三色散凝膠貼膏劑的基質(zhì)處方優(yōu)化及其對KOA大鼠滑膜炎癥的干預(yù)效應(yīng)觀察

楊楠,劉子修,張力,廖太陽,茆軍,王培民,張農(nóng)山

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院,江蘇省中醫(yī)外用藥開發(fā)與應(yīng)用工程研究中心,江蘇 南京 210029)

三色散源自清代末年石氏傷科,后經(jīng)全國名老中醫(yī)諸方受先生傳承創(chuàng)新,現(xiàn)為江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑,以三色散為主要組成的易層貼敷技術(shù)已獲國家專利(ZL200820185241.8),并在該院年使用量超過150萬貼[1]。三色散由蔓荊子、丹參、白芷、羌活等組成,具有溫經(jīng)通絡(luò)、散寒除濕、宣痹止痛等功效,主要用于治療膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee osteoarthritis,KOA)[1-3]。臨床觀察三色散可有效改善KOA疼痛、腫脹、關(guān)節(jié)功能障礙等癥狀。一項(xiàng)納入240例KOA患者的隨機(jī)對照試驗(yàn)中,以三色散為主要組成的易層貼敷技術(shù)治療KOA效果優(yōu)于復(fù)方南星止痛膏對照組[1]。一項(xiàng)納入160例踝關(guān)節(jié)急性軟組織損傷患者的臨床研究中，采用以三色散為主要組成的易層貼敷療法，其療效明顯優(yōu)于奇正消痛貼對照組[4]。三色散的傳統(tǒng)制備方法(飴糖調(diào)和、敷藥包扎)存在包扎步驟繁雜、藥物易流淌、儲(chǔ)存期短等不足,既限制了治療部位,又無法充分發(fā)揮其治療效果。該制備方法已無法滿足日益增長的臨床需求量，傳統(tǒng)劑型的改良是亟待完成的任務(wù)。

中藥凝膠貼膏劑是由中藥或其提取物與親水性基質(zhì)混勻涂布于背襯材料上制成，相比傳統(tǒng)貼膏具有許多優(yōu)勢,對皮膚刺激性小,保濕性強(qiáng)、透氣性好,可反復(fù)揭貼,不污染衣物,使用方便,制備工藝條件簡便,易于擴(kuò)大生產(chǎn)[5]?；|(zhì)通常由骨架成分(水溶性高分子材料)、交聯(lián)劑、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑、保濕劑等組成,其配方比例是凝膠貼膏劑研究的重點(diǎn),對凝膠貼膏劑的質(zhì)量優(yōu)劣有決定性作用[6]。王森等[7]將原本以粉末調(diào)敷的處方藥制成復(fù)方獨(dú)一味凝膠貼膏,并對其基質(zhì)處方進(jìn)行優(yōu)化,得到性質(zhì)穩(wěn)定、工藝可行的凝膠貼膏。黃洋揚(yáng)等[8]將米醋或白酒調(diào)敷的復(fù)方活血膏改進(jìn)制成復(fù)方活血凝膠貼膏劑,優(yōu)選基質(zhì)處方工藝,解決了原方藥給藥不便、污染衣物等問題。據(jù)此，本研究擬在原方原藥的基礎(chǔ)上對基質(zhì)處方進(jìn)行優(yōu)化，將其制成配方穩(wěn)定可行的凝膠貼膏劑，并觀察三色散凝膠貼膏劑和三色散傳統(tǒng)制劑對KOA大鼠滑膜炎癥的干預(yù)效應(yīng)。為了使三色散中的有效成分盡可能透過皮膚，充分發(fā)揮其藥效，擬在三色散凝膠貼膏劑基質(zhì)處方中加入促滲劑，初步觀察加入促滲劑后的三色散凝膠貼膏劑是否能增強(qiáng)對KOA大鼠的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 儀器

