卵巢上皮性漿液性囊腺癌中APR3、HMGB1的表達(dá)及意義

李 釗 田曉娜 肖艷景 張春艷

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤死亡率最高的腫瘤疾病，其中卵巢上皮腫瘤是最常見(jiàn)的卵巢惡性腫瘤類型，其中以上皮性漿液性囊腺瘤最為常見(jiàn)。但由于卵巢上皮癌缺乏早期診斷的特異性臨床癥狀和腫瘤標(biāo)記物，患者確診時(shí)多已為癌癥中晚期且缺乏有效的治療手段，5年生存率顯著下降，不足25%[1]。因而，探尋早期診斷卵巢癌的特異性指標(biāo)并為治療提供新的靶點(diǎn)具有重要意義。截至目前，卵巢上皮癌的發(fā)病機(jī)制尚不明晰，多認(rèn)為可從基因和分子水平通過(guò)探索細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制，分析和尋找卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的主要原因[2]。文獻(xiàn)[3]提示凋亡相關(guān)蛋白3(apoptosis-related protein 3，APR3)可在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)并可參與腫瘤細(xì)胞的凋亡和分化過(guò)程。高遷移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)在結(jié)直腸癌、黑色毒瘤及乳腺癌等多種惡性腫瘤中均存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象，可通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)MARK等信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和抑制凋亡，但關(guān)于卵巢上皮癌的研究資料較少[4]。本文就卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織中APR3、HMGB1表達(dá)及意義進(jìn)行研究，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2020年1月我院保存的卵巢上皮性漿液性囊腺癌標(biāo)本60例，良性腫瘤70例(漿液性囊腺瘤)，同時(shí)選取卵巢漿液性囊腺癌標(biāo)本中正常卵巢組織35例作為對(duì)照，各組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)確診；②術(shù)前未行放化療等抗腫治療；③臨床病理資料完整；④患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他系統(tǒng)腫瘤；②合并有免疫系統(tǒng)疾病、急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病等。

表1 各組一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)本采用免疫組化染色法檢測(cè)APR3、HMGB1表達(dá)：取適量上皮性卵巢癌組織甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片后烤片2～3 h；二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水化；3次PBS緩沖液沖洗后清水沖洗；EDTA修復(fù)抗原；過(guò)氧化氫10 min孵育阻斷過(guò)氧化物酶，PBS緩沖液沖洗3次；拭去水分，滴加山羊血清，溫育2 h，分別滴加APR3、HMGB1一抗，4 ℃過(guò)夜孵育；分別吸除PBS液后滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗并進(jìn)行2 h室溫孵育，DAB溶液顯色；蘇木精復(fù)染；封片觀察；已知卵巢癌陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照；PBS代替一抗作陰性對(duì)照[5]。

1.3 結(jié)果判斷

400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，APR3主要在胞質(zhì)及細(xì)胞核中表達(dá)，為淡黃色或棕黃色染色顆粒樣或團(tuán)塊樣染色；HMGB1主要在胞質(zhì)中，表現(xiàn)為淡藍(lán)色背景下淡黃色或棕黃色染色顆粒樣或團(tuán)塊樣染色。染色陽(yáng)性為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)含有棕黃色和黃色顆粒，染色強(qiáng)度：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例：≤5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度得分之積≥4分為陽(yáng)性表達(dá)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組APR3和HMGB1表達(dá)比較

卵巢上皮性漿液性囊腺癌APR3、HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于卵巢漿液性囊腺瘤和正常卵巢組織(P<0.05)；卵巢漿液性囊腺瘤組織和正常卵巢組織APR3、HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組APR3和HMGB1表達(dá)陽(yáng)性率比較(例，%)

2.2 卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織APR3、HMGB1表達(dá)與臨床病理關(guān)系

卵巢上皮性漿液性囊腺癌患者FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級(jí)G3和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APR3、HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、G1+G2和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 卵巢上皮惡性腫瘤APR3、HMGB1表達(dá)與臨床病理關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

將卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織APR3與HMGB1蛋白表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：APR3與HMGB1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(γs=0.771，P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 卵巢上皮惡性腫瘤組織APR3與HMGB1蛋白相關(guān)性分析/例

