連花清瘟膠囊定性鑒別優(yōu)化研究

王光月，姜璐璐，霍若琳，黃金鳳，谷 樂(lè)，李 勇，王 燁

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117）

連花清瘟是基于中醫(yī)對(duì)“瘟疫”的防治理論而研制的中藥復(fù)方制劑[1-2]。由銀翹散與麻杏石甘湯化裁而成，具有清瘟解毒，宣肺泄熱的功效[3-7]。主要成分有：連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍(lán)根、綿馬貫眾、魚(yú)腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦、甘草13 味藥。其對(duì)病毒性呼吸系統(tǒng)傳染病具有廣譜抗病毒、抑菌、退熱抗炎、止咳化痰、調(diào)節(jié)免疫等系統(tǒng)防御作用[8-12]。自2019 年12 月我國(guó)湖北武漢暴發(fā)新型冠狀病毒（2019-nCoV）以來(lái)連花清瘟聯(lián)合常規(guī)治療獲得了良好效果。但是，至今連花清瘟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中定性鑒別仍未完善，除石膏外，廣藿香、板藍(lán)根、紅景天、綿馬貫眾、炒苦杏仁未進(jìn)行定性鑒別。本文采用薄層色譜法對(duì)這五味藥進(jìn)行定性鑒別研究，進(jìn)一步完善連花清瘟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 連花清瘟膠囊（自制）[13-16]，連花清瘟膠囊（批號(hào)A2006030，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司），對(duì)照品L-精氨酸（CAS：74-79-3），紅景天苷（CAS：10338-51-9），苦杏仁苷（CAS：29883-15-6），百秋李醇（CAS:5986-55-0）和綿馬貫眾素（CAS：12777-70-7）購(gòu)于成都埃法生物科技有限公司，層析硅膠G鋁箔片基薄板購(gòu)于青島海洋化工廠，其他所用試劑均為分析純。

1.2 儀器 分析天平MS3035（深圳市盛美儀器有限公司），電子天平TP-A500（福州華志科學(xué)儀器有限公司），電熱鼓風(fēng)干燥箱101-0.（北京科偉永興儀器有限公司），恒溫水浴鍋HH-1（江蘇金壇市江南儀器T 制造），超聲波清洗機(jī)JP-020S（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司），多功能高速中藥粉碎機(jī)DFY-500（溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司），磁力攪拌控溫電熱套84-1（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司）。

2 薄層色譜的鑒別

2.1 廣藿香薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液Ⅰ的制備 取連花清瘟膠囊內(nèi)容物1.3 g，加石油醚（60～90℃）15 mL 溶解，用2 mol/L 氫氧化鈉溶液3 mL 提取[17-19]，用2 mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至2.0，再用石油醚（60～90℃）6 mL 振搖提取，分取石油醚層并濃縮至0.5 mL[20]，作為廣藿香油供試品溶液Ⅰ。

2.1.2 供試品溶液Ⅱ的制備 依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）1013 頁(yè)連花清瘟膠囊項(xiàng)下制備工藝制備該膠囊，取自制連花清瘟顆粒1.3 g，同2.1.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為廣藿香油供試品溶液Ⅱ。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備 取百秋李醇對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每l mL 含4 mg 的溶液，作為百秋李醇對(duì)照品溶液。

2.1.4 對(duì)照藥材溶液的制備 取廣藿香粉末0.3 g，同2.1.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為廣藿香油對(duì)照藥材溶液。

2.1.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取廣藿香陰性顆粒1.3 g，同2.1.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為廣藿香油陰性供試液。

2.1.6 實(shí)驗(yàn)方法 參考2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）46 頁(yè)廣藿香項(xiàng)下薄層鑒別方法，斑點(diǎn)專屬性不好。分別對(duì)點(diǎn)樣量（對(duì)照品1～5 μL、其他溶液2～8 μL）、溫濕度、展開(kāi)劑不同比例（石油醚:乙酸乙酯=4:1/5:1/6:1/7:1/8:1；顯色劑（5%三氯化鐵乙醇溶液、5%香草醛濃硫酸溶液）進(jìn)行考察。

