雄激素受體在T1期三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

李春燕，程志原，馬善義，董 駿，朱加作

（宣城市中心醫(yī)院腫瘤科，安徽 宣城 242000）

三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progestrogen recepor,PR）和人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor recepor-2,HER-2）均呈陰性表達(dá)的乳腺癌類型[1-2]。據(jù)國內(nèi)多家醫(yī)院的流行病學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，TNBC占乳腺癌病理類型的10%左右，且確診時(shí)TNBC臨床分期以0～Ⅱ期為主（約75%），其中T1期TNBC診斷率約為17.91%～24.30%[3-4]。即便如此，T1期TNBC患者的中位無復(fù)發(fā)生存時(shí)間仍不超過30個(gè)月。與其他亞型相比，TNBC侵襲性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高，因此患者預(yù)后差，生存率低。尋找有效的生物標(biāo)志物是制定治療策略的重要因素之一。雄激素受體（androgen receptor，AR）是一種類固醇激素受體，與其配體雄激素結(jié)合之后作用于下游靶基因，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[5-6]。本研究旨在檢測T1期TNBC患者乳腺組織中AR的表達(dá)，并進(jìn)一步分析其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2015年3月-2017年3月于滄州市人民醫(yī)院腫瘤科收治的87例T1期TNBC患者病理組織、癌旁組織、臨床病理資料和隨訪資料，患者年齡22～74歲，平均年齡（45.16±10.16）歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查同意（審批號：20151325），患者及其家屬均知情并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)[7]納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)穿刺活檢均確診為TNBC，且臨床分期為T1期；腫瘤最大直徑≤2cm；術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療等輔助治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并嚴(yán)重感染性疾病或血液、呼吸、肝腎等疾病。

1.3 方法

1.3.1 AR表達(dá)的測定將收集的病理組織及癌旁組織石蠟塊連續(xù)切片，厚度4 μm，于60℃烤箱中烘干2 h。切片脫蠟至水，切片脫蠟至水；3%H2O2處理15 min；檸檬酸鈉修復(fù)液修復(fù)；BSA溶液封閉20 min。加入一抗4℃孵育過夜；第二天加入二抗室溫孵育30 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染、脫水、透明。封片，鏡檢。單克隆抗體購自德國默克公司，免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑購自上海信裕生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3.2 陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)由2位或2位以上病理醫(yī)師觀察，400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)黃褐色或棕褐色的細(xì)胞為陽性。根據(jù)染色程度分為：無染色（-）、淺黃色（+）、棕黃色（++）、黃褐色（+++），分別代表0～3分。根據(jù)視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占比例分為：0%～10%（-）、11%～25%（+）、26%～50%（++）、51%～75%（+++）、75%～100%（++++），分別代表0～4分。最終得分以染色強(qiáng)度得分和陽性細(xì)胞數(shù)所占比例之積，最終得分≥3分則為陽性，最終得分＜3分則為陰性。

1.3.3 患者臨床資料的收集收集患者年齡、月經(jīng)情況、病理類型、細(xì)胞核相關(guān)抗原Ki67（Ki-67）指數(shù)、組織學(xué)分級、脈管浸潤、淋巴結(jié)狀態(tài)等。本研究關(guān)于Ki-67臨界值定義：參照2013年圣蓋倫共識[8]推薦，將Ki-67比例≥20%為高表達(dá)，比例＜20%為低表達(dá)；參照諾丁漢聯(lián)合組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)[9]，將TNBC分為1、2、3級。

1.3.4 隨訪采用電話、信函和查閱醫(yī)院病案記錄等方式進(jìn)行隨訪，記錄患者總生存率。生存時(shí)間定義為從術(shù)后第1天起至任何原因?qū)е碌乃劳龌蚰┐坞S訪時(shí)間。隨訪截止至2020年3月31日。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用單因素方差分析，兩組比較采用SNK-q法。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。Kaplan-Meier生存曲線分析T1期TNBC患者AR表達(dá)與預(yù)后生存期的關(guān)系，比較采用Log-rank檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 T1期TNBC患者組織中AR表達(dá)情況87例T1期TNBC患者中，AR陽性表達(dá)28例（32.18%），低于癌旁組織70例（80.45%）。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)AR表達(dá)呈陰性者胞核無著色（圖1A），AR表達(dá)呈弱陽性者少數(shù)胞核內(nèi)可見黃褐色顆粒（圖1B），AR表達(dá)呈強(qiáng)陽性者多數(shù)胞核內(nèi)可見黃褐色或棕色顆粒（圖1C）。

