西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測血漿超敏肌鈣蛋白I 的性能驗(yàn)證

韓莉莉，余鴻，陳點(diǎn)，賴力，王堯城，劉尚龍，林賽梅，黃毅，沈曉麗

福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院·福建省立醫(yī)院 1 福建省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，2 福建省心血管病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 （福建福州 350001）

肌鈣蛋白已成為檢測急性心肌梗死的首選心肌損傷標(biāo)志物[1-2]，超敏肌鈣蛋白I（high-sensitivity cardiac troponin I，hs-cTnI）以其靈敏度高和陰性預(yù)測值高的優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用于臨床。為保證檢測結(jié)果可靠準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對檢測方法進(jìn)行確認(rèn)，并通過客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實(shí)滿足檢測預(yù)期用途的特定要求[3-4]。本研究使用西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測hs-cTnI，所用試劑及校準(zhǔn)品均為該儀器配套產(chǎn)品，并依據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）指南和國家認(rèn)可委相關(guān)文件要求，對精密度、正確度、線性范圍、可報(bào)告范圍、攜帶污染率、功能靈敏度和參考區(qū)間等主要性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，只有驗(yàn)證通過后方可進(jìn)行臨床檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建省立醫(yī)院心血管內(nèi)科2021年1—4月住院患者8例、健康體檢者20名的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，原裝配套hs-cTnI 試劑（批號(hào)03513183），伯樂心肌質(zhì)控品（批號(hào)67641、67643），試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 方法

采用西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標(biāo)本中的hs-cTnI，并進(jìn)行精密度驗(yàn)證、正確度驗(yàn)證、線性范圍驗(yàn)證、可報(bào)告范圍驗(yàn)證、攜帶污染率驗(yàn)證、功能靈敏度驗(yàn)證、參考區(qū)間驗(yàn)證，具體如下。

1.3.1 精密度驗(yàn)證

依據(jù)CNAS-GL037：2019[5]，選取低、高濃度的2個(gè)伯樂心肌質(zhì)控品（批號(hào)67641、67643），各重復(fù)測定3次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD）與變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）用于計(jì)算重復(fù)性精密度（批內(nèi)精密度）和中間精密度（批間精密度），若重復(fù)性精密度（批內(nèi)精密度）＜1/4 TEa（7.5%），中間精密度（批間精密度）＜1/3 TEa（10.0%），則驗(yàn)證通過。

1.3.2 正確度驗(yàn)證

依據(jù)EP15-A2文件[6]，以2020年發(fā)放的心肌標(biāo)志物5個(gè)室間質(zhì)評物作為參考物質(zhì)，每個(gè)質(zhì)評物分別測定2次，取平均值，比較平均值與回報(bào)靶值，計(jì)算相對偏倚，相對偏倚=[（平均值-回報(bào)靶值）/回報(bào)靶值］×100%，相對偏倚＜1/2 TEa（15%），且有≥80%的相對偏倚符合要求，則驗(yàn)證通過。

1.3.3 線性范圍驗(yàn)證

依據(jù)EP6-A2文件[7]，選擇接近廠家提供線性范圍上限的hs-cTnI 濃度作為高值（H），接近廠家提供線性范圍下限的hs-cTnI 濃度作為低值（L），按照L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H 和H 比例配置6個(gè)濃度水平標(biāo)本，每個(gè)濃度水平的標(biāo)本重復(fù)測定3 次，以預(yù)測值為X，測定均值為Y，計(jì)算回歸方程Y=bX+a，若b 在0.97～1.03范圍內(nèi)、相關(guān)系數(shù)（r）≥0.975，則驗(yàn)證通過。

1.3.4 可報(bào)告范圍驗(yàn)證

用接近線性范圍上限的高值標(biāo)本原倍測2次，手工稀釋復(fù)測2次，稀釋回收率=（實(shí)測值/預(yù)期值）×100%,若稀釋回收率在90%～110%范圍內(nèi)，則為可接受。根據(jù)高值標(biāo)本對應(yīng)的可接受稀釋回收率確定最大稀釋倍數(shù)，最大稀釋倍數(shù)×線性范圍上限值=可報(bào)告范圍上限值，可報(bào)告范圍下限值可直接取線性范圍下限值。

