贛南柑桔木虱發(fā)生動(dòng)態(tài)與攜帶黃龍病菌變化研究

陳慈相，胡 燕，謝金招，余海中，習(xí)建龍，李 航，宋志青

(1 江西省贛州市果樹技術(shù)推廣站，江西贛州，341000；2 江西省臍橙工程技術(shù)研究中心，江西贛州，341000；3 贛南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西贛州，341000)

柑桔黃龍病(Citrus Huanglongbing，HLB)是柑桔產(chǎn)業(yè)上的一種毀滅性病害，能為害幾乎所有柑桔品種[1]。柑桔木虱(Diaphorinacitri)是田間傳播柑桔黃龍病的主要媒介昆蟲，主要為害柑桔嫩梢，其田間發(fā)生量和攜帶黃龍病菌(CandidatusLiberibacter asiaticus，Las)率是柑桔黃龍病發(fā)生蔓延的決定性因素[2-4]。贛南最早于1979年發(fā)現(xiàn)有柑桔黃龍病和柑桔木虱發(fā)生，至今已有40余年的歷史。2013年，受暖冬、臍橙價(jià)格低迷后部分果農(nóng)棄管等因素影響，贛南柑桔木虱數(shù)量激增，導(dǎo)致柑桔黃龍病出現(xiàn)大暴發(fā)[5]。雖然近年來通過采取一系列綜合防控措施使疫情得到了明顯控制，但因缺乏有效的治療藥劑，該病仍然是當(dāng)前對(duì)贛南臍橙產(chǎn)業(yè)威脅最大的病害。目前，防治柑桔木虱是防控柑桔黃龍病的關(guān)鍵措施，了解柑桔木虱種群數(shù)量及其攜帶黃龍病菌情況對(duì)疫情防控具有重要意義。本研究于2016—2020年定點(diǎn)、定時(shí)監(jiān)測(cè)了贛南柑桔木虱發(fā)生動(dòng)態(tài)，分別于2018年和2020年檢測(cè)了正常管理果園和失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率變化，以期為柑桔黃龍病和柑桔木虱的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 柑桔木虱田間發(fā)生動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)

1.1.1 監(jiān)測(cè)地點(diǎn)

2016—2020年，在贛南柑桔產(chǎn)區(qū)的安遠(yuǎn)縣、信豐縣、大余縣、會(huì)昌縣、崇義縣、上猶縣、南康區(qū)、于都縣、興國縣、寧都縣10縣(區(qū))，選擇20個(gè)[信豐、會(huì)昌各3個(gè)，于都、安遠(yuǎn)各1個(gè)，其余6縣(區(qū))各2個(gè)；品種均為紐荷爾臍橙，樹齡8～25年]正常管理的柑桔果園進(jìn)行柑桔木虱田間發(fā)生動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

1.1.2 監(jiān)測(cè)方法

1—2月每月15日和30日(2月為28日)各調(diào)查一次；3—12月每隔5 d調(diào)查一次，每月調(diào)查6次，即每月5日、10日、15日、20日、25日、30日為調(diào)查日。每個(gè)果園按五點(diǎn)取樣法，每次隨機(jī)選5株樹，每株樹按東、南、西、北、頂5個(gè)方位各調(diào)查2枝共10枝新梢(或新芽)上柑桔木虱成蟲數(shù)量，每個(gè)監(jiān)測(cè)果園每次共調(diào)查50枝新梢(或新芽)[6]。

1.2 柑桔木虱攜帶黃龍病菌變化調(diào)查

1.2.1 柑桔木虱采集

2018年9月和2020年9月，在龍南市、尋烏縣、安遠(yuǎn)縣、信豐縣、會(huì)昌縣、崇義縣、瑞金市、上猶縣8縣(市)選擇53個(gè)正常管理果園(2018年20個(gè)，龍南、尋烏、會(huì)昌各2個(gè)，安遠(yuǎn)、信豐、崇義各3個(gè)，瑞金4個(gè)，上猶1個(gè)；2020年33個(gè)，上猶1個(gè)，尋烏、崇義各2個(gè)，龍南、安遠(yuǎn)、瑞金各4個(gè)，信豐7個(gè)，會(huì)昌9個(gè))和32個(gè)失管果園(2018年5個(gè)，龍南、尋烏各2個(gè)，安遠(yuǎn)1個(gè)；2020年27個(gè)：龍南、尋烏各1個(gè)，崇義、上猶各2個(gè)，瑞金、信豐各3個(gè)，安遠(yuǎn)4個(gè)，會(huì)昌11個(gè))采集柑桔木虱成蟲，帶回實(shí)驗(yàn)室。正常果園，2018年共采集了134頭成蟲，2020年共采集了354頭成蟲。失管果園，2018年共采集了18頭成蟲，2020年共采集了379頭成蟲。

