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    MDR1調(diào)控的信號傳導(dǎo)機制研究進(jìn)展

    2012-01-25 04:37:56王秀梅彭文興文曉柯
    中國醫(yī)藥指南 2012年30期
    關(guān)鍵詞:染色質(zhì)元件位點

    王秀梅* 彭文興 文曉柯

    (1 湖南省婦幼保健院藥劑科,湖南 長沙 410008;2 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院臨床藥學(xué)研究室,湖南 長沙 410011)

    MDR1的表達(dá)調(diào)控機制是一個異常復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),作為一個應(yīng)激-誘導(dǎo)基因,在MDR1啟動子及其鄰近區(qū)域存在著多個轉(zhuǎn)錄因子識別位點(包括AP-1結(jié)合位點、CCAAT盒、GC豐富區(qū)、p53結(jié)合域以及HIF-1應(yīng)答元件等),轉(zhuǎn)錄因子可以在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控MDR1基因的表達(dá)。研究較多有HIF-1、PXR、NF-κB、NF-Y、p53等。

    1 核受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路

    核受體是一類能與DNA應(yīng)答元件結(jié)合的配體激活性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。家族成員有兩個共同的功能性結(jié)構(gòu)域:C末端核受體的配體結(jié)合域(LBD)和高度保守的DNA結(jié)合域(DBD),LBD有一個疏水性的供配體結(jié)合的“口袋”,與多數(shù)配體呈疏水性的結(jié)構(gòu)特征相吻合。DBD則作為信號向?qū)В茏R別靶基因上的特定反應(yīng)元件[1]。藥物或其他生物異源物誘導(dǎo)的MDR1基因表達(dá)主要由其中的孕烷x受體(pregnane X receptor,PXR,NR1I2)和組成型雄烷受體(constitutive androstane receptor,CAR)調(diào)控,在分子機制上,二者均可以和MDR1增強子上核受體應(yīng)答元件相結(jié)合,激活MDR1的轉(zhuǎn)錄[2]。

    1.1 PXR

    PXR在肝臟、小腸、大腦等組織中都有表達(dá)。未活化的PXR位于細(xì)胞核,與配體結(jié)合激活后,PXR配體復(fù)合體與視黃醛x受體(RXR)形成異源二聚體PXR/RXRa,以DBD充當(dāng)信號段,與MDR1基因增強子上的核受體應(yīng)答元件結(jié)合,促進(jìn)MDR1基因的轉(zhuǎn)錄及其編碼的P-gp的表達(dá)[1]。在MDR1基因5'-端上游區(qū)域約-8kb處的增強子元件,含有多個核受體結(jié)合位點,其間只有DR4(I)序列是PXR所需的具有兩個同源(consensus)的AG(G/T)TCA 半位點,它參與PXR介導(dǎo)的藥物對MDR1基因的誘導(dǎo)作用[2]。

    1.2 CAR

    CAR位于細(xì)胞質(zhì)中,當(dāng)暴露于生物異源物或與配體結(jié)合而激活后,轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核,與MDR1基因增強子上不同核受體反應(yīng)元件相結(jié)合而激活MDR1的轉(zhuǎn)錄,有兩種方式:一是以CAR/RXRa二聚體的形式與DR4(I)序列結(jié)合,二是以CAR單體的形式與DR4(II)半位點序列AGAGTTCA結(jié)合。兩個結(jié)合位點均位于MDR1基因5'-端上游調(diào)控區(qū)7.8kbp增強子處。DR4(I)序列是7.8kbp增強子上唯一100%同源的(consensus)核受體應(yīng)答元件,被證實是CAR/RXRa二聚體的高親和力位點,在CAR誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活作用中,70%由DR4(I)調(diào)控,其余30%則由CAR單體與DR4(II)半位點結(jié)合來誘導(dǎo)。由于PXR和CAR都能與DR4(I)序列結(jié)合,且對該位點的親和力相當(dāng),因此存在著兩個核受體對DR4(I)結(jié)合位點的競爭作用[3]。

