富硒黃芪多糖對壩上長尾雞抗氧化功能、脂代謝、組織硒含量及免疫功能的影響

官麗輝，張立永*，劉海斌，關(guān) 琛，王志偉

(1.河北北方學院動物科技學院，河北 張家口 075131；2.張家口市畜牧技術(shù)推廣站，河北 張家口 075000； 3.張家口市第七中學，河北 張家口 075000)

【研究意義】深受京津冀地區(qū)來壩旅游人群喜歡的壩上長尾雞具有抗嚴寒，抗病性好，耐粗飼，適應(yīng)性強等特點。壩上長尾雞屬于蛋肉兼用型雞種，外形體態(tài)勻稱，其蛋質(zhì)優(yōu)良，營養(yǎng)豐富，雞肉風味鮮美，具有重要的開發(fā)利用價值和應(yīng)用前景[1]。但由于生產(chǎn)性能較低，農(nóng)戶養(yǎng)殖缺乏積極性，再加上外來品種入侵，作為北方優(yōu)質(zhì)地方品種到了瀕臨滅絕的邊緣[2]?！厩叭搜芯窟M展】硒大致分為無機態(tài)硒和有機態(tài)硒[3]。酵母硒是以酵母為基礎(chǔ)開發(fā)出來的有機硒,有機硒比無機硒利于吸收，將安全劑量酵母硒添加到動物日糧中，可提高動物機體硒含量，調(diào)節(jié)機體各個系統(tǒng)生理活動。黃芪多糖 (Astragaluspolysaccharin,APS)[4]是一類大分子化合物，其呈淡黃色,粉末細膩,可溶于水,味微甜,在黃芪藥理作用中起決定性因素,具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫力和腎臟保護的功效。做好我國家禽生產(chǎn)發(fā)育過程中的抗氧化防治，提高其肉質(zhì)，是確保我國家禽行業(yè)健康發(fā)展的基礎(chǔ)和根本保障。正常狀態(tài)下，用來維持機體相對的平穩(wěn)，是在動物體內(nèi)的處于動態(tài)平衡的自由基和抗氧化物質(zhì)，當自由基蓄積打破這種平衡，發(fā)生損傷、氧化應(yīng)激，機體表現(xiàn)為免疫失調(diào)，進而發(fā)生炎癥和疾病[5]。脂代謝是指機體將攝入體內(nèi)的食物通過各種酶的作用下，使脂類能水解成供機體消化吸收的小分子物質(zhì)[6]。由于地區(qū)差異，中國約有較大一部分地區(qū)處于缺硒狀態(tài)[7]，人和動物攝取的硒量普遍較低，而很多研究表明，飼料中添加無機硒或有機硒能增加動物產(chǎn)品中硒的含量，所以畜禽產(chǎn)品是人體獲得硒的有效手段?！颈狙芯壳腥朦c】動物免疫主要通過藥物和疫苗接種[8]，但療效不佳，長期使用還造成畜禽產(chǎn)品藥物殘留，嚴重地損害人體健康，研究開發(fā)新型、安全飼料添加劑勢在必行。目前研究表明酵母硒或黃芪多糖單獨添加對禽類均有提高蛋品質(zhì)和常規(guī)生產(chǎn)性能上，但是酵母硒和黃芪多糖作為新型、綠色的復合添加劑還未見相關(guān)報道，二者共同添加能否更有效地去提升蛋品質(zhì)，是否能產(chǎn)生高有效的協(xié)同效應(yīng)提高組織硒含量，進而提高抗氧化能力和免疫力，有待進一步的研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本試驗以壩上長尾雞為研究對象，研究添加不同劑量的富硒黃芪多糖對壩上長尾雞的抗氧化能力、脂代謝、組織硒含量以及免疫功能的影響，探究出最佳添加劑量范圍，對地方特色的家禽生產(chǎn)，生長培育提供一些科學，有價值，有理論的保障。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

含量≥98%的黃芪多糖，生產(chǎn)廠商為華北先泰藥業(yè)；3000 mg/kg的酵母硒，生產(chǎn)廠商為河北鴻韜生物。

1.2 試驗設(shè)計

試驗采用單因子試驗設(shè)計，選取健康狀況良好的30周齡體況良好的壩上長尾雞1000只，分為5個試驗組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)，每組10個重復，每個重復20只雞。試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%的富硒黃芪多糖。

1.3 試驗飼糧和飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧成分和營養(yǎng)水平根據(jù)我國的雞營養(yǎng)標準(NY/T33—2004)配制,見表1，不添加飼用抗生素及化學合成抑菌藥物。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.4 試驗動物的飼養(yǎng)管理