1.2.2 柑桔木虱DNA提取

用動(dòng)物組織直接PCR試劑盒(福際)制備單頭柑桔木虱的DNA(方法參照試劑盒說明書)，制備產(chǎn)物直接用于PCR反應(yīng)或置于-20 ℃保存。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

采用SYBR GreenⅠ熒光染料法，利用引物對(duì)CQULA04F/CQULA04R[7]進(jìn)行黃龍病菌檢測(cè)。反應(yīng)體系為：2×SYBR GreenⅠMaster 5μL，10 μmol/L上下游引物各0.3 μL，無菌水3.4 μL，DNA模板1 μL。反應(yīng)在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Roche LightCycler?480 II，384)上進(jìn)行。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 10 s，72 ℃ 10 s，45個(gè)循環(huán)；95 ℃ 5 s；65 ℃ 1 min，97 ℃ 1 s；37 ℃ 30 s。每個(gè)樣品3次重復(fù)，每次擴(kuò)增分別設(shè)1個(gè)陽性對(duì)照，1個(gè)陰性對(duì)照和1個(gè)空白對(duì)照。

1.3 柑桔黃龍病病株率調(diào)查

在采集柑桔木虱的同時(shí)，從正常管理果園中再選擇10個(gè)果園(龍南、尋烏、安遠(yuǎn)、信豐、會(huì)昌、上猶各1個(gè)，崇義、瑞金各2個(gè))，根據(jù)柑桔感染黃龍病后葉片斑駁黃化、黃梢和“紅鼻果”等典型癥狀進(jìn)行發(fā)病調(diào)查，并計(jì)算病株率。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 贛南柑桔木虱發(fā)生動(dòng)態(tài)變化

通過對(duì)20個(gè)正常管理果園進(jìn)行定點(diǎn)、定時(shí)監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明，贛南柑桔木虱成蟲年度發(fā)生規(guī)律相似。1—2月，成蟲處于越冬狀態(tài)，發(fā)生數(shù)量較低；3月隨著氣溫上升和春梢萌發(fā)，成蟲量開始逐漸增多，發(fā)生高峰期主要集中在5月下旬至10月上旬，下半年發(fā)生量明顯高于上半年，與前期研究結(jié)果一致[6]。2016—2019年，柑桔木虱成蟲年度發(fā)生最高峰平均蟲量依次為84頭/百梢(8月5日)、81頭/百梢(9月10日)、57頭/百梢(7月10日)、25頭/百梢(9月25日)，發(fā)生數(shù)量呈逐年降低趨勢(shì)。尤其是2018年和2019年下降明顯，與上年相比分別下降29.63%和56.14%；但2020年柑桔木虱發(fā)生數(shù)量較前幾年明顯增加，最高峰平均蟲量達(dá)93頭/百梢(8月30日)(見圖1)。

圖1 2016—2020年贛南正常管理果園柑桔木虱成蟲發(fā)生動(dòng)態(tài)

2.2 柑桔木虱攜帶黃龍病菌變化

2.2.1 正常管理果園

對(duì)采集的柑桔木虱成蟲進(jìn)行單頭木虱Las檢測(cè)的結(jié)果表明，2018年帶菌柑桔木虱為27頭，帶菌率為20.15%，帶菌木虱的平均CT值為27.75±2.44(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，下同)；2020年帶菌柑桔木虱為46頭，帶菌率為12.99%，帶菌木虱的平均CT值為28.06±1.54。這表明，總體上，2020年贛南正常管理果園柑桔木虱帶菌率較2018年有所下降，帶菌木虱體內(nèi)帶菌量(以平均CT值表示)差異無顯著(p>0.05)。不同區(qū)域正常管理果園柑桔木虱帶菌率存在一定差異，2018年從高到低依次為崇義>龍南>尋烏>會(huì)昌>安遠(yuǎn)>瑞金>上猶>信豐，2020年依次為崇義>會(huì)昌>安遠(yuǎn)>上猶>尋烏>瑞金>信豐>龍南。除安遠(yuǎn)、信豐和上猶外，其他5個(gè)縣(市)2020年柑桔木虱帶菌率均較2019年有所下降(見圖2)。

圖2 正常管理果園柑桔木虱成蟲帶菌變化情況

2.2.2 失管果園

對(duì)采集的柑桔木虱成蟲進(jìn)行單頭木虱Las檢測(cè)的結(jié)果表明，2018年帶菌柑桔木虱為15頭，帶菌率為83.33%，帶菌木虱的平均CT值為24.50±4.40；2020年帶菌柑桔木虱為196頭，帶菌率為51.72%，帶菌木虱的平均CT值為28.20±2.94?？梢?，2020年柑桔木虱帶菌率較2018年有所下降。同一區(qū)域，失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率大多明顯高于正常管理果園(見圖3)。