    2 轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路

    2.1 HIF-1

    由于供血不足和癌細(xì)胞增殖能量消耗,組織缺氧(即局部PO2下降)是腫瘤生長過程中的普遍特征。細(xì)胞對缺氧所做出的各種反應(yīng)中,缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor I,HIF-1)為最主要的調(diào)節(jié)因子,也是唯一在特異性缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子。MDR1是缺氧反應(yīng)性基因,在該基因啟動子(-49~-45)上存著功能性的缺氧應(yīng)答元件(HREs)。HIF-1是異源二聚體轉(zhuǎn)錄因子,由α和β兩種亞基聚合而成。其中,HIF-1α的穩(wěn)定性決定了HIF-1的活性。在HIF-1α上存在一個O2依賴的降解域,在常氧環(huán)境中,該降解域以泛素-蛋白酶體通路迅速降解。在缺氧環(huán)境中,該降解域不被降解,HIF-1α穩(wěn)定表達(dá),并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中聚集,與 HIF-1β結(jié)合形成二聚體HIF-1,HIF-1與MDR1基因HRE相結(jié)合,啟動MDR1的轉(zhuǎn)錄[4]。Han[5]等研究也表明,在感染HBV的肝細(xì)胞中產(chǎn)生的乙肝病毒X蛋白 (HBx)的過度表達(dá)也是通過穩(wěn)定HIF-1α蛋白,使HIF-1與MDR1上的HRE結(jié)合增加,從而介導(dǎo)MDR1基因的表達(dá)。

    報道有另一JNK通路也能激活HIF-1的表達(dá),在缺氧時,活性氧升高,誘導(dǎo)JNK磷酸化而被激活,細(xì)胞核內(nèi)HIF-1α與c-Jun通過某種機制相互作用,在共活化體p300/CBP調(diào)控下,使HIF-1與MDR1啟動子上的HREs結(jié)合增加,轉(zhuǎn)錄激活,最終導(dǎo)致MDR1表達(dá)增加。而在常氧環(huán)境中,c-Jun與MDR1啟動子上的AP1位點結(jié)合增加,抑制轉(zhuǎn)錄,從而下調(diào)MDR1基因的表達(dá)[6-7]。

    2.2 NF-κB

    核因子κ B是普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一。經(jīng)典的NF-κB轉(zhuǎn)錄因子是由兩種蛋白(p50和p65或者RelA)組成的異源二聚體。在大多數(shù)細(xì)胞中,通常NF-κB二聚體與其阻抑蛋白IκB家族(以IκBα和IκBβ為代表)相互作用在一起,從而以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中,當(dāng)細(xì)胞受外界信號刺激時,IκB在IκB激酶的作用下于絲氨酸殘基N-端迅速磷酸化降解,NF-κB釋放出來,并易位至細(xì)胞核,參與靶基因調(diào)控作用。許多信號物質(zhì)都可以激活NF-kB二聚體并使其易位到細(xì)胞核里面,包括免疫炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、調(diào)亡以及黏附分子等所有能夠?qū)е翴κB降解的物質(zhì)[8-10]。

