失的膠原蛋白，修復斷裂的纖維框架，改善皮膚皺紋，恢復皮膚彈性[11]。類人膠原蛋白的微針導入療法是目前臨床上應用最廣泛的抗皮膚老化療法之一。類人膠原蛋白面膜雖然是一種無創(chuàng)方法且不需要專業(yè)技術人員操作，但目前關于這種大分子材料能否透過表皮吸收仍存在爭議，多數學者認為其不能透過表皮被吸收，但Pan等[12]的研究結果顯示，類人膠原蛋白的透皮吸收度較好，且加入某些促滲劑還可提高其透皮吸收率。路雪艷等[13-14]也報道類人膠原蛋白敷料有改善皮膚屏障功能、減輕皮損的作用。

PRF屬于新一代血小板濃縮物，與第一代富血小板血漿相比，其具有制備簡單等優(yōu)點[15]。PRF含有大量的血小板，可釋放堿性成纖維細胞生長因子、轉化生長因子-β、血小板源性生長因子、血管內皮生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、白細胞介素-6等多種細胞因子，這些細胞因子可以促進骨形成、血管生成，以及細胞遷移、增殖和分化等生物學功能[16-18]。PRF的顯微結構與人類天然纖維蛋白的結構相似，由纖維蛋白排列成疏松的三維立體網絡結構，并聚集了大量血小板，多孔疏松纖維網狀結構不僅有利于新生細胞的遷移和增殖，還能夠使組織再生修復所需的氧氣與相關營養(yǎng)成分更好地擴散，從而加速組織的愈合過程[19]。PRF的纖維蛋白能將血小板和生長因子以化學鍵結合起來，隨后緩慢釋放。Caterino等[20]的研究結果顯示，PRF緩慢釋放生長因子與其纖維網狀結構中血小板逐漸激活有關。此外，陳鐵樓等[21]通過電鏡觀察發(fā)現，血小板激活后的α-顆粒性物質釋放其實是生長因子分泌的過程，分泌后的生長因子遷移到立體網狀結構中。目前，PRF在促進創(chuàng)面愈合及軟組織再生方面的療效已得到證實[22]，然而其在抗皮膚老化中的應用研究尚少。李澤華等[23]研究發(fā)現，PRF與自體脂肪聯合注射可以促進局部血管化、改善血運，從而獲得良好的面部年輕化效果。PRF通過其含有的細胞因子發(fā)揮生物學作用，可以促進細胞增殖、基質改建和血管再生，其中堿性成纖維細胞生長因子是促進成纖維細胞生成膠原的重要細胞因子，表皮生長因子則可以促進上皮細胞、表皮細胞及真皮層細胞的增殖和遷移，加快新陳代謝，達到嫩膚、抗皺及滋潤皮膚的效果，這些因子在PRF析出液中進一步濃集，可發(fā)揮更好的效果。

既往研究表明，A-PRF是在傳統(tǒng)富血小板纖維蛋白基礎上進行優(yōu)化的血小板濃縮物，其含有大量的血小板，激活后可釋放血管內皮生長因子、轉化生長因子-β、堿性成纖維細胞生長因子等，這些生長因子具有促進細胞增殖、刺激血管化等功能[24-26]。本研究結果顯示，治療組患者完成治療后的1周及1個月，面部皮膚狀態(tài)均有顯著改善，其中治療組患者皮膚的皺紋、紋理、毛孔、水分、彈性和油脂方面的改善明顯優(yōu)于對照組，表現為細膩度及光澤度明顯增加、細紋減少，主觀感受皮膚滋潤并有飽滿感和彈性等，提示A-PRF聯合類人膠原蛋白面膜可以顯著改善皮膚的衰老狀態(tài)，其效果優(yōu)于單純敷貼面膜。此外，國外有學者提出，促滲劑可以提高皮膚對類人膠原蛋白的吸收率[4]，而A-PRF是富含生長因子的液體，可起到類似促滲劑作用，因而可進一步提高外用類人膠原蛋白改善膚質的效果。本研究的創(chuàng)新點在于首次嘗試采用A-PRF聯合重組類人膠原蛋白面膜對面部光老化皮膚進行修復并取得良好的效果。

綜上所述，采用A-PRF聯合重組類人膠原蛋白面膜對女性面部光老化皮膚進行修復，可提升面部皮膚的水分和彈性，同時降低油脂、減輕細紋，對女性面部光老化皮膚具有明顯的促修復作用，且該療法具有無創(chuàng)、操作相對簡單的優(yōu)點，具有較好的臨床應用前景。