CAP1003S型千分之一及CAP224D型十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius公司);KQ-1000型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);22331型高速臺(tái)式離心機(jī)(德國Eppendorf公司);HS3066型涂布機(jī)(河北華勝塑膠機(jī)械制造有限公司);TYG-Z2L型真空捏合攪拌機(jī)(涿州市騰源閣機(jī)械廠);CNY-1型初黏性測試儀、CNY-HS型恒溫持黏性測試儀、XLW(PC)-500N型智能電子拉力試驗(yàn)機(jī)(濟(jì)南三泉中石實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);AB7500型qPCR系統(tǒng)(美國Applied Biosystems公司);BioPhotometer型核酸蛋白檢測儀(德國Eppendorf公司);170-3930型蛋白電泳儀及轉(zhuǎn)膜儀系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司);LAS4000型超靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(美國GE公司)。

1.2 試劑

三色散(蘇藥制字:Z040000566)購自南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑部;聚丙烯酸鈉(批號(hào):S165277)購自上海阿拉丁生物科技公司;甘油(批號(hào):GY20210301)購自山東瑞生藥用輔料有限公司;卡波姆(批號(hào):20200701)、甘羥鋁(批號(hào):SG-0557)購自上海泛科史康有限公司;酒石酸(批號(hào)：R053495)購自上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司;薄荷腦(批號(hào)：X200202)購自黃山天目薄荷藥業(yè)有限公司;Trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑、PCR試劑、ECL化學(xué)發(fā)光液(批號(hào):R401-01、R222-01、Q331-02、E412-01)均購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司;BCA蛋白檢測試劑盒、RIPA強(qiáng)裂解液、5×蛋白上樣緩沖液(批號(hào):P0012、P0013B、P0015)均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;小鼠TNF-α單克隆抗體、小鼠IL-6單克隆抗體、小鼠IL-1β單克隆抗體(批號(hào):sc-52746、sc-57315、sc-12742)均購自美國Santa Cruz公司;兔源β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)單克隆抗體(批號(hào):66009-1-Ig)購自美國Proteintech公司;辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗小鼠免疫球蛋白G(IgG)(H+L)多克隆二抗(批號(hào):S0002)購自美國Affinity公司;水為超純水;其余試劑為分析純。

1.3 藥物的制備

三色散凝膠貼膏劑的制備：將聚丙烯酸鈉、甘羥鋁加入甘油中攪拌均勻，為A相；將120 g卡波姆加適宜純水充分溶脹，加入150 g三色散粉末混合均勻，為B相；將B相加入A相中攪拌均勻?yàn)镃相，取酒石酸加50 mL純水溶解后加入C相中，真空攪拌均勻涂布于無紡布上，即得三色散凝膠貼膏劑。在三色散凝膠貼膏劑基質(zhì)處方中另加36 g薄荷腦，制備成三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)。上述三色散凝膠貼膏劑的基質(zhì)配比用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。

三色散傳統(tǒng)制劑的制備[2]：將三色散粉末與飴糖按照2∶1的比例攪勻，煉制后涂布于無紡布上，敷上防黏層，即得。

1.4 三色散凝膠貼膏劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)

參照2020年版《中國藥典》第四部通則并查閱相關(guān)文獻(xiàn)[8-10],以綜合感官、初黏力、持黏力、剝離強(qiáng)度為評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)化基質(zhì)處方。綜合感官指標(biāo)權(quán)重總占40%,初黏力、持黏力、剝離強(qiáng)度指標(biāo)權(quán)重各占20%。

1.4.1 綜合感官 對凝膠貼膏的均勻度、涂布性、皮膚追隨性、膜殘留性4個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià),最大值為10分,其余與之相比計(jì)算得分,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Sensory score standard

1.4.2 初黏力測定 取三色散凝膠貼膏劑,除去防黏層,置于底座水平、傾斜角30°的不銹鋼板中央,膏面朝上,用滌綸薄膜將鋼板上部10 cm和下部15 cm覆蓋,中間留出5 cm,將不同規(guī)格的鋼球從斜面頂端自由滾下,記錄被黏住的鋼球型號(hào),以測得最大值為20分,其余與之相比計(jì)算得分。

1.4.3 持黏力測定 取三色散凝膠貼膏劑,除去防黏層,垂直粘貼于試驗(yàn)板和加載板的中間,用壓輥來回滾壓3次,垂直固定在試驗(yàn)架上,懸掛1 kg砝碼,記錄移動(dòng)位置及脫落時(shí)間。以測得最大值為20分,其余與之相比計(jì)算得分。