    MDR1基因是應(yīng)激反應(yīng)性基因,細(xì)胞外許多信號刺激(血清、絲裂原刺激、重金屬、熱休克抗癌藥、UV輻射等)均可以上調(diào)胞內(nèi)MDR1 mRNA的表達(dá)[11],其中包含NF-κB在內(nèi)的各種轉(zhuǎn)錄因子的介導(dǎo)調(diào)控作用。NF-κB一旦被激活,就能控制大量基因的表達(dá),而這些基因都參與調(diào)控細(xì)胞凋亡和多藥耐藥信號傳導(dǎo)通路。NF-κB對MDR1/P-gp具有雙重調(diào)控作用,可以介導(dǎo)MDR1的迅速激活,也可以抑制其活性。這取決于信號種類,治療條件以及細(xì)胞種類等,也就是說NF-κB對MDR1的調(diào)控具有組織、細(xì)胞種屬特異性,而在其具體的作用機制上仍然存有爭議[8-10]。Bentrires-Alj 等以人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-15為研究對象,證實在MDR1基因啟動子第一個內(nèi)含子上有同源的(consensus)NF-κB結(jié)合位點,NF-κB復(fù)合物可以與這個內(nèi)含子位點結(jié)合,轉(zhuǎn)活MDR1基因啟動子報告質(zhì)粒(reporter plasmid),激活轉(zhuǎn)錄從而上調(diào)MDR1/P-gp的表達(dá)。然而,使各個結(jié)合位點突變,并不能顯著改變報告質(zhì)粒對過度表達(dá)的內(nèi)源性NF-κB蛋白的反應(yīng)程度[8]。Ogretmen和Safa研究在各種人類的癌細(xì)胞啟動子上-198~-89區(qū)域,存在有負(fù)調(diào)控元件。NF-κB與c-Fos偶合對MDR1基因表達(dá)具有抑制作用。研究顯示,NF-κB/p65 和c-Fos是兩個無關(guān)聯(lián)的轉(zhuǎn)錄因子,在MCF-7細(xì)胞中,二者雜交偶合形成一個蛋白復(fù)合體,這種功能性的偶合發(fā)生在NF-κB/p65的Rel同源性區(qū)域和Fos因子的bZIP區(qū)域。細(xì)胞核中NF-κB/p65-c-Fos復(fù)合物通過與MDR1基因啟動子上的CAAT片段(-116~-113殘基)相互作用而對其產(chǎn)生負(fù)調(diào)控效應(yīng),抑制啟動子活性。這有異于先前的研究,即 NF-κB/p65-c-Fos復(fù)合物能夠激活人免疫缺陷病毒1型基因的5-遠(yuǎn)端基因復(fù)制,其機制是:通過增強與MDR1基因上κB及AP1應(yīng)答元件結(jié)合的活性,從而激活該基因的轉(zhuǎn)錄。這種效應(yīng)差異符合NF-κB對MDR1的調(diào)控的組織種屬特異性[9]。Kuo MT等以人肝癌和胚胎纖維母細(xì)胞為試驗對象,證實了另一個NF-κB結(jié)合位點,位于MDR1啟動子遠(yuǎn)端-6092的DNA序列,NF-κB由致肝癌物乙酰氨基芴(2-AAF)誘導(dǎo),通過磷酸肌醇3激酶(PI3K)途徑激活后,與MDR1識別位點結(jié)合而發(fā)揮信號傳導(dǎo)作用。具體機制為:肝癌細(xì)胞中2-AAF激活PI3K通路,導(dǎo)致其下游效應(yīng)基因的活化表達(dá),包括Rac1、DADPH氧化酶以及Akt。這些效應(yīng)基因都能夠激活I(lǐng)κB激酶(IKK),催化IκB磷酸化降解,使NF-κB大量釋放而激活?;蛘撸?-AAF直接激活這些效應(yīng)基因:DADPH氧化酶可以催化產(chǎn)生ROS,而Rac1作為DADPH氧化酶的一個亞單位,在2-AAF誘導(dǎo)下,Rac1與胞膜上其它亞單位集合形成ROS,使MDR1轉(zhuǎn)錄激活。而且,Rac1還可以誘導(dǎo)IκBα磷酸化以及使p50/p65異源二聚體易位至細(xì)胞核而激活NF-κB。Akt在2-AAF作用下活化后,催化IKK酶活性,激活NF-κB。另外,2-AAF還可以直接誘導(dǎo)IKK活化而激活NF-κB。然后,激活后的NF-κB與MDR1結(jié)合,啟動基因轉(zhuǎn)錄,使MDR1/P-gp表達(dá)增加[11]。

    2.3 NF-Y

    反向的CCAAT序列(-82~-73)是MDR1基因啟動子上主要的順式元件之一,NF-Y作為CCAAT盒子結(jié)合蛋白,是MDR1基因轉(zhuǎn)錄的主要調(diào)控因子,它與另一個重要的轉(zhuǎn)錄因子Sp1一起,調(diào)節(jié)MDR1基因的表達(dá)。一些化療藥物、紫外線等細(xì)胞內(nèi)外信號均可以誘導(dǎo)NF-Y對MDR1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控效應(yīng),但其具體的信號傳導(dǎo)通路卻研究很少。

    Jin 和 Scotto報道了組蛋白乙?;福℉ATs)和脫乙?;福℉DACs)誘導(dǎo)的經(jīng)NF-Y介導(dǎo)的MDR1基因轉(zhuǎn)錄。組蛋白調(diào)節(jié)酶活性與基因轉(zhuǎn)錄激活或抑制有很大的聯(lián)系,HATs特異性催化組蛋白N-端區(qū)域的賴氨酸殘基ε-氨基乙?;瑴p弱組蛋白與DNA相互作用,使核小體結(jié)構(gòu)失去穩(wěn)定,成為開放的染色質(zhì)。而 HDACs則使乙?;摰簦纬梢粋€更加緊密的染色質(zhì)結(jié)構(gòu),稱為閉合的染色質(zhì)。這種染色質(zhì)的重新組合,能夠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子和DNA上靶位的親和性。開放型染色質(zhì)能夠介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合,而閉合型染色質(zhì)則不能。在哺乳動物中,NF-Y由三個亞單位組成,包括NF-YA、NF-YB 和NFYC。文獻(xiàn)提到NF-YB 和NF-YC 可能含有與組蛋白類似的基因序列,他們以核小體類似結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用,成為組蛋白調(diào)節(jié)酶乙?;?脫乙?;饔玫陌悬c。HATs和HDACs與NF-Y特異性結(jié)合,通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu),從而影響NF-Y與其結(jié)合位點的親和性。HATs是轉(zhuǎn)錄共活化物P/CAF的組成元素,NF-Y通過與轉(zhuǎn)錄共活化物P/CAF結(jié)合,將HAT活性帶到CCAAT盒子上來,導(dǎo)致組蛋白乙酰化,使核小體結(jié)構(gòu)局部破裂,使形成開放的染色質(zhì),有利于NF-Y與CCAAT位點的結(jié)合,從而激活MDR1轉(zhuǎn)錄。而HDACs作為基因轉(zhuǎn)錄共抑制物的組成部份,通過脫乙?;饔檬谷旧|(zhì)結(jié)構(gòu)更加緊密,阻礙NY-Y與MDR1啟動子的結(jié)合。另外,染色體上的乙?;脚c轉(zhuǎn)錄活性直接相關(guān),超乙?;慕M蛋白聚集在活化的染色質(zhì)區(qū)域,促進(jìn)NF-Y與核小體DNA的結(jié)合,減小轉(zhuǎn)錄起始和延伸中的抑制效應(yīng),而低乙酰化組蛋白則濃集于轉(zhuǎn)錄沉默區(qū)域,因此,HATs能夠介導(dǎo)NY-Y與MDR1特定序列結(jié)合而激活轉(zhuǎn)錄,而HDACs則阻礙NF-Y與該特定序列結(jié)合,抑制MDR1基因的轉(zhuǎn)錄。使用HDACs抑制劑(如TSA)能夠去除該抑制效應(yīng),使MDR1轉(zhuǎn)錄激活[12]。

