“壯醫(yī)水蛭活體療法 ”治療用水蛭四級(jí)凈化流程

周維海 李煥華 梁子茂 潘韋情 梁江洪

1.廣西科康科技集團(tuán)有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院,廣西 南寧 530001

水蛭，俗稱螞蟥，而螞蟥唾液腺分泌的水蛭素，則是當(dāng)今世界上發(fā)現(xiàn)的抗凝血酶活性最高的天然物質(zhì)，從而注定了其與醫(yī)藥領(lǐng)域有著密切的淵源。

人類在醫(yī)療發(fā)展進(jìn)程中應(yīng)用水蛭的歷史可追溯到古埃及、古羅馬和古希臘時(shí)期。法國外科醫(yī)生Francois Broussais(1772～1838)于19世紀(jì)初將水蛭吸血應(yīng)用于人體治療而引起轟動(dòng)，2004年8月，法國Ricarimpex公司飼養(yǎng)的水蛭獲得美國FDA醫(yī)用許可證及國際ISO9001認(rèn)證[1]。經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究[2]表明，吸血水蛭在吸吮血液分泌的唾液里含有許多復(fù)合狀態(tài)的生物活性成份，主要為天然水蛭素，它是一種小分子單鏈多肽，是顯著并專一的凝血酶特異性抑制劑，也是迄今為止人類發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的抗凝血天然物質(zhì)，且引起出血的副作用較小。另外還有抑菌成分、鎮(zhèn)痛成分、抗血栓、抗腫瘤等等。俄羅斯國家衛(wèi)生部也已正式批準(zhǔn)部分水蛭類藥物可用于冠心病等的臨床治療[1]。

在中國，水蛭活體療法及入藥使用也見諸多部典籍，如《本草拾遺》、《神農(nóng)本草經(jīng)》、《千金方》等等均有外治癰疽痞腫，內(nèi)治血瘀經(jīng)閉的作用[3]。水蛭生物療法又稱“蜞針療法”，在廣西等壯民族地區(qū)，人們稱為“壯醫(yī)水蛭治療”或“壯醫(yī)水蛭活體療法”，主要是采用生長于本地、也是我國古代用于臨床治療主要品種之一的“金邊螞蟥”(菲牛蛭)在人體的特定穴位上進(jìn)行叮咬吸血、并分泌水蛭素等活性物質(zhì)而達(dá)到治病的目的[7]。2011年，金邊螞蟥(菲牛蛭)作為廣西特色藥用動(dòng)物資源被收錄于《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》第二卷[8]；2013年被收錄于《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[9]。近年來，由于“壯醫(yī)水蛭活體療法”簡、便、驗(yàn)、廉的特點(diǎn)，其運(yùn)用越來越廣泛，主要涉及痛癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)急性發(fā)作、外科術(shù)后、皮膚病等，廣西壯族自治區(qū)已將其列入民族醫(yī)醫(yī)療服務(wù)項(xiàng)目[6]。因此，對于治療用的活體水蛭的需求量越來越大，質(zhì)量要求也越來越高。而在我國，該領(lǐng)域的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)尚屬空白，鑒于此，為了配合完成廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院承擔(dān)的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號(hào)：Z20180119)課題，廣西科康科技集團(tuán)有限公司在菲牛蛭養(yǎng)殖、凈化及天然水蛭素提取二十多年耕耘的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從各階段梳理優(yōu)化菲牛蛭凈化流程，形成專供“壯醫(yī)水蛭活體療法”人體治療的菲牛蛭活體四級(jí)凈化相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或指標(biāo)，填補(bǔ)國內(nèi)“醫(yī)用水蛭”標(biāo)準(zhǔn)的空白。

1 “壯醫(yī)水蛭活體療法”治療用水蛭四級(jí)凈化流程規(guī)范

在普通藥用水蛭養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，必須經(jīng)過一、二、三、四級(jí)凈化，經(jīng)第三方專業(yè)機(jī)構(gòu)對相關(guān)病原微生物的檢驗(yàn)合格后，方能作為“醫(yī)用水蛭”用于患者身體進(jìn)行活體治療。

本流程主要適用于廣西科康科技集團(tuán)有限公司提供給廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院承擔(dān)的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號(hào)：Z20180119)課題及所有使用于人體治療的活體菲牛蛭的凈化養(yǎng)殖過程。該公司生產(chǎn)的治療用活體菲牛蛭依次嚴(yán)格經(jīng)過以下4個(gè)等級(jí)的養(yǎng)殖周期總共4個(gè)月的凈化養(yǎng)殖，最后經(jīng)第三方檢測不含有特定的病原微生物和寄生蟲。