2.2 板藍(lán)根薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液Ⅰ的制備 取連花清瘟膠囊內(nèi)容物0.7 g，加稀乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖? mL 使溶解，作為板藍(lán)根供試品溶液Ⅰ。

2.2.2 供試品溶液Ⅱ的制備 依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）1013 頁(yè)連花清瘟膠囊項(xiàng)下制備工藝制備該膠囊，取自制連花清瘟膠囊內(nèi)容物0.7 g，同2.2.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為板藍(lán)根供試品溶液Ⅱ。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取精氨酸對(duì)照品，加稀乙醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液，作為精氨酸對(duì)照品溶液。

2.2.4 對(duì)照藥材溶液的制備 取板藍(lán)根粉末0.5 g，同2.2.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為板藍(lán)根對(duì)照藥材溶液。

2.2.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取板藍(lán)根陰性顆粒0.7 g，同2.2.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為板藍(lán)根陰性供試液。

2.2.6 實(shí)驗(yàn)方法 參考2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）214 頁(yè)板藍(lán)根項(xiàng)下薄層鑒別方法，斑點(diǎn)專屬性不好。分別對(duì)點(diǎn)樣量（對(duì)照品1～5 μL、其他溶液2～8 μL）、溫濕度、展開(kāi)劑不同比例（正丁醇:冰醋酸:水=4:1:3/4:1:2/3:2:2；正丁醇:冰醋酸:水:甲酸=3:2:2:0.1/3:2:2:0.2）、顯色劑（茚三酮溶液）進(jìn)行考察。

2.3 紅景天薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液Ⅰ的制備 取連花清瘟膠囊內(nèi)容物2.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人甲醇10 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為紅景天供試品溶液Ⅰ。

2.3.2 供試品溶液Ⅱ的制備 依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）1013 頁(yè)連花清瘟膠囊項(xiàng)下制備工藝制備該膠囊，取自制連花清瘟膠囊內(nèi)容物2.1 g，同2.3.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為紅景天供試品溶液Ⅱ。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 取紅景天苷對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每l mL 含0.5 mg 的溶液，作為紅景天苷對(duì)照品溶液。

2.3.4 對(duì)照藥材溶液的制備 取紅景天粉末0.5 g，同2.3.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為紅景天對(duì)照藥材溶液。

2.3.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取紅景天陰性顆粒2.1 g，同2.3.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為紅景天陰性供試液。

2.3.6 實(shí)驗(yàn)方法 參考2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）161 頁(yè)紅景天項(xiàng)下薄層鑒別方法，斑點(diǎn)專屬性不好。分別對(duì)點(diǎn)樣量（對(duì)照品1～5 μL、其他溶液2～8 μL）、溫濕度、展開(kāi)劑不同比例（三氯甲烷:甲醇:丙酮:水=6:2:1:1/6:3:1:2/6:3.5:1:1/6:3.3:1:1）、顯色劑（碘蒸氣）進(jìn)行考察。

2.4 綿馬貫眾薄層鑒別

2.4.1 供試品溶液Ⅰ的制備 取連花清瘟膠囊內(nèi)容物0.7 g，加環(huán)己烷20 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液10 mL，濃縮至5 mL，作為綿馬貫眾供試品溶液Ⅰ。

2.4.2 供試品溶液Ⅱ的制備 依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）1013 頁(yè)連花清瘟膠囊項(xiàng)下制備工藝制備該膠囊，取自制連花清瘟膠囊內(nèi)容物0.7 g，同2.4.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為綿馬貫眾供試品溶液Ⅱ。

2.4.3 對(duì)照品溶液的制備 取綿馬貫眾素對(duì)照品，加環(huán)己烷制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液，作為綿馬貫眾素對(duì)照品溶液。

2.4.4 對(duì)照藥材溶液的制備 取綿馬貫眾粉末0.5 g，同2.4.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為綿馬貫眾對(duì)照藥材溶液。

2.4.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取綿馬貫眾陰性顆粒0.7 g，同2.4.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為綿馬貫眾陰性供試液。