壩上長尾雞的采食、日常飼養(yǎng)按常規(guī)飼養(yǎng)管理操作進行，每天檢查料槽進食情況，供水保持正常，及時清糞。試驗前，雞的生活住處和飲食工具要進行全面打掃和清潔消毒。開始后每2～4 d要全面消毒并要及時清潔。

1.5 測定指標與方法

1.5.1 抗氧化能力的測定 試驗結(jié)束后，隨機取樣，取出雞的血清，用相應(yīng)的試劑盒分別測定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量。

1.5.2 脂代謝的測定 隨機取樣，每組取3只蛋雞的血漿和肝臟，采用血漿總膽固醇試劑盒測定禽蛋中膽固醇的含量，測定各組雞肝臟肌內(nèi)脂肪沉積是否為正常水平。

1.5.3 組織硒含量的測定 試驗結(jié)束后，每個重復隨機取1個雞蛋，打碎后充分攪拌，取均勻的蛋液放入試管備用。每個重復隨機抽取1只雞，稱重后頸靜脈采血，收集于試管中，在室溫下靜置、待血液凝固后，將其離心(3000 r/min，8 min)，制備血清后待用。將試驗雞只放血致死 后迅速取出肝臟，腎臟。將肝臟和腎臟制成10%的組織勻漿液。參照 GB/T 13883—2008 的方法處理樣品并定容，利用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定肝臟、腎臟、血清，雞蛋中硒的含量。

1.5.4 免疫功能的測定 試驗結(jié)束后，將雞宰殺剝離并摘取胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官，在將其表面水分用濾紙擦干后稱重，記錄。并計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)。

1.5.5 抗體水平的測定 每個處理組雛雞分別在3、7、10日齡采血分離血清，用β-微量法檢測新城疫和禽流感抗體效價，結(jié)果以Ib平均值表示。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進行單因子方差檢驗及差異顯著性，結(jié)果用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞血清抗氧化能力的影響

由表2可知，隨著富硒黃芪多糖含量的遞加，III組的SOD比比I組提高0.13%，差異顯著(P<0.05)，和其它組別相比較則無顯著差異(P>0.05)。III組的GSH-Px比I組提高0.4%，差異顯著(P<0.05)，與其他各組相比較則無顯著差異(P>0.05)，MDA含量在III組含量最低，但與其它各組差異均不顯著(P>0.05)。試驗結(jié)果顯示，富硒黃芪多糖能提高壩上長尾雞的抗氧化能力，且0.5%添加劑量效果最佳。

2.2 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞脂代謝的影響

由表3可知，隨著富硒黃芪多糖的含量從0.1%添加到0.9%時，血漿膽固醇III組分別比I、II、IV、V組降低0.9%、0.6%、0.3%、0.6%，表現(xiàn)出差異顯著(P<0.05)：肝臟膽固醇III組比I、II、IV、V組分別降低4.9%、4.2%、1.6%、3.8%，沒有表現(xiàn)出顯著差異(P>0.05)。對于甘油三酯來說，血漿III組比V組降低了0.9%，表現(xiàn)為差異顯著(P<0.05)，與其它組相比較表現(xiàn)出無顯著差異(P>0.05)，肝臟III組比V組降低了0.98%，差異顯著(P<0.05)，與I、II、IV組差異不顯著(P<0.05)，通過試驗數(shù)據(jù)分析，可見富硒黃芪多糖顯著影響了血漿和肝臟中膽固醇和甘油三酯的含量(P<0.05)，從而調(diào)節(jié)壩上長尾雞的脂代謝。

表2 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞抗氧化能力的影響

表3 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞脂代謝的影響

2.3 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞組織硒含量的影響

由表4可知，蛋硒含量在Ⅲ組最高，較其它組分別提高4.67%、4.28%、4.04%和4.28%(P<0.05)。Ⅲ組的血清硒含量較Ⅰ組和Ⅴ組分別顯著提高6.60%和4.87%(P<0.05)。Ⅲ組的肝臟硒含量分別比Ⅰ組和Ⅴ組提高4.79%和4.12%(P<0.05)。Ⅲ組的腎臟硒含量較其它組分別提高4.61%、3.58%、3.95和4.77%(P<0.05)。Ⅲ組的血清硒含量和肝臟硒含量與Ⅱ組、Ⅳ組和Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)。本試驗數(shù)據(jù)說明隨著日糧中富硒黃芪多糖劑量的增加，壩上長尾雞的組織硒含量都呈現(xiàn)出先升高后降低的規(guī)律，以0.5%劑量效果最佳。

