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    豬弓形蟲(chóng)病的流行病學(xué)、臨床癥狀及診斷方法概述

    2021-11-23 05:36:20王敏李明俊
    中國(guó)動(dòng)物保健 2021年4期
    關(guān)鍵詞:弓形蟲(chóng)膠體金感染率

    王敏,李明俊

    (1.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000;2.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000)

    1 我國(guó)部分地區(qū)豬弓形蟲(chóng)流行病學(xué)

    從1977 年豬弓形蟲(chóng)病被報(bào)道至今,我國(guó)關(guān)于豬弓形蟲(chóng)病研究已經(jīng)過(guò)去40 多年。整理我國(guó)部分地區(qū)豬弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查資料,分析如下:①我國(guó)豬弓形蟲(chóng)感染情況較為普遍,全國(guó)豬弓形蟲(chóng)平均感染率為40%左右,大部分省份弓形蟲(chóng)感染率為20%~45%,弓形蟲(chóng)感染情況最嚴(yán)重的為重慶地區(qū),為75.94%,感染率最低是西藏地區(qū),為5.1%[1-7];②在我國(guó),豬弓形蟲(chóng)感染情況較為嚴(yán)重地區(qū)主要分布在沿海亞熱帶地區(qū),而在相對(duì)寒冷且干燥的地區(qū)豬弓形蟲(chóng)感染率則低。如西藏地區(qū)藏豬弓形蟲(chóng)感染僅為5.1%;③豬弓形蟲(chóng)感染還與豬場(chǎng)的飼養(yǎng)方式和豬自身免疫情況有關(guān),散戶豬場(chǎng)感染率高于規(guī)?;B(yǎng)豬場(chǎng),經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)胎次數(shù)越多弓形蟲(chóng)感染率越高,并且可能多次反復(fù)感染弓形蟲(chóng)。

    2 臨床癥狀

    豬弓形蟲(chóng)急性感染主要表現(xiàn)為:稽留熱,體溫為40~42℃,精神沉郁甚至食欲廢絕,便秘與腹瀉交替出現(xiàn),其耳后和腹下部出現(xiàn)血斑,并伴有腹股溝淋巴結(jié)腫大,持續(xù)時(shí)間大概7~10d。若感染豬能挺過(guò)這段時(shí)間,其食欲和體溫逐漸恢復(fù)正常,弓形蟲(chóng)在其肌肉、腦部等形成包囊,轉(zhuǎn)化為慢性感染,若機(jī)體免疫系統(tǒng)受損,則再次出現(xiàn)急性感染癥狀。一般免疫力正常的豬感染弓形蟲(chóng)無(wú)明顯癥狀,呈慢性感染,當(dāng)豬弓形蟲(chóng)感染呈急性癥狀時(shí)常引起死亡[8]。

    3 豬弓形蟲(chóng)病臨床診斷技術(shù)

    3.1 弓形蟲(chóng)病診斷技術(shù)概述

    豬弓形蟲(chóng)感染診斷技術(shù)主要分為3 類(lèi):①弓形蟲(chóng)病原檢測(cè),如取檢測(cè)豬的血液、組織液進(jìn)行涂片,以是否觀察到弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體作為診斷依據(jù),或者從疑似弓形蟲(chóng)感染的豬取淋巴結(jié)等組織進(jìn)行處理,然后感染小鼠,對(duì)感染小鼠進(jìn)行追蹤觀察,并取有明顯癥狀的腹水或腦組織進(jìn)行涂片,以是否觀察到弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體或腦包囊作為診斷依據(jù);②弓形蟲(chóng)分子生物學(xué)診斷,主要以是否擴(kuò)增到弓形蟲(chóng)特異性片段為診斷依據(jù)。如傳統(tǒng)PCR 擴(kuò)增弓形蟲(chóng)529bp,巢式PCR 檢測(cè)弓形蟲(chóng)P30 基因,若兩者擴(kuò)增結(jié)果均為陽(yáng)性,則基本可判斷為該豬已感染弓形蟲(chóng);③弓形蟲(chóng)免疫學(xué)診斷,主要以是否檢測(cè)到抗弓形蟲(chóng)抗體或抗原作為診斷依據(jù),常用方法有IFA、IHA、MAT、ELISA 和GICA。

    3.2 常用弓形蟲(chóng)感染診斷方法優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析

    ①弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體診斷,優(yōu)點(diǎn):準(zhǔn)確;缺點(diǎn):診斷時(shí)間長(zhǎng)、需要飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求;適用對(duì)象:實(shí)驗(yàn)室研究;②弓形蟲(chóng)分子生物學(xué)診斷,優(yōu)點(diǎn):特異性高、靈敏度高、診斷方法種類(lèi)多樣;缺點(diǎn):需要費(fèi)用高昂的儀器和標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境、對(duì)診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求;適用對(duì)象:一般用于實(shí)驗(yàn)室研究;③弓形蟲(chóng)免疫學(xué)診斷,優(yōu)點(diǎn):可批量檢測(cè)、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員要求相對(duì)較低、操作相對(duì)簡(jiǎn)單;缺點(diǎn):特異性不及弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體診斷,靈敏度不及分子生物學(xué)診斷;適用對(duì)象:一般用于臨床診斷[9]。

