卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達(dá)變化及與患者預(yù)后的關(guān)系

任紅娟

(南陽市中心醫(yī)院，河南南陽473000)

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卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達(dá)變化及與患者預(yù)后的關(guān)系

任紅娟

(南陽市中心醫(yī)院，河南南陽473000)

摘要：目的觀察卵巢漿液性囊腺癌組織中微小RNA-20a(miR-20a)和Let-7a的表達(dá)變化，并探討二者與患者預(yù)后的關(guān)系。方法 卵巢漿液性囊腺癌患者93例，術(shù)中留取腫瘤組織。分別留取同期手術(shù)治療的卵巢交界性腫瘤患者(43例)及卵巢漿液性囊腺瘤患者(48例)的腫瘤組織，留取正常卵巢組織(40例份)。采用real-time PCR技術(shù)檢測不同組織中的miR-20a和Let-7a。采用Kaplan-Meier法分析卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果各種卵巢腫瘤組織中miR-20a表達(dá)量高于正常卵巢組織、Let-7a表達(dá)量低于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達(dá)量高于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織、Let-7a表達(dá)量低于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織(P均<0.05)。miR-20a、Let-7a與卵巢漿液性囊腺癌的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生情況有關(guān)(P均<0.05)。卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.489，P<0.05)。卵巢漿液性囊腺癌患者隨訪至2014年2月28日，miR-20a表達(dá)量>1.42者中位生存時(shí)間短于miR-20a表達(dá)量≤1.42者，Let-7a表達(dá)量<0.98者中位生存時(shí)間短于Let-7a表達(dá)量≥0.98者(P均<0.05)。結(jié)論 卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a呈高表達(dá)、Let-7a呈低表達(dá)，二者可能共同參與了卵巢漿液性囊腺癌的發(fā)生、發(fā)展，并與患者預(yù)后有關(guān)。

關(guān)鍵詞：卵巢腫瘤；卵巢漿液性囊腺癌；微小RNA；微小RNA-20a；Let-7a基因

卵巢癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤。由于卵巢位置較深，卵巢癌發(fā)現(xiàn)時(shí)多處于晚期，晚期病例尚無有效治療手段，患者病死率高[1]。卵巢漿液性囊腺癌是最常見的卵巢原發(fā)性腫瘤，具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移、侵襲能力[2,3]。微小RNA-20a(miR-20a)由miR-17-92簇基因編碼[4]，其在上皮來源的惡性腫瘤組織中高表達(dá)，與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展關(guān)系密切[5,6]。Let-7家族是miRNA成員之一，其中Let-7a是Let-7家族重要成員，具有抑癌基因作用[7,8]。本研究觀察了卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a和Let-7a的表達(dá)變化，并探討其意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2010年2月~2013年2月在我院擇期行手術(shù)治療的卵巢漿液性囊腺癌患者93例，年齡38~73(53.6±8.7)歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期Ⅰ期26例、Ⅱ期17例、Ⅲ期39例、Ⅳ期11例；中低分化74例、高分化19例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例、出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移63例。術(shù)中留取腫瘤組織。分別留取同期手術(shù)治療的卵巢交界性腫瘤患者(43例)及卵巢漿液性囊腺瘤患者(48例)的腫瘤組織，并留取正常卵巢組織(40例份)。各組標(biāo)本迅速保存于-70 ℃液氮中備檢。

1.2miR-20a、Let-7a檢測采用real-time PCR技術(shù)檢測各組織中的miR-20a、Let-7a。組織研磨后，用TRIzol總RNA提取試劑盒提取總RNA，并用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，取A260/A280≥1.8樣品完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)。miR-20a上游引物序列為5′-GCGGCGGTAAAGTGCTTATAGTG-3′，下游引物序列為5′-TGCAGGGTCCGAGGTAT-3′；Let-7a上游引物序列為5′-GCGCCTGAGGTAGTAGGTTG-3′，下游引物序列為5′-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3′。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性60 s，90 ℃變性45 s，74 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，連續(xù)進(jìn)行36個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品均設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔，以U6為內(nèi)參，以2-ΔΔCt代表miR-20a、Let-7a相對表達(dá)量。

2結(jié)果

2.1不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中miR-20a、Let-7a相對表達(dá)量比較各種卵巢腫瘤組織中miR-20a表達(dá)量高于正常卵巢組織、Let-7a表達(dá)量低于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達(dá)量高于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織、Let-7a表達(dá)量低于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織(P均<0.05)。詳見表1。