2.4 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞免疫器官指數(shù)的影響

由表5可知，胸腺指數(shù)：Ⅲ組最高，與其他各組差異顯著(P<0.05)，比最低的Ⅴ組顯著提高16%。Ⅲ組的脾臟指數(shù)較Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ組分別提高19.0%、13.0%、15.0%，差異顯著(P<0.05)，與Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)。法氏囊指數(shù)：Ⅲ組與低劑量Ⅰ組、Ⅱ組差異顯著(P<0.05)，與Ⅳ組、Ⅴ組間差無顯著差異(P>0.05)。富硒黃芪多糖有增強壩上長尾雞免疫功能的作用。

表4 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞組織硒含量的影響

表5 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞免疫器官指數(shù)的影響

2.5 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞抗體水平的影響

由表6可知，3日齡的壩上長尾雞各組間新城疫抗體效價無明顯差異(P>0.05)。7日齡的壩上長尾雞，Ⅲ組的抗體效價是最高的，與 Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ組差異顯著(P<0.05)，比最低的Ⅴ組提高18.0%。10日齡：Ⅰ組與Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組相比差異顯著(P<0.05)。結(jié)果表明富硒黃芪多糖對壩上長尾雞新城疫抗體效價有提高作用。

由表7可知，壩上長尾雞禽流感抗體效價在3日齡時各試驗組間差異都不顯著(P>0.05)。7日齡：與Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ組相比，Ⅲ組分別顯著提高16.0%、12.0%、19.0%(P<0.05)。10日齡：Ⅲ組與Ⅰ組差異顯著，提高19.0%(P<0.05)，與其它組差異不顯著(P>0.05)。表明富硒黃芪多糖能提高壩上長尾雞禽流感抗體效價。

3 討 論

3.1 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞血清抗氧化能力的影響

目前關(guān)于怎樣提高雞的抗氧化能力多偏向于家禽的飼料上，而現(xiàn)用的飼料配方中由于營養(yǎng)物質(zhì)相對豐富，但是卻缺乏某些關(guān)鍵性的添加劑，從而使得家禽攝入營養(yǎng)物質(zhì)后，體內(nèi)脂肪含量偏高，導致其抗氧化能力顯著下降。因此，選擇合適的抗氧化添加劑對進一步發(fā)展我國家禽養(yǎng)殖行業(yè)至關(guān)重要。養(yǎng)殖中常見的抗氧化劑有硒、植物提取物、殼聚糖、微生態(tài)制劑和黃芪多糖等，尤以有機硒和多糖類的活性突出[9-10]。靳錄洋[11]觀察不同濃度的黃芪多糖對正常羅曼雛雞抗氧化功能的影響，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖作為天然抗氧化劑使血清中GSH-Px和SOD活性明顯升高，降低丙二醛的含量，增強畜禽的機體免疫性、抗病性，具有良好的研究意義。Jing等[12]研究發(fā)現(xiàn)，富硒可提高血清中GSH-Px 和SOD活性,此外，組織中相關(guān)產(chǎn)物中的MDA含量降低，延遲氧化時間，提高了生物體的抗氧化性能，Han等[13]也證實飼糧添加酵母硒對血清GSH-Px 和SOD的活性有顯著提高。與對照組相比[14]，黃芪多糖對羥自由基和超氧陰離子有較好的清除作用，而富硒黃芪多糖比無硒黃芪多糖的清除能力和總還原力更強，黃芪多糖的抗氧化力與多糖和硒的濃度呈現(xiàn)積極的正相關(guān)。本試驗結(jié)果與上述報道基本一致。富硒黃芪多糖能提高壩上長尾雞血清抗氧化能力，也進一步說明黃芪多糖與硒在抗氧化方面具有良好協(xié)同效應(yīng)，探究其原因是因為多糖等物質(zhì)可以提高清除超氧自由基的速度，達到減少自由基的目的，而硒恰恰能與單糖上2個順式相連的羥基能夠形成穩(wěn)定的抗氧化物，進一步發(fā)揮多糖和硒的生理活性，產(chǎn)生更強的抗氧化協(xié)同效應(yīng)。