本流程主要對菲牛蛭的成蟲選擇、場地、環(huán)境、包括溫度、空氣、水質(zhì)以及凈化養(yǎng)殖的技術(shù)要求、養(yǎng)殖周期、質(zhì)量控制、衛(wèi)生檢測等方面進(jìn)行規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化認(rèn)定。分階段描述如下。

1.1 一級(jí)凈化 只經(jīng)過一級(jí)凈化養(yǎng)殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第二級(jí)凈化養(yǎng)殖室繼續(xù)進(jìn)行凈化養(yǎng)殖。

1.1.1 活體成蟲選擇 挑選本公司陸川養(yǎng)殖場按“廣西菲牛蛭規(guī)范化養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(sop)”[4]養(yǎng)殖、繁育二代以上的菲牛蛭(金邊螞蟥)健康成蟲，體重4～8 g。

1.1.2 養(yǎng)殖環(huán)境 場地： 符合養(yǎng)殖環(huán)保要求的室內(nèi)飼養(yǎng)池。單池內(nèi)空：2 m(長)×1 m(寬)×0.15 m(深)， 貼白色瓷磚，設(shè)獨(dú)立給排水和防逃設(shè)施；室內(nèi)門窗完好，有防蟲紗網(wǎng)，有強(qiáng)制通風(fēng)設(shè)施； 溫度：室內(nèi)溫度控制在17～32 ℃； 空氣：保持空氣自然流通、無污染，室內(nèi)無異常臭味；水質(zhì)：100 m深以下地下水源，PH值6～8(呈中性)，含鹽量小于4%，溶氧量 1 mL/L以上；噪音：養(yǎng)殖場地禁止高聲喧嘩、機(jī)車馬達(dá)等噪音；光線： 避免陽光直射，盡量創(chuàng)造黑暗環(huán)境。

1.1.3 養(yǎng)殖技術(shù)要求 放養(yǎng)前準(zhǔn)備： 放養(yǎng)前5～10 d干池并進(jìn)行消毒處理，用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強(qiáng)氯精消毒養(yǎng)殖池及其周圍環(huán)境。放養(yǎng)前2天水池先注水；養(yǎng)殖密度： 500～600條/平米；換水頻率： 溫度不同可以分為幾種情況如表1。

表1 一級(jí)凈化不同環(huán)境溫度換水頻率

換水之前應(yīng)將水蛭和飼養(yǎng)池里面的排泄物用水清洗干凈，避免雜質(zhì)的殘留；投喂：整個(gè)養(yǎng)殖周期不喂食，待其體內(nèi)雜物自然排泄凈化；監(jiān)察：養(yǎng)殖周期中每天至少進(jìn)行2次巡檢，發(fā)現(xiàn)有病、死或體型不符合4～8 g范圍者要及時(shí)檢出并妥善處理。本養(yǎng)殖周期內(nèi)不能中途補(bǔ)充新的水蛭到養(yǎng)殖池內(nèi)；養(yǎng)殖周期：30 d；質(zhì)控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，體長8～16 cm。進(jìn)入下一環(huán)節(jié)凈化養(yǎng)殖；記錄表：做臺(tái)賬記錄，分工作記錄和工作報(bào)表(報(bào)表另印)。內(nèi)容包括巡回檢查、清洗換水、生長情況、病死情況、現(xiàn)場環(huán)境狀況(溫度、濕度、空氣質(zhì)量等)，所飼養(yǎng)的水蛭做到分批登記，可追溯來源去向。

1.1.4 飼養(yǎng)員要求 飼養(yǎng)員要求身體健康，無傳染性疾病，無外傷，注意個(gè)人衛(wèi)生，進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)域必須穿戴統(tǒng)一的工作服裝。飼養(yǎng)周期內(nèi)采取飼養(yǎng)員負(fù)責(zé)制，即養(yǎng)殖周期內(nèi)不能換人，飼養(yǎng)員要對本批次養(yǎng)殖負(fù)責(zé)，是本批次產(chǎn)品質(zhì)量問題的直接追責(zé)者。

1.2 二級(jí)凈化養(yǎng)殖 經(jīng)過二級(jí)凈化養(yǎng)殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第三級(jí)凈化養(yǎng)殖室繼續(xù)進(jìn)行凈化養(yǎng)殖。

