化學(xué)發(fā)光法用于注射新型冠狀病毒疫苗后抗體監(jiān)測和鑒別膠體金免疫層析法假陽性的價(jià)值*

劉 淼，趙思蒙，董一紅，張 巖，車冬麗，田 野，李卓敏，李 杰，吳吉兵，蔡嘉鏡，譚延國△

1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬復(fù)興醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100038；2.中國人民解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科，北京 100142；3.首都醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，北京 100038；4.首都醫(yī)科大學(xué)附屬復(fù)興醫(yī)院急診科，北京 100038;5.邁克生物股份有限公司，四川成都 611731

我國新型冠狀病毒肺炎疫情雖得到有效控制，但全球疫情仍不容樂觀[1]。我國疫情防控的關(guān)鍵仍是內(nèi)防反彈、外防輸入。大面積推廣新型冠狀病毒疫苗接種是實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的重要手段[2]。但關(guān)于采用適當(dāng)?shù)姆椒ūO(jiān)測疫苗接種后機(jī)體的免疫反應(yīng)和抗體的產(chǎn)生，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)接種無效者，為復(fù)種提供依據(jù)這一問題亟待解決。目前，臨床常用的抗體檢測方法為膠體金免疫層析法(金標(biāo)法)和化學(xué)發(fā)光法，檢測的抗體包括免疫球蛋白(Ig)M、IgG、IgA、總抗體(TAb)和中和抗體(NAb)[3-5]。但使用哪種檢測方法、檢測哪種抗體更合適，鮮有相關(guān)研究。新型冠狀病毒抗體是國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》[6]診斷標(biāo)準(zhǔn)中重要的一條。疫情初期，最先投入臨床的檢測方法為金標(biāo)法，在迅速滿足臨床需求的同時(shí)，其假陽性率偏高等問題也給臨床帶來了困擾，急需使用適當(dāng)?shù)姆椒▽Y查疑為陽性的結(jié)果予以鑒別[7-9]。本研究就注射新型冠狀病毒疫苗后抗體的產(chǎn)生規(guī)律及化學(xué)發(fā)光法在鑒別金標(biāo)法初篩陽性標(biāo)本中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 注射新型冠狀病毒疫苗的志愿者共22例，其中男7例，女15例；年齡27～52歲。均于2020年8月19日完成第2針疫苗(北京科興中維生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的新型冠狀病毒滅活疫苗克爾來福)注射(兩針間隔14 d)，分別于第2針疫苗注射后約1、3、6個月采集靜脈血。臨床日常檢測中采用金標(biāo)法檢測新型冠狀病毒抗體疑為陽性者共74例，均為使用金標(biāo)法試劑1[英諾特(唐山)生物技術(shù)有限公司]或金標(biāo)法試劑2(珠海麗珠試劑股份有限公司)篩查新型冠狀病毒抗體IgM或IgG疑為陽性者。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 采用含分離膠的真空采血管采集志愿者空腹靜脈血4 mL，4 000 r/min離心10 min分離血清，未能及時(shí)檢測時(shí)儲存于-80 ℃冰箱，恢復(fù)至室溫后再進(jìn)行檢測。

1.2.2檢測方法 所有標(biāo)本同時(shí)使用兩種金標(biāo)法試劑檢測新型冠狀病毒抗體IgG和IgM，化學(xué)發(fā)光法檢測新型冠狀病毒抗體IgM、IgG、IgA、NAb及TAb。使用i3000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(邁克生物科技股份有限公司生產(chǎn))及配套試劑(磁微粒化學(xué)發(fā)光法)完成5種新型冠狀病毒抗體的檢測。檢測原理：IgM和IgA為捕獲法，IgG為間接法，TAb為夾心法，NAb為競爭法。NAb為針對病毒RBD受體結(jié)合位點(diǎn)的抗體，其余4種是針對S蛋白和N蛋白的抗體[10]。當(dāng)NAb檢測結(jié)果>6.0 AU/mL時(shí)為陽性，以定量方式出具結(jié)果；其余4種抗體當(dāng)S/CO>1.0時(shí)判斷為陽性，以半定量的方式出具結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1注射新型冠狀病毒疫苗后抗體陽性率的變化