表6 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞新城疫抗體效價的影響

3.2 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞脂代謝的影響

飼料中常添加亞硒酸鈉、三氯化富硒和黃芪多糖等添加劑對禽類的脂代謝可起到較好地調(diào)節(jié)作用，尤以酵母硒和黃芪多糖最為突出。而膽固醇和甘油三酯是影響脂代謝的首要因素，它們水平的高低直接影響了機體調(diào)節(jié)脂代謝的速度。作為機體必不可缺的，對細胞膜的成份和激素起重大作用的膽固醇，其本身是一種脂質(zhì)。甘油三酯就是所謂的脂質(zhì)分子，并且在肝臟脂肪等器官和組織可以合成。而且甘油三酯具有和三磷酸腺苷(ATP)一樣的作用，提供能量給機體的大部分來進行各種活動。王澤明[15]等發(fā)現(xiàn)不同硒源未對蛋雞血漿膽固醇和甘油三酯產(chǎn)生明顯的效應(yīng)。而Attia等[16]研究表明，飼糧中添加有機硒和無機硒都顯著降低血漿和肝臟膽固醇含量，二者互作也產(chǎn)生協(xié)同促進作用，其中以0.4 mg/kg有機硒組為最佳。楊澤民[17]研究表明黃芪多糖可以顯著降低肝臟和血漿膽固醇和甘油三酯的含量，血管中NO水平提高，內(nèi)皮減少損傷，提高了各種消化酶的活性，從而使微循環(huán)[18]，脂代謝得到改善。本試驗的結(jié)果表明富硒黃芪多糖能提高壩上長尾雞的脂代謝能力，可能是酵母硒和黃芪多糖的協(xié)同作用通過降低膽固醇和甘油三酯含量，提高對飼糧中脂質(zhì)的消化吸收,改善機體脂代謝,提高家禽的脂肪消化率，其具體機制有待進一步研究。

3.3 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞組織硒含量的影響

硒被吸收后，通過血液循環(huán)系統(tǒng)運輸至全身的各個組織和器官，各個器官組織對硒的留存能力和利用能力也有差別，蛋硒的含量提高可以改善蛋品質(zhì)從而更受消費者青睞，研究蛋硒含量的變化規(guī)律對于人類雞蛋補硒具有非常重要的現(xiàn)實意義。血清存在于血液中，是全身血液循環(huán)的必要條件，為動物機體輸送有益物質(zhì)。機體內(nèi)主要代謝硒元素的器官是肝臟，日糧中的硒元素經(jīng)過消化吸收后進入血液當中，血液把硒元素輸送到肝臟，用來合成體蛋白質(zhì)，大量的體蛋白在肝臟中產(chǎn)生。腎臟是主要排出體內(nèi)多余的硒元素的器官之一，大量硒元素滯留腎臟中，而這些硒元素會被機體主要的解毒器官—肝臟吸收，導致肝臟硒含量也會顯著提高。因此了解血清硒含量、肝臟硒含量和腎硒含量對于了解富硒黃芪多糖在起到一定積極促進作用的同時是否對蛋雞血清、肝臟和腎臟的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不良影響有一定的指導意義。周建軍等[19]在試驗雞只的日糧中添加酵母硒后，發(fā)現(xiàn)蛋硒含量會顯著提高。石雕等[20]在實驗中日糧中添加富硒酵母顯著提高了蛋雞血清硒和肝臟硒含量。朱金林等[21]在酵母中添加硒增加了肝臟組織中硒含量。吳躍明等[22]試驗證明采食加硒日糧的動物腎中含有豐富的硒。Leeson等[23]用3種含量為0.30 mg/kg的硒代飼料飼喂 48 周齡白來航蛋雞后發(fā)現(xiàn)無機硒或酵母硒均能使雞蛋中硒含量明顯提高蛋。目前尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于富硒黃芪多糖作為添加劑對禽類組織硒含量影響的相關(guān)報道。本試驗數(shù)據(jù)表明，日糧中添加富硒黃芪多糖提高壩上長尾雞組織硒含量，與以上文獻的研究結(jié)果相符合。究其原因，一是黃芪本身就富含微量元素硒，在機體內(nèi)各個組織、器官富集硒[24]，二是黃芪多糖和酵母硒協(xié)同作用進一步促進硒元素參與動物體內(nèi)蛋白的合成，越來越多的含硒蛋白在其雞蛋中增加，從而使得試驗雞只的蛋硒含量提高。其協(xié)同作用也增強了消化系統(tǒng)的吸收功能，于是硒元素被大量吸收到了血液中，提高了血清硒含量。由于其協(xié)同作用富硒黃芪多糖中的硒元素被吸收的更快，吸收的程度的更高，含硒蛋白質(zhì)被大量運輸?shù)礁闻K中，而且肝臟利用有機硒合成蛋白質(zhì)的效率高，所以肝臟硒含量被提高。各組織對硒元素的需求量和利用速率有一定上限，當吸收的硒元素量滿足了各組織的需求后，多余的硒元素會被血液輸送至腎臟，在腎臟等待被排出體外，所以提高了腎臟的硒含量，進而提高機體免疫力和抗氧化能力，保護肝臟和腎臟。本試驗本著安全和有效的原則，推斷酵母硒與黃芪多糖共同添加為一種積極、安全的協(xié)同正效應(yīng)添加方式，且添加劑量以0.5%為佳。