2.4.6 實(shí)驗(yàn)方法 參考2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）344 頁(yè)綿馬貫眾項(xiàng)下薄層鑒別方法，斑點(diǎn)專屬性不好。分別對(duì)點(diǎn)樣量（對(duì)照品1～5 μL、其他溶液2～8 μL）、溫濕度、展開(kāi)劑不同比例（正己烷:三氯甲烷:甲醇=30:15:1/6:3:1/3:6:1/3:1:1/1:3:1）、顯色劑（0.3%堅(jiān)牢藍(lán)BB 鹽的稀乙醇溶液）進(jìn)行考察。

2.5 炒苦杏仁薄層鑒別

2.5.1 供試品溶液Ⅰ的制備 取連花清瘟膠囊內(nèi)容物8.3 g，置索氏提取器中，加二氯甲烷適量，加熱回流2 h，棄去二氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加甲醇30 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過(guò)，作為炒苦杏仁供試品溶液Ⅰ。

2.5.2 供試品溶液Ⅱ的制備 依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）1013 頁(yè)連花清瘟膠囊項(xiàng)下制備工藝制備該膠囊，取自制連花清瘟膠囊內(nèi)容物8.3 g，同2.5.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為炒苦杏仁供試品溶液Ⅱ。

2.5.3 對(duì)照品溶液的制備 取苦杏仁苷對(duì)照品，加甲醇制成每l mL 含2 mg 的溶液，作為苦杏仁苷對(duì)照品溶液。

2.5.4 對(duì)照藥材溶液的制備 取炒苦杏仁粉末2.0 g，同2.5.1 項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為炒苦杏仁對(duì)照藥材溶液。

2.5.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取炒苦杏仁陰性顆粒8.3 g，同2.5.1項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)步驟，作為炒苦杏仁陰性供試液。

2.5.6 實(shí)驗(yàn)方法 參考2020 年版《中國(guó)藥典》（一部）211 頁(yè)苦杏仁項(xiàng)下薄層鑒別方法，斑點(diǎn)專屬性不好。分別對(duì)點(diǎn)樣量（對(duì)照品1～5 μL、其他溶液2～8 μL）、溫濕度、展開(kāi)劑不同比例[三氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇:水=15:40:22:10（下層）]、顯色劑（0.8%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液）進(jìn)行考察。

3 結(jié)果

3.1 廣藿香薄層鑒別 參照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502 試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1～2 μL，其他溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一層析硅膠G 鋁箔片基薄板上，以石油醚（60～90℃）:乙酸乙酯=8:1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果如圖1 所示。

圖1 廣藿香薄層色譜

3.2 板藍(lán)根薄層鑒別 參照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502 試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1～2 μL，其他溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一層析硅膠G 鋁箔片基薄板上，以正丁醇:冰醋酸:水:甲酸=3:2:2:0.2 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果如圖2 所示。

圖2 板藍(lán)根薄層色譜

3.3 紅景天薄層鑒別 參照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502 試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1～2 μL，其他溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一層析硅膠G 鋁箔片基薄板上，以三氯甲烷:甲醇:丙酮:水=6:3.3:1:1 下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果如圖3 所示。

圖3 紅景天薄層色譜

3.4 炒苦杏仁和綿馬貫眾薄層鑒別 參照2020 年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502 試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1～2 μL，其他溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一層析硅膠G 鋁箔片基薄板上，采用不同展開(kāi)劑和顯色劑進(jìn)行研究，未顯示出清晰且專屬性強(qiáng)的斑點(diǎn)，有待于進(jìn)一步方法優(yōu)化。

4 討論

通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)檢索，并未發(fā)現(xiàn)關(guān)于連花清瘟膠囊中上述五味藥材定性鑒別的研究報(bào)道，本文采用薄層色譜法對(duì)這五味藥材進(jìn)行定性鑒別。提出廣藿香、板藍(lán)根和紅景天的薄層優(yōu)化方案；而炒苦杏仁、綿馬貫眾的薄層斑點(diǎn)不清晰，其定性鑒別條件有待于進(jìn)一步摸索。在已經(jīng)優(yōu)化完成三味藥材的TLC 色譜中，供試品與對(duì)照品和對(duì)照藥材在相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，檢驗(yàn)呈陽(yáng)性，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。本文對(duì)連花清瘟膠囊中部分藥的薄層鑒別進(jìn)行優(yōu)化，為相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。