七星丹外用安全性實(shí)驗(yàn)研究

陳倩倩，雷 晴，楊 婷，向浩瑜，肖 敏*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072)

七星丹是蜀中瘍醫(yī)大師文琢之教授苦心研究的成果，具有悠久的歷史，已在成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院應(yīng)用于臨床 60 余年，治愈了數(shù)以萬(wàn)計(jì)的皮膚慢性潰瘍患者，臨床療效滿意[1]。近年來(lái)對(duì)于丹藥外用的安全性越發(fā)重視，尤其是含汞的丹藥，外用含汞丹藥具有廣譜殺菌、消炎、袪腐生肌等作用，但缺乏臨床上相關(guān)的毒副作用檢測(cè)以及安全性研究。常見(jiàn)的不良反應(yīng)包括皮膚過(guò)敏反應(yīng)、惡心、腹痛等，重則可出現(xiàn)肝腎功能損傷及多器官衰竭[2-3]。因此我們?cè)谇捌谂R床研究的基礎(chǔ)上，擬對(duì)七星丹治療慢性皮膚潰瘍的安全性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，為臨床推廣打下基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雄性，體重 180～200 g。由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(川)2014-189。

1.2 藥品試劑

七星丹及九一丹均由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供。七星丹藥物組成：煅石膏、寒水石各30 g，硼砂、朱砂、輕粉、銀珠、冰片各9 g；九一丹藥物組成：紅升丹3 g，鍛石膏27 g；青霉素鉀溶液(生產(chǎn)批號(hào)：(2012)120151254)；0.8%硫化鈉(生產(chǎn)批號(hào)：CAS1313-84-4)；10%水合氯醛(生產(chǎn)批號(hào)：CAS302-17-0)；50%冰醋酸溶液(生產(chǎn)批號(hào)：110314)；1∶5 000呋喃西林溶液(生產(chǎn)批號(hào)：040804)。

1.3 檢驗(yàn)試劑

Mouse ALT ELISA KIT，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生產(chǎn)批號(hào)：ZC-38191)；Mouse AST ELISA KIT，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生產(chǎn)批號(hào)：ZC-38192)；Mouse BUN ELISA KIT，貨號(hào)：ZC-38534，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司生產(chǎn)。

2 研究方法

2.1 大鼠慢性潰瘍模型的建立[4]

健康 SD 大鼠 15 只，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)飼養(yǎng)3天后，肌注青霉素鉀溶液(4 000 U/只)，連續(xù)4 d，防止感染。以8%硫化鈉給大鼠背部脫毛，腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.3 mL/100 g)，在背部制備1.5 cm×2 cm缺損性創(chuàng)面，之后以50%冰醋酸溶液涂創(chuàng)面(1次/d，7 d)，形成慢性皮膚潰瘍模型。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

按體質(zhì)量將造模成功的大鼠運(yùn)用區(qū)組隨機(jī)的方法分為3組：空白對(duì)照組、九一丹組、七星丹組。一周后開(kāi)始給藥，給藥前用生理鹽水棉球?qū)⑺袧兇笫蟮膭?chuàng)面清洗，再以1∶5 000呋喃西林溶液清潔創(chuàng)面；九一丹組外用九一丹18.75 mg/cm2、七星丹組外用七星丹37.5 mg/cm2“飛”到潰瘍面上[5]，兩層消毒干紗布覆蓋后用醫(yī)用膠帶固定，每天固定時(shí)間換藥1次(早上8點(diǎn))；空白組只采取呋喃西林溶液外涂；各組大鼠連續(xù)給藥28 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 生化指標(biāo)檢測(cè) 檢測(cè)大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。取大鼠腹主動(dòng)脈5～8 mL(不加抗凝劑)，分離血清，采用ELISA檢測(cè)大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。

2.3.2 大鼠肝臟、腎臟組織病理學(xué)檢測(cè) 最后 1 次給藥后的第 2 天，給大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL /100 g)麻醉處死，取出肝臟、腎臟并剝除脂肪和結(jié)締組織，用生理鹽水沖洗，濾紙將水分吸干，再放入-20℃冰箱中保存。按照常規(guī)方法制備石蠟切片，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟、腎臟組織病理改變。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 七星丹對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

觀察七星丹對(duì)大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的影響。與空白組相比，各組大鼠(n=5)血清中ALT、AST、BUN濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，均在正常范圍內(nèi)，表明外用七星丹對(duì)SD大鼠血生化指標(biāo)未造成不良影響。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清中ALT、AST、BUN濃度的變化

3.2 七星丹對(duì)大鼠肝臟、腎臟的影響

大鼠肝臟及腎臟HE染色后，觀察結(jié)果如下。

(1)空白組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；肝小葉內(nèi)肝細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，部分見(jiàn)雙核；其中2例(2/5)見(jiàn)肝細(xì)胞輕微或輕度空泡變性，胞質(zhì)染色不均勻，內(nèi)見(jiàn)數(shù)量不等的空泡；肝竇無(wú)明顯擴(kuò)張、瘀血或炎細(xì)胞浸潤(rùn)；門(mén)管區(qū)內(nèi)小葉間靜脈、動(dòng)脈和膽管結(jié)構(gòu)完整清晰；未見(jiàn)其他明顯病理變化(見(jiàn)圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見(jiàn)明顯毛細(xì)血管基底膜增厚或炎性滲出；腎小管排列緊密，管狀結(jié)構(gòu)規(guī)則，輪廓清晰，無(wú)明顯萎縮或擴(kuò)張；腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞呈單層排列，排列整齊緊密，胞核大而圓，核仁明顯，胞質(zhì)染色較為均勻；間質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)明顯充血、出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn)或纖維組織增生；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見(jiàn)明顯病理變化(見(jiàn)圖1、圖2)。