表1　不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中

注：與正常卵巢組織相比，*P<0.05；與卵巢漿液性囊腺瘤組織相比，#P<0.05；與卵巢交界性腫瘤組織相比，△P<0.05。

2.2miR-20a、Let-7a表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系不同臨床分期、不同分化程度、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生情況的卵巢漿液性囊腺癌患者腫瘤組織中miR-20a、Let-7a相對表達(dá)量相比，P均<0.05。詳見表2。

表2　miR-20a、Let-7a表達(dá)與卵巢漿液性

注：與Ⅰ、Ⅱ期者相比，*P<0.05；與中低分化者相比，#P<0.05；與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，△P<0.05；與有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者相比，☆P<0.05。

2.3卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達(dá)的相關(guān)性卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.489，P<0.05)。

2.4卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系卵巢漿液性囊腺癌患者隨訪至2014年2月28日。根據(jù)本研究結(jié)果，miR-20a相對表達(dá)量>1.42者(高表達(dá)組，71例)中位生存時(shí)間15.9個(gè)月，miR-20a相對表達(dá)量≤1.42者(低表達(dá)組，22例)中位生存時(shí)間19.2個(gè)月，兩組中位生存時(shí)間相比，P<0.05。Let-7a相對表達(dá)量<0.98者(低表達(dá)組，59例)中位生存時(shí)間14.5個(gè)月，Let-7a相對表達(dá)量≥0.98者(高表達(dá)組，34例)中位生存時(shí)間為19.5個(gè)月，兩組中位生存時(shí)間相比，P<0.05。詳見圖1、2。

圖1　卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達(dá)

圖2　卵巢漿液性囊腺癌組織中Let-7a表達(dá)

3討論

卵巢漿液性囊腺癌作為卵巢癌最常見的病理類型，具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、易轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，缺乏有效的早期診斷手段，約70%的患者確診時(shí)已處于晚期[9]。因此，相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)對早期防治有重要意義。研究[10~12]表明，miR-20a在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，其在多數(shù)腫瘤組織中高表達(dá)，作為癌基因而發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，miR-20a在卵巢漿液性囊腺癌、卵巢交界性腫瘤和卵巢漿液性囊腺瘤組織中相對表達(dá)量均高于正常卵巢組織，以卵巢漿液性囊腺癌組織中相對表達(dá)量最高；腫瘤臨床分期高、分化程度低、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者腫瘤組織中miR-20a相對表達(dá)量更高，提示卵巢病變過程中伴隨著miR-20a的異常表達(dá)，且miR-20a在卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

Let-7a是Let-7家族成員之一，可通過負(fù)向調(diào)控HMGA2表達(dá)從而抑制早期腫瘤進(jìn)展，可能發(fā)揮抑癌基因作用[13]。本研究結(jié)果顯示，Let-7a在卵巢漿液性囊腺癌、卵巢交界性腫瘤和卵巢漿液性囊腺瘤組織中相對表達(dá)量均低于正常卵巢組織，且卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)最低；臨床分期高、分化程度低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者腫瘤組織中Let-7a相對表達(dá)量更低。上述結(jié)果提示Let-7a低表達(dá)參與了卵巢病變進(jìn)程[14]，且Let-7a低表達(dá)可促進(jìn)卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示miR-20a高表達(dá)與Let-7a低表達(dá)可能在卵巢漿液性囊腺癌發(fā)病、侵襲過程中發(fā)揮協(xié)同作用[15,16]。

為進(jìn)一步探討miR-20a、Let-7a表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌患者預(yù)后的關(guān)系，我們根據(jù)以上研究結(jié)果分別界定miR-20a、Let-7a高表達(dá)組及低表達(dá)組，進(jìn)行生存分析后發(fā)現(xiàn)，miR-20a高表達(dá)組中位生存時(shí)間短于miR-20a低表達(dá)組，Let-7a低表達(dá)組中位生存時(shí)間短于Let-7a高表達(dá)組，提示miR-20a、Let-7a表達(dá)均與卵巢漿液性囊腺癌患者預(yù)后有關(guān)，miR-20a、Let-7a有望成為卵巢漿液性囊腺癌基因治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a呈高表達(dá)、Let-7a呈低表達(dá)，二者可能共同參與了卵巢漿液性囊腺癌的發(fā)生與進(jìn)展過程，且與患者預(yù)后有關(guān)，具體作用機(jī)制尚待進(jìn)一步明確。

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(收稿日期：2015-09-09)

中圖分類號(hào)：R737.31

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)07-0047-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.017