    Takashi Higuchi等在體外和NG108-15腫瘤細(xì)胞中都證實了U7 snRNA,作為一個已知的組蛋白前信使RNA處理器,能夠與NF-Y結(jié)合,阻礙NF-Y與MDR1基因啟動子的CCAAT序列相結(jié)合,從而抑制啟動子活性,使基因表達(dá)下調(diào)[13]。Hideki Tanaka等報道抗癌藥物HMN-176通過抑制NF-Y與MDR1靶序列結(jié)合活性,抑制MDR1基因的表達(dá)。這種對NF-Y的抑制效應(yīng)可能與其細(xì)胞毒作用有關(guān)[14]。另外,紫外線也可以通過NF-Y和SP1的相互作用介導(dǎo)MDR1基因轉(zhuǎn)錄。在紫外線照射下,NF-Y與SP1分別與MDR1 啟動子上的CCAAT盒子和鄰近的GC元件結(jié)合,啟動MDR1基因轉(zhuǎn)錄,二者缺一不可。機制可能是UV通過后轉(zhuǎn)錄修飾,在一定程度上改變NF-Y/SP1/PCAF復(fù)合物的結(jié)構(gòu),便于其與啟動子上的應(yīng)答元件相結(jié)合,從而使MDR1基因轉(zhuǎn)錄增加[15]。也有報道說,紫外線輻射能產(chǎn)生幾種DNA光產(chǎn)物,NF-Y結(jié)合位點可能含有與光產(chǎn)物相似的結(jié)構(gòu)。這種光產(chǎn)物作用于啟動子序列,使整個DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)改變,從而影響NF-Y與靶基因的結(jié)合[16]。

    2.4 p53

    MDR1啟動子-245~-141區(qū)域含有順式作用序列,包括一個p53結(jié)合位點。許多遺傳毒性物質(zhì)均可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子p53的表達(dá),使p53與MDR1啟動子上特定序列結(jié)合增加,從而激活MDR1基因的轉(zhuǎn)錄。芳烴化合物是由有機物燃燒不完全產(chǎn)生的一種致癌物質(zhì),廣泛存在于自然環(huán)境中,像3-甲基膽蒽(3-MC)和苯并芘這類芳烴化合物,是編碼藥物代謝酶基因的特異誘導(dǎo)劑。Marie-Claude Mathieu等研究在肝癌細(xì)胞中,3-MC作用于細(xì)胞后,在芳烴受體核易位劑(AhR.Arnt)調(diào)控下,3-甲基膽蒽被代謝為具有遺傳毒性的活性產(chǎn)物。這些具DNA損傷活性的代謝物,作為一種致突變劑,激活p53并且使其更加穩(wěn)定,與MDR1啟動子的結(jié)合增加,最終導(dǎo)致MDR1轉(zhuǎn)錄激活。轉(zhuǎn)錄因子P53對MDR1基因的轉(zhuǎn)錄具有雙重調(diào)控作用,報道有野生型p53 下調(diào)大鼠mdr1基因的表達(dá),而突變型p53則使mdr1的表達(dá)上調(diào),p53對mdr1的調(diào)控具有組織種屬特異性[17]。Robert A. Johnson等研究得出,p53對MDR1調(diào)控效應(yīng)的差異來源于MDR1基因啟動子上的DNA結(jié)合域的差異。在MDR1啟動子上有兩種p53結(jié)合位點:HT位點和HH位點。在HT序列中,其象限位點以頭對頭的構(gòu)象排列,而在HH序列,則是以頭對尾的方向排列于MDR1 啟動子上。當(dāng)p53與HT位點結(jié)合時,抑制MDR1轉(zhuǎn)錄;當(dāng)在MDR1啟動子范圍內(nèi),與HT位點轉(zhuǎn)化為HH祖烈時,與p53結(jié)合時則激活MDR1基因轉(zhuǎn)錄[18]。

