血清microRNA-873在2型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者中的作用機制*

賈蒙嵐 廖沁 歐陽凌云 張娣 袁安 陽光

(成都市第二人民醫(yī)院1.眼科；2.內分泌科，四川 成都 610017)

糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy，DR)是2型糖尿病患者常見的慢性并發(fā)癥之一，目前發(fā)病機制未明[1-2]。現(xiàn)階段研究已證實，由白介素-17(Interleukin-17，IL-17)介導的慢性炎癥反應在DR的血管病變及視網(wǎng)膜損傷過程中占有重要作用[3-4]。有研究報道，microRNA-873與IL-17的關系密切，且參與免疫炎癥反應的過程。國內有學者研究發(fā)現(xiàn)，IL-17誘導的microRNA-873可通過靶向A20泛素編輯酶參與自身免疫性腦脊髓炎的發(fā)病機制[5-6]。但是，目前關于microRNA-873與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變之間關系的研究尚少。本研究通過觀察2型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清microRNA-873的表達量，進一步分析其與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變之間的關系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月～2019年12月我院收治并確診為2型糖尿病的患者150例作為研究對象，根據(jù)是否存在視網(wǎng)膜病變將所有的入組對象分為2型糖尿病合并視網(wǎng)膜病變組(DR組)78例和2型糖尿病不合并視網(wǎng)膜病變組(NDR組)72例。納入標準：①診斷標準參照《我國糖尿病臨床診療指南》中關于2型糖尿病及糖尿病視網(wǎng)膜病變的診斷標準。②正在接受降糖治療。排除標準：①合并嚴重心、肝、肺及腦血管疾病患者。②患有1型糖尿病或其他特殊類型的糖尿病患者。③存在全身免疫系統(tǒng)疾病或急、慢性感染者。④患有其他原因導致的視網(wǎng)膜病變或存在內眼手術史。本研究患者均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 microRNA-873表達量檢測 所有研究對象均于清晨空腹抽取肘靜脈血3mL，抗凝后離心(2000r/min，15min)，選擇miRNeasy Mini Kits提取總RNA，嚴格按照說明書進行?？俁NA提取后進行PCR反應，PCR反應體系：預反應(95℃，2min)-解鏈(95℃，5s)-退火(56℃，5s)-延伸(72℃，35s)，共35個循環(huán)，運用2-ΔΔCT相對定量計算目標基因含量。

1.3 視網(wǎng)膜病變相關炎癥指標及微血管內皮功能指標檢測 所有入組患者均于入院后抽取清晨空腹肘靜脈5 mL，離心后留取上清液-80℃保存。酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清中TNF-α、IL-6和IL-17水平；內皮細胞(ECs)、內皮祖細胞(EPCs)計數(shù)百分比采用流式細胞儀檢測(美國畢地公司)。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較 DR組患者中合并糖尿病腎病者22例，合并糖尿病周圍神經(jīng)病變者15例，其他者6例，NDR組患者中合并糖尿病腎病者17例，合并糖尿病周圍神經(jīng)病變者10例，其他者5例；DR組患者平均糖化血紅蛋白值明顯高于NDR組(P<0.05)，其他一般資料方面無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。DR組患者中視網(wǎng)膜病變非增殖期患者52例，增殖期患者26例。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 兩組患者microRNA-873表達量比較 相對于NDR組患者，DR組患者體內microRNA-873表達量顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)，見表2。

表2 兩組患者microRNA-873表達量比較

2.3 兩組患者心肌損傷及相關炎癥指標結果比較 與NDR組患者相比，DR組患者的血清TNF-α、IL-6及IL-17表達量均明顯較高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者心肌損傷及相關炎癥指標結果比較

2.4 兩組患者微血管內皮功能指標比較 DR組患者的Ecs水平明顯高于NDR組，而EPCs水平明顯低于NDR組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組患者微血管內皮功能指標比較

2.5 microRNA-873表達量與視網(wǎng)膜病變各指標間的相關性 通過Pearson相關性分析結果顯示，患者組血清microRNA-873表達量與TNF-α、IL-6、IL-17表達量及Ecs百分比間均存在明顯正相關，與EPCs百分比間均存在明顯負相關，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 microRNA-873表達量與視網(wǎng)膜病變各指標間的相關性

3 討論

近年來，2型糖尿病發(fā)病率逐年增加，糖尿病視網(wǎng)膜病變亦成為嚴重降低患者生活質量的慢性并發(fā)癥[7-8]。研究表明，糖尿病視網(wǎng)膜病變的主要病理特征是視網(wǎng)膜微血管損傷[9]。同時，據(jù)流行病學調查發(fā)現(xiàn)，因微循環(huán)障礙導致死亡的2型糖尿病患者約有一半以上。因此，對于糖尿病微血管病變發(fā)病機制的研究逐漸引起了醫(yī)學界的廣大關注[10-11]。

現(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA可參與多種疾病的各個生化過程中。有研究報道，microRNAs 表達量改變在視網(wǎng)膜血管病變中占有重要作用，如microRNA-410可抑制視網(wǎng)膜新生血管形成等[12-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，在合并有視網(wǎng)膜病變的糖尿病患者存在microRNA-873表達量的顯著升高，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。既往研究表明，microRNA-873不僅具有抑制細胞增殖、引起細胞凋亡的作用，還可參與炎癥免疫反應[15-16]。

炎癥反應在視網(wǎng)膜病變中的作用不容忽視，本研究還發(fā)現(xiàn)，與NDR組患者相比，DR組患者的血清TNF-α、IL-6及IL-17表達量均明顯較高(P<0.05)，與既往研究的結果相一致[17]。微血管內皮功能方面比較，DR組患者的Ecs水平明顯高于NDR組，而EPCs水平明顯低于NDR組(P<0.05)。進一步通過Pearson相關性分析結果顯示，患者組血清microRNA-873表達量與TNF-α、IL-6、IL-17表達量及Ecs百分比間均存在明顯正相關(P<0.05)，與EPCs百分比間均存在明顯負相關(P<0.05)。上述結果提示，microRNA-873表達量改變與炎癥反應介質和微血管內皮功能改變顯著相關，考慮其可能原因有：①炎癥免疫反應，有研究表明，microRNA-873表達量改變可直接影響血清IL-6、TNF-α等炎性介質的表達，而后者表達水平改變可造成視網(wǎng)膜炎性損傷、促進新生血管生成和導致神經(jīng)變性等[18-20]。②引起細胞凋亡，腫瘤學研究中發(fā)現(xiàn)，microRNA-873表達量改變可影響細胞增殖、凋亡進程。動物學實驗發(fā)現(xiàn)，microRNA-873表達量改變可參與NF-κB信號通路，后者p65亞基乙酰化后可激活MMP-9表達從而加快視網(wǎng)膜血管內皮細胞凋亡[21-23]。

4 結論

2型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清中存在microRNA-873表達量改變，且與血清炎癥介質表達量改變和血管內皮功能改變密切相關，但是，關于microRNA-873的具體作用機制有待于進一步考證。