3.4 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞免疫器官指數(shù)的影響

由于空氣污染、水污染及全球變暖等原因，家禽經(jīng)常會感染各種疾病，隨著患病率及死亡率的大大增加，從而給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。就壩上長尾雞養(yǎng)殖來說，重中之重是如何預(yù)防免疫系統(tǒng)疾病，這就需要我們了解壩上長尾雞自身的免疫狀態(tài)及其免疫機制[25]。胸腺、脾臟和法氏囊是禽類特有的體液免疫器官，胸腺和法氏囊與抗體形成有直接的關(guān)系，禽類中重要的外周免疫器官是脾臟，大部分淋巴細胞在這里發(fā)揮作用。一般情況下會認為，免疫器官指數(shù)的高低是由免疫增強或抑制來表現(xiàn)的[26]。趙云煥等[27]通過益生菌和黃芪多糖的互作作用，提高固始雞免疫器官指數(shù)。靳二輝等[28]發(fā)現(xiàn)肉雞免疫器官指數(shù)與日糧酵母硒是顯著的正相關(guān)。Gao等[29]發(fā)現(xiàn)在雞只飼養(yǎng)中黃芪多糖注射液能較好地提高肉雞脾臟、法氏囊及體質(zhì)量等免疫器官指標。本試驗結(jié)果得出富硒黃芪多糖能有效地提高壩上長尾雞的免疫器官指數(shù)，與上述文獻結(jié)論相一致。這是因為其一硒是免疫系統(tǒng)的非特異刺激因素，具有增強動物免疫系統(tǒng)功能的作用。其二黃芪多糖作為免疫增強劑能多途徑、多層面對免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)、促進作用，同時促進了免疫機能低下的動物免疫器官的生長發(fā)育，使免疫器官重量增加，從而使畜禽的免疫力大大提高。

3.5 富硒黃芪多糖對壩上長尾雞抗體水平的影響

隨著科學技術(shù)的發(fā)展，我國養(yǎng)雞業(yè)所面臨的健康現(xiàn)狀由于免疫雞群非典型新城疫[30]病例的日益增多，受到了嚴重的制約。在雞新城疫疫苗免疫后，新城疫抗體水平反映雞特異性體液免疫反應(yīng)。彭婷等[31]研究在家禽飼料中添加黃芪多糖不僅有助于免疫器官的發(fā)育，而且對新城疫病毒也有控制作用。郝桂英等[32]通過皮下注射黃芪多糖，得出黃芪多糖對新城疫有明顯的免疫效果，在一定劑量內(nèi)使用效果也可明顯增強。任宇皓等[33]實驗得出黃芪多糖的濃度與新城疫的抑制作用有關(guān)。吳紀經(jīng)[34]通過口服灌胃黃芪多糖使肉仔雞的新城疫抗體水平得到大大提高。大量試驗與綜述表明黃芪多糖或酵母硒均能提高新城疫抗體和禽流感抗體水平，延長疫苗免疫期。本試驗結(jié)果也證明二者在抗體效價方面具有與報道相似的作用，且協(xié)同促進作用更明顯，這可能是因為多糖與硒誘導機體內(nèi)產(chǎn)生的干擾素，可以干擾病毒在機體內(nèi)擴散，對機體體液、粘膜和細胞免疫能夠起到很好的促進和調(diào)節(jié)作用，同時也是較好的疫苗保護劑，對機體疫苗的免疫應(yīng)答及機體抗體水平的提高也有作用

4 結(jié) 論

本試驗條件下，在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平富硒黃芪多糖改善壩上長尾雞脂代謝的性能，避免了其脂肪肝，較好地提高壩上長尾雞的組織硒含量、免疫器官指數(shù)和抗體水平，從而增強壩上長尾雞的免疫力和抗氧化性，保證機體健康，促進動物生長。其中以0.5%的劑量更具優(yōu)勢。