1.2.1 活體成蟲選擇 經(jīng)第一級(jí)凈化飼養(yǎng)后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭) ，體重在3～6 g之間。

1.2.2 養(yǎng)殖環(huán)境 同第一級(jí)凈化養(yǎng)殖要求。

1.2.3 養(yǎng)殖技術(shù)要求 放養(yǎng)前準(zhǔn)備：同第一級(jí)凈化養(yǎng)殖；養(yǎng)殖密度：每平方米水面放養(yǎng)400～500條；換水頻率： 溫度不同可以分為幾種情況如下表2。

表2 二級(jí)凈化不同環(huán)境溫度換水頻率

投喂 ：整個(gè)養(yǎng)殖周期不喂食；監(jiān)察：養(yǎng)殖周期中每天至少進(jìn)行2次巡檢，發(fā)現(xiàn)有病、死或體型不符合3～6 g范圍者要及時(shí)檢出并妥善處理，本養(yǎng)殖周期內(nèi)不能中途補(bǔ)充新的水蛭到養(yǎng)殖池內(nèi)；養(yǎng)殖周期：30 d；質(zhì)控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，活力好；記錄表：同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

1.2.4 飼養(yǎng)員要求 同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

1.3 三級(jí)凈化養(yǎng)殖 只經(jīng)過三級(jí)凈化養(yǎng)殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第四級(jí)凈化養(yǎng)殖室繼續(xù)進(jìn)行凈化養(yǎng)殖。

1.3.1 活體成蟲選擇 經(jīng)第二級(jí)凈化飼養(yǎng)后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭)，體重2～6 g。

1.3.2 養(yǎng)殖環(huán)境 場所：選擇符合養(yǎng)殖環(huán)保要求的養(yǎng)殖室，安裝冷暖空調(diào)，防蟲、通風(fēng)設(shè)施等。統(tǒng)一使用5000 mL的專用玻璃凈化養(yǎng)殖瓶飼養(yǎng)。養(yǎng)殖瓶按要求做好標(biāo)簽統(tǒng)一整齊擺放在專用貨架上； 空氣：保持空氣自然流通、無污染，室內(nèi)無異常臭味；溫度：室溫20～30 ℃；水質(zhì)：同第一級(jí)凈化要求；噪音：養(yǎng)殖場地禁止高聲喧嘩、機(jī)車馬達(dá)等噪音；光線：避免陽光直射，盡量創(chuàng)造黑暗環(huán)境。

1.3.3 養(yǎng)殖技術(shù)要求 養(yǎng)殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強(qiáng)氯消毒，并清洗干凈。放養(yǎng)前2 d養(yǎng)殖瓶先注水；養(yǎng)殖密度：30～50條/瓶；換水頻率：溫度不同可以分為幾種情況如下表3。

表3 三級(jí)凈化不同環(huán)境溫度換水頻率

投喂 ：整個(gè)養(yǎng)殖周期不喂食；監(jiān)察：養(yǎng)殖周期中每天至少進(jìn)行2次巡檢，發(fā)現(xiàn)有病、殘及過大過小的應(yīng)檢出妥善處理，中途不能補(bǔ)充新的水蛭到養(yǎng)殖瓶內(nèi)。周期內(nèi)發(fā)現(xiàn)有病死水蛭的，該養(yǎng)殖瓶的水蛭終止凈化養(yǎng)殖并妥善處理；養(yǎng)殖周期：30 d；質(zhì)控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，活力好；記錄表：同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

1.3.4 飼養(yǎng)員要求 同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

1.4 四級(jí)凈化養(yǎng)殖 只有經(jīng)過第四級(jí)凈化養(yǎng)殖并檢驗(yàn)合格的活體水蛭才是合格的醫(yī)用水蛭，可以安全用于水蛭活體治療。

1.4.1 活體成蟲選擇 經(jīng)第三級(jí)凈化飼養(yǎng)后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭) ，體重2～5 g。