1.4.4 剝離強(qiáng)度測定 取三色散凝膠貼膏劑,將其背襯固定在試驗(yàn)板上,除去防黏層,覆蓋一層潔凈的聚酯薄膜,用壓輥來回滾壓3次,除去氣泡,將聚酯薄膜自由端對折后夾在試驗(yàn)機(jī)上方,試驗(yàn)板夾在下方,以連續(xù)穩(wěn)定的速度剝離二者,記錄剝離強(qiáng)度。以測得最大值為20分,其余與之相比計(jì)算得分。

1.5 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化基質(zhì)處方

根據(jù)文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)選取聚丙烯酸鈉、甘羥鋁、酒石酸、甘油這4種對凝膠貼膏性狀影響較大的成分進(jìn)行單因素考察[11-12]。根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用正交實(shí)驗(yàn)對聚丙烯酸鈉、甘羥鋁、酒石酸、甘油的不同配比進(jìn)行考察,以綜合感官、初黏力、持黏力、剝離強(qiáng)度為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),綜合評(píng)分=綜合感官+初黏力+持黏力+剝離強(qiáng)度。正交實(shí)驗(yàn)因素水平表見表2。

表2 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

1.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按照最終篩選得到的最優(yōu)基質(zhì)處方制備3批三色散凝膠貼膏劑,以綜合感官、初黏力、持黏力、剝離強(qiáng)度為指標(biāo)對三色散凝膠貼膏劑進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.7 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康的SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,2月齡,體質(zhì)量180～200 g,由浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(浙)2019-0001。實(shí)驗(yàn)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批(倫理批號(hào):ACU210101),所有操作均遵循倫理委員會(huì)指導(dǎo)規(guī)定進(jìn)行。將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、三色散凝膠貼膏劑組、三色散傳統(tǒng)制劑組、三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)組，每組8只。

1.8 造模方式

適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,空白組不造模,其余組采用改良的Hulth法造模,3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠,膝關(guān)節(jié)備皮消毒,正中切開,暴露關(guān)節(jié)腔,將髕骨推向外側(cè),切斷內(nèi)側(cè)副韌帶、前交叉韌帶,切除內(nèi)側(cè)半月板,逐層縫合,消毒。用抽屜試驗(yàn)檢驗(yàn)造模情況,術(shù)后不固定,自由活動(dòng)。

1.9 給藥方式

造模結(jié)束后,膝關(guān)節(jié)備皮,空白組及模型組在雙膝關(guān)節(jié)處給予空白基質(zhì)貼敷,其余給藥組大鼠膝關(guān)節(jié)表面分別給予三色散凝膠貼膏劑、三色散傳統(tǒng)制劑和三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)。醫(yī)用膠布纏繞后大鼠自由活動(dòng)。每日給藥1次,每次敷貼8 h，共給藥28 d。

1.10 組織樣本的提取保存

末次給藥完成后,采用CO2窒息法處死大鼠。膝關(guān)節(jié)備皮,縱向切開髕韌帶兩側(cè),橫向切開髕骨上緣至股骨,向遠(yuǎn)端翻開游離的髕骨及周圍組織,以刀片小心切取滑膜組織,放入4%多聚甲醛和凍存管內(nèi)保存。

1.11 HE及天狼星紅染色

石蠟包埋,切片,常規(guī)HE染色及天狼星紅染液染色,顯微鏡下進(jìn)行觀察和攝片,使用Krenn評(píng)分評(píng)價(jià)滑膜炎癥情況[13],見表3。按照滑膜細(xì)胞增殖、炎性浸潤、血管入侵程度等情況計(jì)分,每項(xiàng)分值為3分,最后計(jì)算總分。