    3.3 臨床常用診斷方法概述

    IHA,間接血凝試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱,英文全名為:indirect hemagglutination test,1957 年Jacob 和Lunde 率先用于檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染,1994 年曾為國(guó)際認(rèn)定的弓形蟲(chóng)診斷方法兩種之一,其優(yōu)點(diǎn):價(jià)格合理、特異性強(qiáng)且操作方便。實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)紅細(xì)胞吸附弓形蟲(chóng)特異性抗原,檢測(cè)血清中有抗弓形蟲(chóng)抗體,若紅細(xì)胞不穩(wěn)定,易出現(xiàn)假陽(yáng)性,且重復(fù)性差,臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)敏感性不及ELISA[10]。

    MAT,改良凝集試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱,英文全名為:modified agglutination test,是其他國(guó)家用于豬弓形蟲(chóng)感染診斷使用較多的診斷方法[11]。與ELISA、IHA 和LAT 一并,四種方法檢測(cè)同樣豬血清,結(jié)果顯示MAT 的敏感性最高[12]。利用MAT 檢測(cè)仔豬弓形蟲(chóng)、蠕蟲(chóng)和病毒感染陽(yáng)性血清,結(jié)果顯示:無(wú)交叉感染,該方法的特異性較高[13]。但由于成本較高,最終沒(méi)有被廣泛推廣。

    ELISA,間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱,英文全名:enzyme-linked immunosorbent assay,1976 年Voller 首次用于弓形蟲(chóng)診斷,是我國(guó)近20 年豬弓形蟲(chóng)病診斷使用最多的診斷方法,檢測(cè)內(nèi)容為豬抗弓形蟲(chóng)IgG。優(yōu)點(diǎn):診斷時(shí)間較短、特異性高、靈敏性高、重復(fù)性好、檢測(cè)內(nèi)容靈活、可批量檢測(cè)、操作可程序化,有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化檢測(cè),是理想的臨床檢測(cè)方法。

    GICA,為膠體金免疫層析技術(shù)的簡(jiǎn)稱,英文全名為:colloidal gold immunochromatography assay。報(bào)道顯示:已制備的以弓形蟲(chóng)分泌抗原為檢測(cè)對(duì)象的膠體金試紙條,敏感性高,與IHA 符合率為82.4%[14]。Huang 等用膠體金與重組融合蛋白吸附,制備金標(biāo)試紙條,用于檢測(cè)貓弓形蟲(chóng)抗體,結(jié)果顯示該實(shí)驗(yàn)的敏感性達(dá)100%,特異性達(dá)94.5%[15]。2010 年李聰穎制備的可用于山羊弓形蟲(chóng)病檢測(cè)的試紙條,結(jié)果顯示:樣品檢測(cè)與ELISA 檢測(cè)結(jié)果符合率為85%[16]。膠體金免疫層析技術(shù)操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、檢測(cè)過(guò)程短,是臨床檢測(cè)中理想檢測(cè)方法。

    4 弓形蟲(chóng)病診斷方法的發(fā)展現(xiàn)狀

    4.1 弓形蟲(chóng)病診斷方法常用診斷抗原

    臨床上弓形蟲(chóng)病診斷方法主要是以弓形蟲(chóng)全蟲(chóng)蛋白或弓形蟲(chóng)分泌蛋白為診斷抗原,檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)抗弓形蟲(chóng)抗體,或者制備弓形蟲(chóng)分泌抗原重組蛋白的抗體檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)的弓形蟲(chóng)抗原,目前文獻(xiàn)報(bào)道主要有基于弓形蟲(chóng)MIC3、SAG1、SAG2、SAG3、GRA6、GRA7、BAG1 等基因型檢測(cè)方法的研究,但普遍都存在特異性和敏感性不夠理想的問(wèn)題[17]。

    4.2 目前弓形蟲(chóng)病診斷方法的不足與可能的改進(jìn)措施

    以豬弓形蟲(chóng)病診斷試劑盒為例:①抗體檢測(cè)對(duì)象均為IgG 抗體,而IgG 抗體檢測(cè)臨床價(jià)值不突出,檢測(cè)豬抗IgM 抗體作為診斷依據(jù)效果更為理想。豬感染弓形蟲(chóng),一般在7d 左右出現(xiàn)抗弓形蟲(chóng)IgM 抗體,并逐漸升高至頂峰,在2 個(gè)月左右消失,而抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體則在1 月后出現(xiàn),一般可以維持1 年以上。一般可根據(jù)豬血清中是否含抗弓形蟲(chóng)IgM 抗體結(jié)果,判定該豬是否在近期感染弓形蟲(chóng),而抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體存在時(shí)間長(zhǎng),檢測(cè)抗弓形蟲(chóng)IgG 抗體可作為弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查研究依據(jù),但作為藥物防治的指導(dǎo)意義不大;②可嘗試豬弓形蟲(chóng)抗IgM 抗體和弓形蟲(chóng)抗原聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行判斷,IgM 是感染初期產(chǎn)生的抗體,一般可作為早期診斷依據(jù),IgG 抗體產(chǎn)生時(shí)間晚于IgM 的主要抗體[18],而弓形蟲(chóng)分泌抗原的出現(xiàn)則提示極有可能是急性感染,因此抗原與IgM 抗體檢測(cè)聯(lián)合使用具有較好的臨床診斷價(jià)值?!?/p>

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