圖1 免疫組化染色檢測AR表達(dá)情況（SP法，×200）

2.2AR表達(dá)與T1期TNBC患者臨床病理特征的關(guān)系A(chǔ)R表達(dá)在Ki-67指數(shù)≥20%、組織學(xué)分級為G3、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中陽性表達(dá)率降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AR表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)情況、病理類型、脈管癌栓等均無關(guān)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 AR表達(dá)與T1期TNBC患者臨床病理特征的關(guān)系/n（%）

2.3 AR表達(dá)與T1期TNBC患者臨床病理特征多因素分析T1期TNBC患者的Ki-67指數(shù)、組織學(xué)分級是AR表達(dá)的獨(dú)立影響因素，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 AR表達(dá)與T1期TNBC患者臨床病理特征多因素分析

2.4 AR表達(dá)與T1期TNBC患者生存預(yù)后的關(guān)系截止至2020年3月31日，87例T1期TNBC患者中共死亡29例。其中AR陽性組總生存率為82.14%（23/28），高于AR陰性組59.32%（35/59），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。AR陽性組中位生存時(shí)間為49個(gè)月，高于AR陰性組中位生存時(shí)間39個(gè)月，Log-rank檢驗(yàn)為P=0.027，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 AR表達(dá)與T1期TNBC患者預(yù)后生存期的關(guān)系

3 討論

AR與ER和PR同屬于類固醇激素家族，其中，ER和PR既可作為用于判定TNBC發(fā)生，也是內(nèi)分泌治療過程中的靶標(biāo)[10-11]，而AR在TNBC中的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前也未出現(xiàn)與其相關(guān)的靶向治療方案。AR是核受體超家族的一員，在人體的多數(shù)組織和器官中均有分布。正常狀態(tài)下，AR構(gòu)象處于穩(wěn)定狀態(tài)，與其配體雄激素結(jié)合而激活時(shí)，自身構(gòu)象發(fā)生改變并調(diào)控靶基因的表達(dá)，可參與調(diào)控細(xì)胞增殖活動(dòng)[12-13]。本研究結(jié)果中，AR陽性表達(dá)率為32.18%（28/87），低于癌旁組織80.45%（70/87），符合既往研究結(jié)果[14-15]，表明AR及其配體表達(dá)與對TNBC具有重要的研究價(jià)值，可調(diào)控TNBC瘤體的生長轉(zhuǎn)移。

AR在乳腺癌發(fā)生中的作用是復(fù)雜的，若沒有相關(guān)配體結(jié)合，AR可在細(xì)胞質(zhì)中被熱休克蛋白和伴侶復(fù)合物（HSP-70，HSP-90）保持其非活性狀態(tài)[16]。若與配體結(jié)合后，受體-激素復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，促進(jìn)目標(biāo)基因的輔激活-介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄（轉(zhuǎn)錄/基因組激活模式），并通過負(fù)反饋抑制AR轉(zhuǎn)錄。除此以外，AR也可以通過一種非轉(zhuǎn)錄/非基因組的機(jī)制被激活[17]，這種機(jī)制不需要DNA或RNA的相互作用，并且以一種依賴或不依賴于ERK的方式通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)AR活性[18-20]。在本研究中，AR在Ki-67指數(shù)≥20%、組織學(xué)分級為G3、淋巴結(jié)狀態(tài)為陽性的患者中陽性表達(dá)率降低，其中，Ki-67指數(shù)、組織學(xué)分級是T1期TNBC患者AR表達(dá)的獨(dú)立影響因素。說明AR表達(dá)缺失可提高癌細(xì)胞增殖能力，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，干擾AR相關(guān)的的信號通路可對TNBC患者的治療產(chǎn)生一定的積極意義[21]。因此，AR有望成為未來治療TNBC的新型靶點(diǎn)。

AR在TNBC患者中的預(yù)后影響是有爭議的。一些研究已經(jīng)強(qiáng)調(diào)了管腔雄激素受體TNBC亞型的良好預(yù)后，例如AR陰性TNBC女性患者5年生存率低于AR陽性TNBC或其他組織學(xué)亞組[22,23]。在本研究中，AR陽性組總生存率和中位生存時(shí)間優(yōu)于AR陰性組，說明AR的表達(dá)缺失預(yù)示著TNBC患者生存預(yù)后不良。但本研究未對患者的無病生存時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有待于今后延長隨訪時(shí)間以期為AR陽性表達(dá)與TNBC患者預(yù)后的關(guān)系分析提供更充分的臨床證據(jù)。

綜上，在T1期TNBC中存在AR的陽性表達(dá)，但陽性表達(dá)率較低，且AR表達(dá)與Ki-67指數(shù)、組織學(xué)分級有關(guān)。此外AR陽性表達(dá)預(yù)示著TNBC患者生存預(yù)后良好。因此，若在TNBC的T1期對患者進(jìn)行AR針對性治療，有望提高患者預(yù)后生存期。