3 討論

卵巢上皮性漿液性囊腺癌是卵巢惡性腫瘤最常見(jiàn)的病理類型，卵巢惡性腫瘤早期多無(wú)明顯的臨床癥狀，多因腹水等原因就診，超過(guò)4/5的患者確診時(shí)已為中晚期或存在腹腔內(nèi)種植及淋巴轉(zhuǎn)移，預(yù)后極差[7]。綜合治療是卵巢惡性腫瘤的主要治療方式[8]，對(duì)于早期的卵巢惡性腫瘤，手術(shù)切除能夠延長(zhǎng)患者生存期，而對(duì)于中晚期的卵巢癌，更多的采取放化療等方式進(jìn)行治療。但卵巢惡性腫瘤具有高度惡性生物學(xué)行為，綜合治療的預(yù)后仍不滿意，因此對(duì)于卵巢惡性腫瘤發(fā)生及進(jìn)展的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行深入的研究，能夠?yàn)楦纳坡殉舶┑母深A(yù)治療及預(yù)后的改善提供進(jìn)一步的理論基礎(chǔ)。

APR3在細(xì)胞中廣泛分布并與細(xì)胞凋亡有關(guān)，有文獻(xiàn)[9-10]提示，經(jīng)全反式維甲酸誘發(fā)后細(xì)胞APR3可出現(xiàn)一定程度的升高。與蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)配比后發(fā)現(xiàn)凋亡基因Notch4與APR3的EGF樣功能區(qū)有接近一半的同源性，而Notch4在激活后能夠抑制線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在細(xì)胞發(fā)育和分化中具有重要作用，因而APR3也可能具有與Notch4同樣的生物學(xué)作用，但還需要機(jī)制研究證實(shí)[11]。HMGB1能夠介導(dǎo)細(xì)胞分化、血管形成及組織修復(fù)等多種病理生理活動(dòng)；HMGB1還屬于一類重要的致炎因子，與膿毒血癥的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切并參與惡性腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程[12]。HMGB1的過(guò)表達(dá)能夠抑制惡性細(xì)胞的凋亡過(guò)程，引起腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡失衡，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)[13]，在卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織中，APR3、HMGB1蛋白存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象，表達(dá)陽(yáng)性率要明顯高于良性的卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織，提示其可能在卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。

進(jìn)一步對(duì)臨床特征比較發(fā)現(xiàn)卵巢上皮性漿液性囊腺癌不同F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級(jí)G3和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APR3及HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、G1+G2和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。上述結(jié)果說(shuō)明APR3及HMGB1在卵巢上皮性漿液性囊腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移中具有重要作用，能夠評(píng)估卵巢上皮性囊腺癌的惡性程度及病情，其對(duì)腫瘤的臨床分期也具有一定的參考價(jià)值，上述結(jié)果也與Yu等[14]在宮頸組織的研究結(jié)果具有一致性。

本研究將卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織APR3與HMGB1蛋白進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：APR3與HMGB1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，該結(jié)果說(shuō)明卵巢上皮惡性腫瘤APR3、HMGB1表達(dá)上調(diào)可能通過(guò)某種機(jī)制相互促進(jìn)。研究[15]發(fā)現(xiàn)Bcl-2能夠促進(jìn)線粒體釋放APR3，而HMBG1的高表達(dá)能夠支持Bcl-2的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)線粒體途徑APR3的表達(dá)，使異常增生的腫瘤細(xì)胞凋亡受阻，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。此外，APR3的抑制細(xì)胞凋亡途徑與CIAP2抗凋亡蛋白高表達(dá)有關(guān)，APR3與CIAP2特異性結(jié)合后可解除對(duì)caspases的凋亡調(diào)控作用。筆者推測(cè)卵巢上皮腫瘤患者HMGB1的高表達(dá)能夠調(diào)控Bcl-2促進(jìn)線粒體釋放APR3，進(jìn)一步促進(jìn)APR3與CIAP2的結(jié)合，增加caspases的抑制而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，但其具體的信號(hào)分子通路和調(diào)控機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，卵巢上皮性漿液性囊腺癌組織中APR3、HMGB1表達(dá)上調(diào)，存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象，其表達(dá)水平與FIGO分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系，在卵巢上皮性漿液性囊腺癌中APR3、HMGB1存在相關(guān)關(guān)系。在卵巢上皮性囊腺癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，APR3、HMGB1參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程，并且可能通過(guò)共同的機(jī)制進(jìn)行相互調(diào)控，檢測(cè)APR3、HMGB1的表達(dá)情況對(duì)卵巢上皮性漿液性囊腺癌的病情評(píng)估具有一定的價(jià)值。