2.1.1化學(xué)發(fā)光法檢測5種抗體的變化規(guī)律 注射疫苗后第1個月，IgG、TAb和NAb陽性率均為90.00%，IgG和TAb聯(lián)合檢測陽性率為95.00%；除TAb和IgA外，其他抗體第3個月和第6個月的陽性率均明顯低于第1個月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)；TAb在注射疫苗后第6個月時(shí)，仍有63.64%的個體為陽性。IgA的血清陽性率不高，注射疫苗后第1個月僅為10.00%。見表1、圖1。

圖1 注射疫苗后第1、3、6個月各種抗體陽性率變化情況

2.1.2金標(biāo)法與化學(xué)發(fā)光法檢測新型冠狀病毒抗體IgM和IgG陽性率比較 在注射新型冠狀病毒疫苗后的第1、3、6個月，IgG的陽性率由高到低依次為化學(xué)發(fā)光法、金標(biāo)法試劑1、金標(biāo)法試劑2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而各種方法檢測的IgM陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 新型冠狀病毒疫苗注射后第1、3和6個月化學(xué)發(fā)光法對抗體的檢出情況(%，n=22)

2.2注射新型冠狀病毒疫苗后化學(xué)發(fā)光法檢測抗體水平的變化 注射疫苗后的第3個月和第6個月，IgG、IgM、TAb及NAb水平均明顯低于第1個月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；第3個月和第6個月各種抗體水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IgA抗體水平變化不大，均處于較低水平。見表2。

表2 注射疫苗后第1、3、6個月化學(xué)發(fā)光法檢測抗體水平變化情況[M(P25,P75),n=22]

2.3NAb、TAb和IgG間的相關(guān)性 NAb分別與IgG、TAb呈高度正相關(guān)(r=0.873，P<0.001；r=0.862,P=0.001)，IgG與TAb間無相關(guān)(P>0.05)。

2.4化學(xué)發(fā)光法對金標(biāo)法檢測新型冠狀病毒抗體疑為陽性者的鑒定價(jià)值

2.4.1化學(xué)發(fā)光法對金標(biāo)法的假陽性鑒別價(jià)值 74例采用金標(biāo)法篩查疑為新型冠狀病毒抗體陽性者中，9例采用化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后至少有1種抗體為陽性，且其中5例化學(xué)發(fā)光法檢測的5種抗體中除IgA外，其余4種抗體均為陽性。這9例患者金標(biāo)法結(jié)果如下：5例IgM和IgG抗體雙陽性，3例IgG抗體單陽性，1例IgM抗體單陽性。經(jīng)詢問病史，9例中有7例注射過新型冠狀病毒疫苗，1例為既往感染者，1例接種及既往感染情況不詳。其余化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果陰性者均無疫苗接種史和新型冠狀病毒感染史，且74例患者新型冠狀病毒核酸檢測結(jié)果均為陰性。見表3。

表3 9例采用化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后至少有1種抗體為陽性者

續(xù)表3 9例采用化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后至少有1種抗體為陽性者

2.4.2金標(biāo)法的預(yù)測價(jià)值及金標(biāo)法間相互復(fù)核的價(jià)值 74例采用金標(biāo)法篩查疑為新型冠狀病毒抗體陽性者中，金標(biāo)法試劑1和(或)金標(biāo)法試劑2 IgM和IgG雙陽性者共8例，其中4例化學(xué)發(fā)光法為陽性；兩種金標(biāo)法試劑均為IgG單陽性者共4例，化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后2例為陽性；金標(biāo)法試劑1或金標(biāo)法試劑2 IgG單陽性者共8例，化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后僅1例為陽性；兩種金標(biāo)法復(fù)核后試劑均為IgM單陽性者共12例，化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后僅1例為陽性；金標(biāo)法試劑1或金標(biāo)法試劑2 IgM單陽性者共42例，化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢后結(jié)果均為陰性。