表3 滑膜炎Krenn評(píng)分

1.12 Western blot檢測滑膜組織中IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)

組織稱質(zhì)量,液氮研磨成粉,加入適量的RIPA強(qiáng)裂解液,按照BCA法測定蛋白濃度,加入5×蛋白上樣緩沖液將蛋白煮沸變性,上樣電泳,轉(zhuǎn)至PVDF膜上,用5%脫脂奶粉室溫封閉1 h,洗膜3次,加入一抗:IL-1β(1∶500)、TNF-α(1∶500)、IL-6(1∶500)、β-actin(1∶5 000),4 ℃孵育過夜,洗滌后加入二抗室溫孵育2 h,ECL顯色曝光。

1.13 qPCR檢測滑膜組織中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)

按照Trizol法提取滑膜組織總RNA,測定其濃度和純度。將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模板,β-actin為內(nèi)參,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,采用2-ΔΔCt法以ABI 7500 v2.0.5軟件計(jì)算各目標(biāo)基因mRNA的相對表達(dá)量。目的基因及內(nèi)參基因序列見表4。

表4 引物序列

1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化基質(zhì)處方

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示,R值越大表示該因素對指標(biāo)的影響越大,表明此因素越重要,可確定4個(gè)因素重要先后順序?yàn)锽>A>D>C,即影響最大的因素是甘羥鋁,其次是聚丙烯酸鈉、甘油及酒石酸?；|(zhì)處方的最佳配比為A2B2C3D3,即聚丙烯酸鈉50 g,甘羥鋁2.5 g,酒石酸3 g,甘油500 g,正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 基質(zhì)處方優(yōu)化的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 基質(zhì)處方優(yōu)化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

優(yōu)化后的處方為聚丙烯酸鈉50 g，甘羥鋁2.5 g，酒石酸3 g，甘油500 g，三色散150 g，純水50 mL，卡波姆120 g，按照此配比制備的三色散凝膠貼膏劑綜合評(píng)分較高，表明篩選出的基質(zhì)處方配比較佳，工藝穩(wěn)定可行，詳見表6。

表6 基質(zhì)處方驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 各組大鼠滑膜HE及天狼星紅染色結(jié)果比較

HE及天狼星紅染色結(jié)果顯示，空白組滑膜細(xì)胞排列整齊，幾乎無炎性細(xì)胞浸潤；與空白組比較，模型組滑膜細(xì)胞排列紊亂，炎性細(xì)胞浸潤明顯增加，滑膜纖維化加重，膠原沉積增加，可見較多毛細(xì)血管增生；與模型組比較，三色散凝膠貼膏劑組和三色散傳統(tǒng)制劑組炎性細(xì)胞浸潤減少，纖維化程度減輕，膠原沉積減少，可見少量毛細(xì)血管增生。與三色散凝膠貼膏劑組比較，三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)組進(jìn)一步減輕了炎性細(xì)胞浸潤、滑膜纖維化及膠原沉積，詳見圖1。

圖1 滑膜HE染色切片(×100)及天狼星紅染色(×200)Fig. 1 HE(×100) and Sirius red (×200) staining of synovium section

各組大鼠滑膜炎癥Krenn評(píng)分[13]結(jié)果顯示,空白組無滑膜炎,模型組為重度滑膜炎，模型組評(píng)分顯著高于空白組(P<0.01)；三色散凝膠貼膏劑組和三色散傳統(tǒng)制劑組為輕度滑膜炎且評(píng)分顯著低于模型組(P<0.01)；與三色散傳統(tǒng)制劑組比較，三色散凝膠貼膏劑組評(píng)分無顯著差異；與三色散凝膠貼膏劑組比較，三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)組評(píng)分顯著降低(P<0.05)，詳見表7。

表7 大鼠滑膜炎癥Krenn評(píng)分及分級(jí)結(jié)果Table 7 Krenn scores and grades of synovitis in

2.4 各組大鼠滑膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)量的比較

Western blot結(jié)果顯示，模型組IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)量較空白組顯著增加(P<0.01)；三色散凝膠貼膏劑組和三色散傳統(tǒng)制劑組IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)量較模型組顯著降低(P<0.01)；與三色散傳統(tǒng)制劑組比較，三色散凝膠貼膏劑組IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白表達(dá)無顯著差異。與三色散凝膠貼膏劑組比較，三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)組IL-1β蛋白表達(dá)顯著下降(P<0.01)，而TNF-α和IL-6蛋白表達(dá)無顯著差異，詳見圖2。

