萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院呼吸道流感嗜血桿菌感染特點(diǎn)及耐藥性分析

劉鳳群，譚一楠，李麗

（萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 萍鄉(xiāng) 337000）

流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae.Hi）是引起老年人及兒童嚴(yán)重細(xì)菌感染的主要致病菌之一，與卡他莫拉菌和肺炎鏈球菌并稱為社區(qū)獲得性肺炎三大病原菌[1]。 當(dāng)人體免疫力低下時(shí)，可引起呼吸道相關(guān)性疾病，定植的細(xì)菌還可隨黏膜侵入血流中，播散到身體多個(gè)部位，如腦膜、皮下組織、關(guān)節(jié)、胸膜、心包和肺部等，引起嚴(yán)重的感染。氨芐西林是治療流感嗜血桿菌感染的首選藥物，近年來氨芐西林及其它一些藥物的敏感率逐漸降低，且趨勢愈來愈嚴(yán)重[2]，已引起臨床高度重視。 回顧性分析2016年1月至2019年6月期間萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院呼吸道流感嗜血桿菌感染患者的臨床資料，分析其感染特征，對流感嗜血桿菌的耐藥性進(jìn)行分析總結(jié)，以期為臨床治療流感嗜血桿菌感染提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2016年1月至2019年6月期間本院分離的62 株流感嗜血桿菌感染患者的臨床資料，包括科室、年齡、性別、入院季節(jié)等，標(biāo)本為痰、肺泡灌洗液、咽式子等。

1.2 儀器與試劑VITEK 2-compact 全自動微生物鑒定藥敏儀，NH 鑒定卡，試劑：杭州濱和生物的培養(yǎng)基，康泰生物公司的藥敏紙片及頭孢硝噻吩紙片以及Ⅴ、Ⅹ、Ⅴ+Ⅹ因子紙片。 質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC25923，流感嗜血桿菌ATCC49247，購自國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗(yàn)中心。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本接種、分離、及菌種鑒定 標(biāo)本留取及接種嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[3]進(jìn)行，經(jīng)35℃，8%CO2孵育18～24h，挑取巧克力平板上無色、半透明、濕潤的可疑菌落使用Ⅴ、Ⅹ、Ⅴ+Ⅹ因子做衛(wèi)星試驗(yàn)，使用VITEK 2-compact 細(xì)菌鑒定儀鑒定菌種。

1.3.2 藥敏檢測 對氨芐西林、 阿莫西林/克拉維酸、左旋氧氟沙星、頭孢呋辛、頭孢曲松、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、哌拉西林/他唑巴坦、美羅培南等藥物使用K-B 法行藥敏試驗(yàn)。 藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)參照2017年版CLSI 的標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.3.3 β-內(nèi)酰胺酶檢測 將頭孢硝噻吩紙片涂抹流感嗜血桿菌菌落，10min 后觀察紙片顏色變化：紅色為陽性，不變色為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用WHONET5.6 細(xì)菌耐藥性監(jiān)測數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行耐藥性分析，數(shù)據(jù)采用spss20.0 軟件分析統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料以率表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 嗜血桿菌感染狀況 62 株流感嗜血桿菌病例男性為44 株，占71%，女性為18 株，占比29%，不同性別間感染差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），患者年齡最大者94歲，最小者為55歲。 Hi 感染具有明顯的季節(jié)分布，以冬春季節(jié)為主。 送檢科室以呼吸內(nèi)科、內(nèi)分泌科、心血管內(nèi)科為主。 見表1。

表1 萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院流感嗜血桿菌感染狀況分析[n=62]

2.2 流感嗜血桿菌對抗生素的耐藥率及β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果 62 株流感嗜血桿菌對氨芐西林、四環(huán)素、復(fù)方新諾明耐藥率較高，對頭孢類及含酶抑制劑、喹諾酮類、阿奇霉素等耐藥率較低，對碳青酶烯類未發(fā)現(xiàn)耐藥株。 見表2。