    Sung-Tsai Yu等在乳腺癌細(xì)胞中研究,色胺酮能在后轉(zhuǎn)錄水平上改變突變型p53蛋白的穩(wěn)定性,減少其壽命,使p53表達(dá)量減少,從而使突變型p53介導(dǎo)的MDR1基因轉(zhuǎn)活效應(yīng)被抑制[19]。Ge Zhou等研究在大鼠肝癌細(xì)胞中,證實在mdr1b 啟動子上從-199到-180堿基對區(qū)域(5'-GAACATGTAGAGACATGTCT-3')含有一個p53特異性識別位點,在柔紅霉素誘導(dǎo)下,野生型P53(而非突變型p53)與該位點結(jié)合,轉(zhuǎn)活mdr1b啟動子活性,使表達(dá)上調(diào)。但是,由于p53是一個多功能的蛋白,它通過復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)發(fā)揮不同的效應(yīng),對MDR1基因表達(dá)的調(diào)控效應(yīng)不僅與細(xì)胞種類有關(guān),還受機體生理條件以及試驗方法等因素的影響[20]。

    2.5 AP-1

    轉(zhuǎn)錄因子AP-1是由Jun 和Fos蛋白組成的二聚體,藥物作用于人多藥耐藥細(xì)胞,激活JNK信號通路,c-fos和c-Jun蛋白表達(dá)升高,由此組成的AP-1的活性增強,與AP-1位點結(jié)合增加,從而使MDR1轉(zhuǎn)錄激活,表達(dá)上調(diào)。另外,AP-1和CAAT盒結(jié)合序列在MDR1基因啟動子-123~-108區(qū)域有重疊,因此,不同的AP-1形式和其他CAAT盒結(jié)合因子通過對該序列的協(xié)同或是競爭性結(jié)合共同調(diào)控MDR1基因的表達(dá)。該位點既可以作為一個轉(zhuǎn)錄激活域又可以作轉(zhuǎn)錄抑制域,主要取決于與之結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子的類型,研究在MCF-7細(xì)胞中,當(dāng)AP-1與該位點結(jié)合時,激活MDR1的轉(zhuǎn)錄[21]在HepG2細(xì)胞中,缺氧誘導(dǎo)AP-1轉(zhuǎn)錄性活化,其機制是,缺氧環(huán)境中,在JNK SAP激酶作用下,c-jun亞單位磷酸化并在細(xì)胞核中聚集,c-JUN 基因表達(dá)升高,位于DNA結(jié)合域的半胱氨酸降低,另外,c-FOS基因的高表達(dá),有利于c-jun/c-fos 異源二聚體的形成,這些都能激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1,并與MDR1啟動子上的AP-1位點結(jié)合增加,轉(zhuǎn)錄激活,從而使表達(dá)上調(diào)[6]。報道在HOP62細(xì)胞中,當(dāng)組織正常供氧時,經(jīng)由JNK通路,c-Jun蛋白表達(dá)升高,并在組蛋白去乙?;?(HDAC5)的調(diào)控下,c-Jun與MDR1啟動子上的AP-1位點結(jié)合增加,抑制MDR1轉(zhuǎn)錄[7]。這兩種研究結(jié)果的差異再一次驗證了,轉(zhuǎn)錄因子對基因的表達(dá)調(diào)控具有細(xì)胞組織差異性,并受實驗方法的影響。