1.4.2 凈化養(yǎng)殖環(huán)境 場所：選擇符合養(yǎng)殖環(huán)保要求的類GMP實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)場所，空氣：潔凈程度達(dá)10萬級(jí)以上，統(tǒng)一使用5000 mL的專用玻璃凈化養(yǎng)殖瓶飼養(yǎng)。養(yǎng)殖瓶按要求做好標(biāo)簽統(tǒng)一整齊擺放在專用貨架上；溫度：室溫20～30 ℃；水質(zhì)：100 m深以下地下水源，經(jīng)過RO膜凈化處理，達(dá)飲用純凈水要求,PH值呈中性，溶氧量為1 mL/L以上；噪音：養(yǎng)殖場地禁止高聲喧嘩、機(jī)車馬達(dá)等噪音，室內(nèi)禁用電子電器設(shè)備；光線：避免陽光直射，盡量創(chuàng)造黑暗環(huán)境。

1.4.3 養(yǎng)殖技術(shù)要求 養(yǎng)殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強(qiáng)氯精消毒，并清洗干凈。放養(yǎng)前2天養(yǎng)殖瓶先注水；養(yǎng)殖密度：20～30條/瓶；換水頻率：溫度不同可以分為幾種情況如下表4。

表4 四級(jí)凈化不同環(huán)境溫度換水頻率

投喂：同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求，整個(gè)周期不投喂；監(jiān)察：每天至少進(jìn)行2次巡檢，發(fā)現(xiàn)有病、殘及過大過小的應(yīng)檢出妥善處理，中途不能補(bǔ)充新的水蛭到養(yǎng)殖瓶內(nèi)。周期內(nèi)發(fā)現(xiàn)有病死水蛭的，該養(yǎng)殖瓶的水蛭終止凈化養(yǎng)殖并妥善處理；養(yǎng)殖周期 ：30 d；質(zhì)控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，體長7～15 cm；記錄表：同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

1.4.4 飼養(yǎng)員要求 同第一級(jí)養(yǎng)殖凈化要求。

2 病原菌及微生物檢測

廣西科康科技集團(tuán)有限公司出品的活體治療用菲牛蛭是委托第三方微生物權(quán)威檢測機(jī)構(gòu)，對活體進(jìn)行“沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、溶血性鏈球菌、副溶血性弧菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、致瀉大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌”等九項(xiàng)專業(yè)級(jí)檢測，以確保每條菲牛蛭均達(dá)到人體治療級(jí)別。

3 “治療用菲牛蛭”四級(jí)凈化流程簡圖

二代以上人工繁育健康菲牛蛭成蟲→一級(jí)凈化養(yǎng)殖(無喂食，500～600條/平方米池養(yǎng)30 d)→二級(jí)凈化養(yǎng)殖(無喂食，400～500條/平方米池養(yǎng)30 d)→三級(jí)凈化養(yǎng)殖(無喂食，30～50條/5000 mL凈化養(yǎng)殖瓶相對恒溫環(huán)境養(yǎng)30 d)→四級(jí)凈化養(yǎng)殖(無喂食，20～30條/5000 mL凈化養(yǎng)殖瓶相對恒溫，10萬級(jí)無菌環(huán)境下養(yǎng)殖30 d)→按要求檢驗(yàn)合格→出品。

4 結(jié)語

“壯醫(yī)水蛭活體療法”是一種外治療法，作為一種侵入性外治療法，其安全性及可操作性是醫(yī)生和患者關(guān)注的重點(diǎn)之一，特別是部分患者在生活過程中曾經(jīng)有過活體水蛭叮咬的經(jīng)歷，會(huì)產(chǎn)生比較大的心理恐懼。如何消除患者的心理影響并切實(shí)保護(hù)患者的生命安全，是治療必須要首先解決的問題。廣西科康科技集團(tuán)有限公司長期致力于活體水蛭等的研究，而水蛭的凈化養(yǎng)殖是保證臨床活體治療安全的關(guān)鍵所在，所以一定要有科學(xué)、規(guī)范的操作規(guī)程。本流程于2016年修訂執(zhí)行，至2018年1月為配合提供給廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院承擔(dān)的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號(hào)：Z20180119)課題[5]用的菲牛蛭活體而進(jìn)一步優(yōu)化，并沿用至今，共為廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院、百色市中醫(yī)醫(yī)院、桂林市南溪山醫(yī)院及各級(jí)各類診所、中醫(yī)館、工作室等提供科研及治療用菲牛蛭活體約127011條，參與體驗(yàn)“壯醫(yī)水蛭活體療法”約21168人次，未出現(xiàn)出血、感染、嚴(yán)重過敏等不良反應(yīng)。“壯醫(yī)水蛭治療”等民間療法，綠色環(huán)保、安全可靠，“簡、便、廉、驗(yàn)”，值得進(jìn)一步研究推廣。