注：與空白組比較,**P<0.05;與模型組比較,##P<0.05;與三色散凝膠貼膏劑組比較,圖2 各組大鼠滑膜組織IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)比較Fig. 2 Comparison of IL-1β, TNF-α, IL-6 protein expressions in synovial tissues of rats in each group

2.5 各組大鼠滑膜IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)量的比較

qPCR結(jié)果顯示，模型組IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)量較空白組顯著增加(P<0.01)，三色散凝膠貼膏劑組和三色散傳統(tǒng)制劑組IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)量較模型組顯著降低(P<0.01)。與三色散傳統(tǒng)制劑組比較，三色散凝膠貼膏劑組IL-1β、IL-6 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)，而TNF-α mRNA表達(dá)無顯著差異。與三色散凝膠貼膏劑組比較，三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)組IL-1β、TNF-α、IL-6基因表達(dá)顯著下降(P<0.05，P<0.01)。詳見圖3。

注：與空白組對比，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；與三色散傳統(tǒng)制劑組比較，&P<0.05；與三色散凝膠貼膏劑組比較，▲圖3 各組大鼠滑膜組織IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)比較Fig. 3 Comparison of IL-1β, TNF-α, IL-6 mRNA expressions in synovial tissues of rats in each group

3 討論

中藥凝膠貼膏主要由背襯層、膏體層和支持層組成,膏體層包含藥物和基質(zhì),基質(zhì)主要是親水性物質(zhì),包括骨架材料、交聯(lián)劑、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑、透皮吸收促進(jìn)劑等[14]?；|(zhì)處方是否合理對膏體的整體性能起著關(guān)鍵作用[15],基質(zhì)處方優(yōu)化是制備中藥凝膠貼膏劑的重要一環(huán)?；|(zhì)中的骨架材料既能產(chǎn)生黏性,又能與交聯(lián)劑及交聯(lián)調(diào)節(jié)劑形成三維網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu),使膏體具有一定的內(nèi)聚力和強(qiáng)度。保濕劑對膏體的黏附性及藥物的釋放等有重要影響,可延緩水分的流失,促進(jìn)皮膚的水合作用[16]。本實(shí)驗(yàn)以聚丙烯酸鈉為骨架材料,甘羥鋁為交聯(lián)劑,酒石酸為交聯(lián)調(diào)節(jié)劑,甘油為保濕劑。通過前期單因素實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)聚丙烯酸鈉、甘羥鋁、酒石酸、甘油的用量對膏體的成型有重要影響。

聚丙烯酸鈉用量過多會(huì)導(dǎo)致黏性下降,膏體變硬；用量過少會(huì)導(dǎo)致內(nèi)聚力不足,膏體不成型。甘羥鋁與聚丙烯酸鈉交聯(lián)可使膏體黏性增強(qiáng),用量過多反而使膏體黏性降低。甘油用量過少,膏體變稀,導(dǎo)致內(nèi)聚力不足,貼敷時(shí)會(huì)有皮膚殘留,甘油用量過少導(dǎo)致交聯(lián)過快,涂布不均勻。酒石酸可與聚丙烯酸鈉產(chǎn)生交聯(lián),調(diào)節(jié)適宜的基質(zhì)強(qiáng)度[17]。最終我們通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選出了聚丙烯酸鈉、甘羥鋁、酒石酸、甘油合適的用量范圍,采用正交實(shí)驗(yàn)對最佳用量進(jìn)行考察,以綜合感官、初黏力、持黏力、剝離強(qiáng)度為評(píng)價(jià)指標(biāo),確定三色散凝膠貼膏劑的最優(yōu)基質(zhì)處方配比,通過驗(yàn)證,表明按照最優(yōu)基質(zhì)處方制成的三色散凝膠貼膏劑外觀平整,黏度適宜,反復(fù)揭貼性良好。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察了三色散凝膠貼膏劑和三色散傳統(tǒng)制劑對KOA大鼠滑膜炎癥的干預(yù)作用。通過改良的Hulth法構(gòu)建KOA大鼠模型，采取HE及天狼星紅染色直接觀察滑膜病理改變，同時(shí)檢測滑膜組織中IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白及mRNA表達(dá)量。結(jié)果顯示，KOA大鼠在外用三色散凝膠貼膏劑和三色散傳統(tǒng)制劑后，滑膜炎癥病理表現(xiàn)明顯減輕，相關(guān)促炎因子顯著下調(diào)，表明三色散凝膠貼膏劑和三色散傳統(tǒng)制劑對KOA大鼠滑膜炎癥均具有良好的干預(yù)作用，同時(shí)也表明三色散凝膠貼膏劑中的基質(zhì)處方并未影響三色散藥物成分對KOA大鼠滑膜炎癥的干預(yù)作用。