圖3 2020年同一區(qū)域正常管理果園與失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率對(duì)比

2.3 柑桔木虱帶菌率與黃龍病病株率關(guān)系

10個(gè)正常管理果園的病株率，2018年為(7.197±4.405)%，2020年為(5.931±4.576)%。對(duì)柑桔黃龍病病株率(x)和柑桔木虱帶菌率(y)進(jìn)行相關(guān)回歸分析的結(jié)果表明，總的線性回歸方程為y= 2.893 5x+ 5.888 8，R2= 0.619 9(p<0.001)；2018年的相關(guān)方程式為y=2.761 6x+0.074 6，R2=0.763 5(p<0.001)；2020年的回歸方程式為y=3.470 2x+9.232 4，R2=0.815 8(p<0.001)(見圖4)。即，柑桔黃龍病病株率和柑桔木虱帶菌率呈極顯著正相關(guān)。

圖4 正常管理果園2018年(左)和2020年(右)柑桔木虱帶菌率與黃龍病病株率關(guān)系

3 討論與結(jié)論

柑桔木虱是柑桔新梢害蟲，柑桔木虱成蟲只產(chǎn)卵于新梢嫩芽，沒有新梢則不產(chǎn)卵繁殖。在贛南地區(qū)，柑桔木虱全年發(fā)生高峰期集中在5月下旬至10月上旬，與柑桔夏梢、秋梢、晚秋梢抽發(fā)期吻合；不同年份的具體發(fā)生高峰期存在差異，可能與當(dāng)年的氣候因素導(dǎo)致柑桔抽梢期變化有關(guān)。自2013年柑桔木虱大發(fā)生以來，贛南把柑桔木虱列為最重要的害蟲進(jìn)行防治，推廣了抓“五個(gè)關(guān)鍵時(shí)期”高效藥劑防治、大區(qū)域統(tǒng)防統(tǒng)治和小區(qū)域“中心戶長制”聯(lián)防聯(lián)控，以及抹除夏梢、晚秋梢等綜合防控措施，取得了良好的防控效果。因此，2016—2019年贛南正常管理果園柑桔木虱發(fā)生數(shù)量逐年下降。2020年柑桔木虱發(fā)生數(shù)量明顯增加的原因，推測(cè)可能是受新冠肺炎疫情影響，果農(nóng)冬季、早春清園工作無法正常進(jìn)行，導(dǎo)致越冬蟲口基數(shù)增多；加上5—6月贛南地區(qū)降雨多而頻繁，促使夏梢大量抽發(fā)且不整齊，導(dǎo)致6月底柑桔木虱蟲口數(shù)量明顯增加，于8月底秋梢期發(fā)生量到達(dá)全年最高峰。

秋冬季節(jié)柑桔葉片和果實(shí)更易表現(xiàn)出典型的柑桔黃龍病癥狀，植株內(nèi)病菌含量較高，柑桔木虱的獲菌率和體內(nèi)病菌濃度也隨之增高。有研究結(jié)果表明，單頭柑桔木虱含菌量在4—7月處于較低水平，隨后開始上升，9—12月柑桔木虱體內(nèi)含菌量較高[8-9]。但10月中旬后由于氣溫降低和秋梢老熟，田間柑桔木虱蟲口數(shù)量較低[6]。因此，本研究選擇在秋季9月采集田間柑桔木虱進(jìn)行Las檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，2020年正常管理果園和失管果園柑桔木虱帶菌率均低于2018年，失管果園柑桔木虱帶菌率遠(yuǎn)高于正常管理果園。通過對(duì)柑桔木虱帶菌率與果園病株率進(jìn)行相關(guān)回歸分析，發(fā)現(xiàn)柑桔木虱帶菌率與果園黃龍病病株率呈極顯著正相關(guān)關(guān)系，這與余繼華等[3]的研究結(jié)果一致。由此推測(cè)，2016—2019年贛南柑桔木虱帶菌率降低可能與贛南地區(qū)柑桔黃龍病平均發(fā)病株率逐年下降有關(guān)；失管果園由于樹勢(shì)弱，抽梢不整齊，加上長期不打藥防治柑桔木虱，黃龍病發(fā)病株率較高，因此柑桔木虱的帶菌率也更高。

針對(duì)贛南柑桔木虱發(fā)生動(dòng)態(tài)及其攜帶黃龍病菌情況，建議在柑桔木虱防治中重點(diǎn)加強(qiáng)下半年的柑桔木虱防治力度，尤其是夏梢、秋梢、晚秋梢萌發(fā)期的防治；同時(shí)要及時(shí)清除正常管理果園中的病樹，并徹底清理失管果園，從而減少黃龍病傳染源。