    2.6 sp1

    sp1是一個普遍存在的提高基因轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄因子,在這些基因上游調(diào)控區(qū)域上必須至少含有一個GC盒序列。Sp1單獨或者是以與其他核因子相結(jié)合的方式,來調(diào)控GC元件的活性。例如在KB細(xì)胞中,sp1通過與hMDR1上-50的GC盒結(jié)合,調(diào)控該基因的表達(dá)[22]。Sp1還介導(dǎo)了Raf誘導(dǎo)的MDR1的轉(zhuǎn)錄激活。Raf為絲氨酸/蘇氨酸激酶,是細(xì)胞對外界信號作出應(yīng)激反應(yīng)的信號傳導(dǎo)中介。當(dāng)受體酪氨酸激酶激活的Ras將細(xì)胞質(zhì)中的Raf濃集到細(xì)胞膜上時,Raf的激酶功能即被激活。v-Raf為活化的Raf激酶,通過轉(zhuǎn)錄因子sp1的介導(dǎo)作用誘導(dǎo)MDR1基因的轉(zhuǎn)錄。MDR1上的GC豐富區(qū)作為sp1的結(jié)合位點 ,同時也是v-Raf-應(yīng)答元件,v-Raf-誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活水平與sp1結(jié)合位點數(shù)相關(guān)。v-Raf可以通過在后轉(zhuǎn)錄水平上對sp1的轉(zhuǎn)活域進(jìn)行修飾,來調(diào)控sp1的活性。例如,O-連接的糖基化以及絲氨酸和蘇氨酸殘基的磷酸化等。二者都能夠使sp1的轉(zhuǎn)活增加,進(jìn)一步提高sp1介導(dǎo)的MDR1的表達(dá)[23]。體外研究表明,PKA可以通過 cAMP/PKA 信號通路調(diào)控sp1的轉(zhuǎn)活及其DNA結(jié)合活性。PKA不僅能夠活化啟動子,也能激活sp1的DNA結(jié)合活性。sp1的B區(qū)域具有很高DNA親和力以及在蘇氨酸366(Thr366)處含有一個PKA磷酸化位點。PKA介導(dǎo)sp1的反式激活域磷酸化,使sp1多聚化,其DNA結(jié)合及反式活化性能隨之增加,激活后的sp1即以更高的活性介導(dǎo)MDR1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[24]。另外,還有前面提到的,SP1與NF-Y一起介導(dǎo)了紫外線誘導(dǎo)的MDR1轉(zhuǎn)錄激活[15]。

    2.7 C/EBPβ

    CCAAT/增強子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)也叫做白介素-6核因子(NF-IL-6)(Nuclear factor for interleukin 6),是轉(zhuǎn)錄因子C/EBP家族成員之一。C/EBPβ在大多數(shù)組織中表達(dá)水平較低,然而在一些環(huán)境作用因子(如炎癥細(xì)胞因子)刺激下,C/EBPβ會迅速被誘導(dǎo)表達(dá)[25]。G. Kevin Chen等報道C/EBPβ激活MCF-7細(xì)胞中內(nèi)源性MDR1基因的表達(dá)。證實C/EBPβ主要是與MDR1上Y盒子相互作用來調(diào)控MDR1基因表達(dá)。Y盒子序列也是MDR1啟動子上染色質(zhì)重塑因子(Chromatin remodeling factor)hBrm的作用位點。C/EBPβ對MDR1的激活作用可能是通過染色質(zhì)上C/EBP-hBrm相互作用而介導(dǎo)的。在hBrm作用下,C/EBPβ利用其N-端轉(zhuǎn)活域?qū)⒅厮軓?fù)合物(remodeling complex)聚集到嵌有染色質(zhì)的啟動子上,在該啟動子上C/EBPβ與重塑復(fù)合物相互作用,激活MDR1的轉(zhuǎn)錄。另外,在該序列含有一個重疊的AP-1結(jié)合位點(-128~-75),因此,C/EBPβ可以與MDR1基因CCAAT盒子結(jié)合,也可能與AP-1結(jié)合位點結(jié)合,通過AP-1的負(fù)調(diào)控作用影響MDR1轉(zhuǎn)錄活性。

    C/EBPβ與MDR1啟動子的相互作用具有細(xì)胞依賴性,在MCF-7細(xì)胞中,C/EBPβ的結(jié)合位點位于-128~-75區(qū)域,C/EBPβ通過與Y盒子結(jié)合激活MDR1基因的轉(zhuǎn)錄。而在HepG2細(xì)胞中,C/EBPβ則與另一位點(-148~-140)相互作用來介導(dǎo)MDR1表達(dá)。另外,與MDR 相關(guān)的信號傳導(dǎo)可以介導(dǎo)C/EBPβ磷酸化,有利于其易位到細(xì)胞核與染色質(zhì)結(jié)合,進(jìn)一步激活MDR1轉(zhuǎn)錄[26]。