為了考察加入促滲劑后的三色散凝膠貼膏劑是否能對KOA大鼠滑膜炎癥產(chǎn)生更好的干預(yù)作用，查閱相關(guān)文獻(xiàn)后，在三色散凝膠貼膏劑基質(zhì)處方中加入了薄荷腦，結(jié)果顯示，與三色散凝膠貼膏劑比較，三色散凝膠貼膏劑(含促滲劑)可顯著抑制KOA大鼠滑膜炎癥?，F(xiàn)代外用透藥要求透皮吸收促進(jìn)劑將藥物滲透進(jìn)入人體皮膚但不能對人體造成嚴(yán)重刺激和損害[18]。促滲劑又分為化學(xué)促滲劑和天然促滲劑,目前化學(xué)促滲劑研究較多且較常用的為氮酮,具有毒性小、刺激少、促滲效果良好等優(yōu)點(diǎn)。張瑩瑩等[19]選擇3%氮酮作為促滲劑制備得到的少腹逐瘀凝膠貼膏劑促滲作用好且不影響其外觀性能和穩(wěn)定性。中藥促滲劑是天然促滲劑重要的組成部分,可同時(shí)發(fā)揮促滲和治療的雙重作用,更因其來源廣泛、起效快、療效好、副作用少等優(yōu)點(diǎn),引起了研究者的重視[20-21]。薄荷腦已被證明是一種很強(qiáng)的中藥促滲劑,鄧顯儀等[22]發(fā)現(xiàn)不同濃度薄荷腦對雪上一枝蒿甲素體內(nèi)外的促滲作用均具有良好的相關(guān)性。若將薄荷腦與化學(xué)促滲劑協(xié)同應(yīng)用可以產(chǎn)生更好的促滲作用和更高的安全性,一項(xiàng)研究比較了不同比例氮酮與薄荷腦對吲哚美辛貼劑的促滲效果,發(fā)現(xiàn)薄荷腦能明顯降低氮酮存在的藥物經(jīng)皮時(shí)滯,同時(shí)提高促滲強(qiáng)度[23]。若將薄荷腦與中藥促滲劑合用則不僅能保證軟膏制劑質(zhì)量,更可協(xié)助主藥發(fā)揮作用[20]。由此可見,薄荷腦在促滲領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,療效顯著確切。在本實(shí)驗(yàn)中,促滲劑的用量不能太高也不能太低，低濃度的促滲劑很難改變皮膚角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)，對藥物透皮吸收作用影響不大，高濃度的促滲劑可能不利于藥物透過角質(zhì)層，阻滯藥物滲透[22,24]。因此，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)以及藥典和文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)選取36 g薄荷腦是比較合適的用量，后續(xù)團(tuán)隊(duì)將設(shè)計(jì)專門的離體透皮實(shí)驗(yàn)以比較不同用量薄荷腦的經(jīng)皮促滲效果。

綜上,本研究將名醫(yī)驗(yàn)方三色散的傳統(tǒng)制劑改進(jìn)成更加穩(wěn)定方便的三色散凝膠貼膏劑,并在此基礎(chǔ)上開展三色散凝膠貼膏劑的藥效學(xué)研究。最終制備得到的三色散凝膠貼膏劑色澤均勻，無氣泡及顆粒感,無脫膏、漏膏及皮膚殘留現(xiàn)象,具有良好的黏附性、保濕性,有利于進(jìn)一步擴(kuò)大三色散在膝骨關(guān)節(jié)炎中的臨床應(yīng)用。