1.3.5 攜帶污染率驗(yàn)證

依據(jù)EP10-A 文件[8]，分別選取低、高濃度的標(biāo)本各1份連續(xù)上機(jī)檢測，得到高值（H1、H2、H3）和低值（L1、L2、L3），攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%，若攜帶污染率＜1%，則驗(yàn)證通過。

1.3.6 功能靈敏度驗(yàn)證選擇1份略低于廠家給定的功能靈敏度（0.017 μg/L）的標(biāo)本，檢測20次，若CV≤20%，則驗(yàn)證通過。

1.3.7 參考區(qū)間驗(yàn)證依據(jù)C28-A2文件[9]，選擇20名健康體檢者（男10名，女10名；年齡20～75歲）的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標(biāo)本，心電圖、血常規(guī)、生化、B 超檢查結(jié)果均正常，進(jìn)行hs-cTnI檢測，若≥90%的健康體檢者血漿hs-cTnI 水平在廠家參考區(qū)間（0.04 μg/L）內(nèi)，則驗(yàn)證通過。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Excel 2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證結(jié)果

低、高濃度的2個(gè)伯樂心肌質(zhì)控品的重復(fù)性精密度（批內(nèi)精密度）分別為2.70%、2.05%，＜1/4 TEa（7.5%）；中間精密度（批間精密度）分別為2.51%、1.18%，＜1/3 TEa（10.0%），驗(yàn)證通過，見表1。

表1 精密度驗(yàn)證結(jié)果（μg/L）

2.2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

5個(gè)室間質(zhì)評物的相對偏倚均＜1/2 TEa（15%），驗(yàn)證通過，見表2。

表2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，均值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行直線回歸分析，觀察線性范圍，結(jié)果顯示，hs-cTnI濃度在0.007～48.076 μg/L線性范圍良好，r2=0.9986，相關(guān)方程為Y=0.9956X-0.7022，故驗(yàn)證的線性范圍為0.007～48.076 μg/L，見圖1。

圖1 線性回歸曲線

2.4 可報(bào)告范圍

經(jīng)分析，hs-cTnI 的最大稀釋倍數(shù)為50倍，若稀釋倍數(shù)＞50倍，則稀釋回收率均＜90%。因此，可報(bào)告范圍的上限值=50×線性范圍上限值，最終確定可報(bào)告范圍為0.007～2403.8 μg/L。

2.5 攜帶污染率

H1、H2、H3分 別 為21.448、21.487、21.049 μg/L，L1、L2、L3分別為0.061、0.059、0.061 μg/L，攜帶污染率為0，驗(yàn)證通過。

2.6 功能靈敏度驗(yàn)證

選擇1份略低于廠家給定的功能靈敏度（0.017 μg/L）的標(biāo)本，經(jīng)檢測20次后的CV為9.88%，驗(yàn)證通過。

2.7 參考區(qū)間驗(yàn)證

20名健康體檢者的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標(biāo)本hscTnI 結(jié)果均＜0.01 μg/L，驗(yàn)證通過。

3 討論

西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)的3位點(diǎn)夾心免疫測試原理，對于檢測項(xiàng)目具有高靈敏度，且配套試劑穩(wěn)定、無毒無害，同時(shí)具有準(zhǔn)確性高、操作簡便快速、標(biāo)本用量少等優(yōu)點(diǎn)，可用于心臟標(biāo)志物、甲狀腺激素、腫瘤標(biāo)志物等多種微量物質(zhì)的定量檢測中。

儀器性能驗(yàn)證是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要基礎(chǔ)，性能驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可成為目前關(guān)注的熱點(diǎn)[10]。由于西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀說明書中提供的參數(shù)都是廠家在國外的實(shí)驗(yàn)室最佳條件下完成的，而本研究實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫濕度、水電、操作人員水平等外部條件與其存在差異，因此，本研究依據(jù)指南和國家認(rèn)可委相關(guān)文件要求，檢測血漿hs-cTnI 的性能，以保證為臨床提供準(zhǔn)確、可靠、科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本研究結(jié)果顯示，精密度驗(yàn)證、正確度驗(yàn)證、線性范圍驗(yàn)證、可報(bào)告范圍驗(yàn)證、攜帶污染率驗(yàn)證、功能靈敏度驗(yàn)證、參考區(qū)間驗(yàn)證均通過。綜上所述，西門子ADVIA Centaur CP 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測血漿hs-cTnI 的性能可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求，滿足臨床需求。