    2.8 YB-1

    YB-1是DNA結(jié)合蛋白家族之一,可與MDR1上的Y-box(含5’-CCAAT-3’序列)特異性結(jié)合。但關(guān)于YB-1對MDR1基因的調(diào)控作用一直存有很大爭議,這也可能與細(xì)胞特異性有關(guān)。Sundseth[22]以及Alexander Kaszubiak[27]等均報道YB-1并不參與由CCAAT序列介導(dǎo)的MDR1基因表達(dá)。但Takefumi Ohga等則傾向于YB-1的介導(dǎo)作用,認(rèn)為紫外線誘導(dǎo)的MDR1啟動子的活性是通過YB-1與該啟動子上的Y盒子相互作用而激活的[28]。YB-1只與單鏈MDR1的CCAAT盒子結(jié)合,而不能結(jié)合于雙鏈的CCAAT盒子,且其具體的激活機制尚不清楚,當(dāng)UV刺激時,YB-1可能與CCAAT盒子以外的位點結(jié)合,或者是通過調(diào)節(jié)其他MDR1轉(zhuǎn)錄激活劑的活性,比如說NF-Y和SP1,又或者是在后轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮對MDR1基因的激活效應(yīng)[15]。在人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT15和HCT116中研究發(fā)現(xiàn),高熱能夠誘導(dǎo)YB-1的激活,并從細(xì)胞質(zhì)易位至細(xì)胞核聚集,直接導(dǎo)致YB-1與MDR1啟動子序列結(jié)合增加,使 MDR1/P-gp表達(dá)提高。而矛盾的是,在給與阿霉素及高熱治療的患者中,高熱誘導(dǎo)的MDR1基因的表達(dá)上調(diào),并不導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象的發(fā)生,但這卻與臨床用藥經(jīng)驗一致,說明高熱與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用是治療結(jié)腸癌的有效方法[29]。在乳腺癌細(xì)胞研究中表明,抗癌藥物紫杉醇不但能夠增加YB-1與MDR1基因啟動子上的Y-box序列結(jié)合的活性,而且能夠提高M(jìn)DR1啟動子活性,從而上調(diào)MDR1基因的表達(dá)[30]??傊?,YB-1對MDR1 基因的轉(zhuǎn)錄激活機制是非常復(fù)雜,需要進(jìn)一步的研究。

    3 結(jié) 語

    因此,MDR1調(diào)控的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)一方面保證細(xì)胞對外來物的快速外排,另一方面又導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥現(xiàn)象的發(fā)生。MDR1基因啟動子上的結(jié)合位點提示轉(zhuǎn)錄因子可能通過競爭或協(xié)同的復(fù)雜調(diào)控模式而起作用,這種作用效應(yīng)具有組織、細(xì)胞特異性,還因生理及環(huán)境狀況而有所不同。而且,在細(xì)胞內(nèi)一種DNA結(jié)合因子可結(jié)合不同的復(fù)合因子或者相同基因的不同DNA結(jié)合因子可相互作用使調(diào)控機制更為復(fù)雜[26]。

    MDR1基因啟動子中DNA結(jié)合元件及這些區(qū)域的合并,對基因的表達(dá)起重要作用。對MDR1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進(jìn)行深人的研究,尋找該基因啟動子調(diào)控結(jié)構(gòu)中特異性靶區(qū),有利于開發(fā)出逆轉(zhuǎn)MDR的藥物,提高腫瘤化療效果。

    [1]Harmsen S,Meijerman I,Beijnen JH,et al.The role of nuclear receptors in pharmacokinetic drug–drug interactions in oncology[J].Cancer Treat Rev,2007,33(4):369–380.

    [2]Geick A,Eichelbaum M,Burk O.Nuclear Receptor Response Elements Mediate Induction of Intestinal MDR1 by Rifampin[J].J Biol Chem,2001,276(18):14581–14587.

    [3]Burk O,Arnold KA,Geick A,et al.A role for constitutive androstane receptor in the regulation of human intestinal MDR1 expression[J].J Biol Chem,2005,386(6):503–513.

    [4]Comerford KM,Wallace TJ,Karhausen J,et al.Hypoxia-inducible Factor-1-dependent Regulation of the Multidrug Resistance(MDR1)Gene[J].Cancer Res,2002,62(12):3387–3394.

    [5]Han HK,Han CY,Cheon EP,et al.Role of hypoxia-inducible factoralpha in hepatitis-B-virus X protein-mediated MDR1 activation[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,357(2):567–573.

    [6]Minet E,Michel G,Mottet D,et al.c-JUN Gene Induction and AP-1 Activity Is Regulated by a JNK-Dependent Pathway in Hypoxic HepG2 Cells[J].J Exp Cell Res,2001,265(1):114–124.

    [7]Min L,Dengwen L,Aneja R,et al.PO2-dependent Differential Regulation of Multidrug Resistance 1 Gene Expression by the c-Jun NH2-terminal Kinase Pathway[J].J Biol Chem,2007,282(24):17581–17586.