3 討 論

本研究顯示，新型冠狀病毒疫苗注射后第1個月，至少有95.00%的個體可產(chǎn)生包括TAb、NAb、IgG和IgM在內(nèi)的1種或多種抗體，雖然抗體水平和陽性率在注射疫苗后第3個月和第6個月時(shí)明顯降低，但第6個月時(shí)仍有63.64%的個體至少可檢測出1種抗體。一份來自新型冠狀病毒自然感染者的數(shù)據(jù)顯示，IgM在新型冠狀病毒肺炎癥狀發(fā)作后第2周達(dá)到峰值，陽性率為86.49%；IgG在新型冠狀病毒肺炎癥狀發(fā)作后的第5周陽性率達(dá)到100.00%[11]，這與本文來自疫苗接種者的研究結(jié)果相似。但自然感染者康復(fù)6個月后，仍有80%(12/15)的個體IgG抗體呈陽性[12]，高于本研究中的36.36%。分析原因，可能與自然感染相比，注射疫苗在接觸病毒抗原量和進(jìn)入機(jī)體方式上有本質(zhì)區(qū)別，也可能與本研究納入標(biāo)本數(shù)量較少有關(guān)。另外，疫苗接種后，看似抗體的持續(xù)時(shí)間有限，但根據(jù)北京科興中維生物技術(shù)有限公司公布的信息及自然感染者的研究數(shù)據(jù)顯示，患者或疫苗接種者體內(nèi)存在B細(xì)胞及T細(xì)胞的免疫記憶和應(yīng)答，再次接觸病毒時(shí)仍可有效地應(yīng)對病毒的感染[12]。

本研究顯示，在監(jiān)測注射疫苗后IgG和IgM的產(chǎn)生上，化學(xué)發(fā)光法明顯優(yōu)于金標(biāo)法，但是某些金標(biāo)法試劑也具有較高的陽性率(如金標(biāo)法試劑1在注射疫苗后1個月時(shí)即有75%的陽性率)。

NAb被認(rèn)為是抵御病毒的最有效、最直接的抗體，但由于條件有限，絕大多數(shù)機(jī)構(gòu)仍無法檢測該抗體[13]。本研究結(jié)果顯示，IgG、TAb分別與NAb有較強(qiáng)的相關(guān)性，其陽性率也基本一致，故臨床上使用化學(xué)發(fā)光法檢測IgG和TAb,基本可反映NAb的情況。

另外，雖然金標(biāo)法檢測新型冠狀病毒抗體較為方便，不需要特殊設(shè)備，但存在較多的假陽性[14-15]，對其結(jié)果進(jìn)行鑒別非常必要。本研究結(jié)果顯示，在74例金標(biāo)法檢測疑似陽性者中，化學(xué)發(fā)光法復(fù)核后僅9例陽性，此9例研究對象的檢測結(jié)果與流行病學(xué)史高度一致，故認(rèn)為化學(xué)發(fā)光法結(jié)果更接近真實(shí)結(jié)果，為鑒別金標(biāo)法假陽性的理想方法。

化學(xué)發(fā)光法復(fù)核金標(biāo)法檢測新型冠狀病毒抗體IgG和IgM的不同陽性模式，并分析兩種金標(biāo)法試劑檢測結(jié)果的符合性，發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光法對真陽性結(jié)果也有一定的預(yù)測價(jià)值。當(dāng)任何1種金標(biāo)法試劑IgM和IgG均為陽性時(shí)，或者兩種金標(biāo)法試劑IgG均為陽性時(shí)，真陽性可能性大；而1種金標(biāo)法試劑IgM單陽或兩種金標(biāo)法試劑IgM均陽性，其真陽性的概率很低。

化學(xué)發(fā)光法在監(jiān)測新型冠狀病毒疫苗接種后抗體的產(chǎn)生上，在接種后1個月和6個月時(shí)，分別有95.00%和63.64%個體至少可檢測到5種抗體中的1種，檢測IgG和TAb基本可以反映NAb的水平?；瘜W(xué)發(fā)光法可用于鑒定金標(biāo)法篩查疑為新型冠狀病毒抗體陽性的標(biāo)本。