表2 62 株流感嗜血桿菌對常用抗生素的耐藥率及產(chǎn)酶株與非產(chǎn)酶株耐藥率比較（%）

3 討論

流感嗜血桿菌是一種革蘭陰性苛養(yǎng)菌，生長需要Ⅴ因子和Ⅹ因子，其分離培養(yǎng)較困難，不同實(shí)驗(yàn)室分離率差異很大,對流感嗜血桿菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)不僅是臨床迫切的需要，同時(shí)也是衡量一個(gè)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平的重要標(biāo)志[5]。老年人和幼齡兒童由于免疫功能低，成為流感嗜血桿菌高感染率的主要人群[6]，臨床以社區(qū)獲得性肺炎最常見[7]。 相關(guān)研究報(bào)道顯示，免疫功能低下、紊亂是正常菌群易感的高危因素[8,9]。本研究中感染患者以55歲以上老年人為主，可能因本院臨床科室以內(nèi)科、外科和骨科為主，就醫(yī)患者以成人為主體有關(guān)。 送檢科室以內(nèi)科為主，呼吸內(nèi)科陽性率最高，內(nèi)分泌科次之，內(nèi)科患者多為慢性病，住院時(shí)間長，抗菌藥物使用種類多、時(shí)間長等易致感染[10]；老年人隨著年齡的增長，機(jī)體免疫功能及生理機(jī)能明顯發(fā)生衰退，多數(shù)患者都有不同程度地患有基礎(chǔ)疾病；長期抗生素治療、免疫抑制劑、激素類藥物的應(yīng)用等因素都加重了此類人群的感染機(jī)會。 冬季和春季為流感嗜血桿菌感染高發(fā)季節(jié)，夏季和秋季感染率明顯低于冬、春季，差異顯著[11]，可能因本地區(qū)氣候多變、陰冷、潮濕，老年人缺乏活動等因素，給流感嗜血桿菌的定植和生長提供了有利條件。

流感嗜血桿菌的首選藥物是氨芐西林，但近年來由于抗生素的濫用，使得流感嗜血桿菌的耐藥率不斷增加，給臨床治療帶來很大挑戰(zhàn)[12]。 β-內(nèi)酰胺酶檢測具有比較重要的意義，陽性可以快速檢測阿莫西林和氨芐西林的耐藥性[13]，本次分析顯示流感嗜血桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶為38.7%，低于2017年CHINET 中國細(xì)菌耐藥性監(jiān)測成人株45%或以上[14]；對復(fù)方新諾明耐藥率較高為48.4%，本次數(shù)據(jù)說明氨芐西林及復(fù)方新諾明已不適合臨床經(jīng)驗(yàn)用藥；對左氧沙星、頭孢曲松、頭孢呋辛、美羅培南、阿奇霉素、哌拉西林/他唑巴坦等耐藥率均低于10%，此類藥目前可以作為經(jīng)驗(yàn)治療的選擇，但今后的耐藥變化需要進(jìn)一步觀察。

產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶是流感嗜血桿菌的主要耐藥機(jī)制，分別是TEM-1 和ROB-1 兩種，主要由質(zhì)粒介導(dǎo)，其中90%以上為TEM-1 型[15]，產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株應(yīng)考慮阿莫西林、 氨芐西林耐藥，但對頭孢類、碳青酶烯類抗生素可能敏感，對含β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合劑敏感。BLNAR 菌株又稱為β-內(nèi)酰胺酶陰性的氨芐西林耐藥株，此菌株主要是細(xì)胞壁青霉素結(jié)合蛋白的改變，使得氨芐西林和阿莫西林無法與細(xì)胞壁上的作用靶點(diǎn)結(jié)合，這種菌株對頭孢菌素的抗菌活性也有所下降，對阿莫西林/克拉維酸、頭孢丙烯、頭孢呋辛、及哌拉西林/他唑巴坦等均視為耐藥，即使藥敏試驗(yàn)為敏感，亦應(yīng)報(bào)告耐藥。 流感嗜血桿菌耐藥率的提高，并不是只存在于某一地區(qū)或某一醫(yī)院，而是一個(gè)全國性的普遍問題，細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的多方面因素綜合形成的結(jié)果[16]。

綜上所述，本院流感嗜血桿菌感染特征以老年人多見；呼吸內(nèi)科分離株最高；男性高患者高于女性；感染率呈明顯的季節(jié)性分布。 對大多數(shù)抗菌藥物保持較高的敏感性，對氨芐西林、 復(fù)方新諾明、四環(huán)素耐藥率較高。

開展流感嗜血桿菌耐藥性監(jiān)測，分析該菌在本地區(qū)的流行特點(diǎn)、致病特性，為臨床規(guī)范用藥提供及時(shí)可靠的診療依據(jù)。