(2)九一丹組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；其中3例(3/5)見(jiàn)肝細(xì)胞輕微空泡變性，1例(1/5)中央靜脈周?chē)?jiàn)少量肝細(xì)胞小灶狀壞死，胞核固縮或碎裂，胞質(zhì)崩解，細(xì)胞形態(tài)模糊不清；肝竇無(wú)明顯擴(kuò)張、瘀血或炎細(xì)胞浸潤(rùn)；門(mén)管區(qū)結(jié)構(gòu)完整清晰；未見(jiàn)其他明顯病理變化(見(jiàn)圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見(jiàn)明顯毛細(xì)血管基底膜增厚或炎性滲出；其中3例(3/5)少量腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死胞質(zhì)染色不均勻，胞核固縮、碎裂或溶解消失；2例(2/5)少量腎小管上皮細(xì)胞增生，可見(jiàn)細(xì)胞核腫大，排列緊密，數(shù)量增多，核分裂象不明顯；其中1例(1/5)間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少量纖維組織增生伴淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見(jiàn)明顯病理變化(見(jiàn)圖1、圖2)。

(3)七星丹組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；其中1例(1/5)見(jiàn)肝細(xì)胞輕微空泡變性，3例(3/5)少量肝細(xì)胞呈點(diǎn)狀或小灶狀壞死，胞核固縮或碎裂，胞質(zhì)崩解，細(xì)胞形態(tài)模糊不清；其中1例(1/5)肝竇輕微擴(kuò)張、瘀血；門(mén)管區(qū)結(jié)構(gòu)完整清晰；未見(jiàn)其他明顯病理變化(見(jiàn)圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見(jiàn)明顯毛細(xì)血管基底膜增厚或炎性滲出；2例(2/5)少量腎小管上皮細(xì)胞變性，其中1例(1/5)少量腎小管上皮細(xì)胞壞死及增生；1例(1/5)間質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管輕微充血；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見(jiàn)明顯病理變化(圖1、圖2)。

圖1 各組大鼠肝臟HE染色結(jié)果

圖2 各組大鼠腎臟HE染色結(jié)果

4 討論

慢性皮膚潰瘍(CSU)因其遷延不愈或愈后極易復(fù)發(fā)，故稱(chēng)之為難治性潰瘍，且多合并下肢靜脈曲張、糖尿病等疾病，給患者帶來(lái)極大的精神折磨和身體摧殘。慢性皮膚潰瘍病因較為復(fù)雜，目前尚未有明確的治療指南，現(xiàn)階段治療手段包括：①藥物治療(系統(tǒng)和局部)；②外科手術(shù)；③高壓氧療；④生物治療等[6]。其中大部分治療花費(fèi)較為昂貴，患者及其家屬需承擔(dān)較大的經(jīng)濟(jì)壓力。

七星丹作為我院皮膚科專(zhuān)家文琢之教授的研究成果，主要用于臨床治療慢性皮膚潰瘍，具有操作簡(jiǎn)易、療效確切的優(yōu)點(diǎn)。該方由煅石膏、寒水石、硼砂、朱砂、輕粉等藥物組成，對(duì)各類(lèi)潰瘍都有很強(qiáng)的解毒消腫、生肌斂瘡作用，同時(shí)可促進(jìn)創(chuàng)面愈合，明顯縮短患者的治療時(shí)間[7]。

外用丹藥在當(dāng)今的臨床治療上越來(lái)越常見(jiàn)，也是中醫(yī)特色治療手段之一。外用丹藥包含的藥物常涉及雄黃、硫黃、朱砂、鉛丹、砒石等“有毒”中藥，故其安全性是不容忽視的問(wèn)題，需要引起臨床醫(yī)師的高度重視[8]。七星丹中朱砂的主要成分為硫化汞(Hg S)，清·黃元御《長(zhǎng)沙藥解》有言：“朱砂，味甘，微寒，入手少陰心經(jīng)，善安神魂，能止驚悸。”此外朱砂還有收斂生肌的作用?，F(xiàn)代臨床研究表明，外用朱砂具有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)生長(zhǎng)因子分泌等作用[9]，但其在臨床上可能因使用的劑量、創(chuàng)面面積、治療時(shí)間等導(dǎo)致汞蓄積。汞在不同形態(tài)下導(dǎo)致的汞中毒所表現(xiàn)的臨床癥狀有所不同，其中以有機(jī)汞毒性最大，因其在全身可廣泛分布，可造成嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)損傷[9]；朱砂等含汞藥物是以無(wú)機(jī)汞的形式存在，其對(duì)機(jī)體造成的損傷主要是損傷肝腎等代謝相關(guān)臟器。張伊莉等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)皮膚吸收所導(dǎo)致的汞中毒以亞急性中毒為主，皮膚過(guò)敏反應(yīng)并不突出，部分患者首發(fā)疾病為腎系病。在治療慢性皮膚潰瘍時(shí)，七星丹中的含汞成分因皮膚的不完整性會(huì)通過(guò)皮膚吸收入血，若潰瘍創(chuàng)面過(guò)大、治療時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等將會(huì)在相應(yīng)的器官中產(chǎn)生汞蓄積，尤其是蓄積在腎臟的近端小管和集合管[9、11-12]。因此，確保外用七星丹的安全性十分必要。

本研究以客觀數(shù)據(jù)揭示了外用丹藥——七星丹治療皮膚慢性潰瘍的有效性和安全性，為臨床提供了可資借鑒的治療方法，為繼承和發(fā)揚(yáng)中醫(yī)外科學(xué)盡綿薄之力。