    [8]Bentires-Alj M,Barbu V,Fillet M,et al.NF-κB transcription factor induces drug resistance through MDR1 expression in cancer cells[J].Oncogene,2003,22(1):90–97.

    [9]Ogretmen B,Safa AR.Negative Regulation of MDR1 Promoter Activity in MCF-7,but Not in Multidrug Resistant MCF-7/Adr,Cells by Cross-Coupled NF-κB/p65 and c-Fos Transcription Factors and Their Interaction with the CAAT Region[J].Biochemistry,1999,38(7):2189-2199.

    [10]Deng L,Lin-Lee YC,Claret FX,et al.2-Acetylaminofluorene Up-regulates Rat mdr1b Expression through Generating Reactive Oxygen Species That Activate NF-κB Pathway[J].J Biol Chem,2001,276(1):413–420.

    [11]Kuo MT,Liu Z,Wei Y,et al.Induction of human MDR1 gene expression by 2-acetylaminofluorene is mediated by effectors of the phosphoinositide 3-kinase pathway that Activate NF-κB signaling[J].Oncogene,2002,21(13):1945-1954.

    [12]Jin S,Scotto KW.Transcriptional Regulation of the MDR1 Gene by Histone Acetyltransferase and Deacetylase Is Mediated by NF-Y[J].Mol Cell Biol,1998,18(7):4377–4384.

    [13]Higuchi T,Anzai K,Kobayashi S.U7 snRNA acts as a transcriptional regulator interacting with an inverted CCAAT sequence-binding transcription factor NF-Y[J].Biochim Biophys Acta,2008,1780(2):274–281.

    [14]Tanaka H,Ohshima N,Ikenoya M,et al.HMN-176,an Active Metabolite of the Synthetic Antitumor Agent HMN-214,Restores Chemosensitivity to Multidrug-Resistant Cells by Targeting the Transcription Factor NF-Y[J].Cancer Res,2003,63(20):6942–6947.

    [15]Hu Z,Jin S,Scotto KW.Transcriptional Activation of the MDR1 Gene by UV Irradiation.Role of NF-Y and Sp1[J].J Biol Chem,2000,275( 4): 2979–2985.

    [16]Tommasi S,Swiderski PM,Tu Y,et al.Inhibition of Transcription Factor Binding by Ultraviolet-Induced Pyrimidine Dimers[J].J Biochem,1996,35(49):15693-15703.

    [17]Mathieu MC,Lapierre I,Brault K,et al.Aromatic Hydrocarbon Receptor (AhR)zAhR Nuclear Translocator- and p53-mediated Induction of the Murine Multidrug Resistance mdr1 Gene by 3-Methylcholanthrene and Benzo(a)pyrene in Hepatoma Cells[J].J Biol Chem,2001,276(7):4819–4827.

    [18]Johnson RA,Shepard EM,Scotto KW.Differential Regulation of MDR1 Transcription by the p53 Family Members.Role of the DNA binding domain [J].J Biol Chem,2005,280(14):13213–13219.

    [19]Yu ST,Chen TM,Tseng SY,et al.Tryptanthrin inhibits MDR1 and reverses doxorubicin resistance in breast cancer cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,358(1):79–84.

    [20]Zhou G,Kuo MT.Wild-type p53-mediated Induction of Rat mdr1b Expression by the Anticancer Drug Daunorubicin[J].J Biol Chem,1998,273(25):15387–15394.

    [21]Daschner PJ,Ciolino HP,Plouzek CA,et al.Increased AP-1 activity in drug resistant human breast cancer MCF-7 cells[J].Breast Cancer Res Treat.,1999,53(3): 229–240.

    [22]Sundseth R,MacDonald G,Ting J,et al.DNA Elements Recognizing NF-Y and Sp1 Regulate the Human Multidrug-Resistance Gene Promoter[J].Mol Pharmacol.,1997,51(6):963–971.

    [23]Miltenberger RJ,Farnham PJ,Smith DE,et al.v-Raf activates transcription of growth-responsive promoters via GC-rich sequences that bind the transcription factor Sp1[J].Cell Growth Differ,1995,6(5):549-556.

    [24]Rohlff C,Ahmad S,Borellini F,et al.Modulation of Transcription Factor Sp1 by cAMP-dependent Protein Kinase[J].J Biol Chem,1997,272(34): 21137–21141.

    [25]Labialle S,Gayet L,Marthinet E,et al.Transcriptional regulators of the human multidrug resistance 1 gene: recent views[J].Biochem.Pharmacol,2002,64(5-6):943-948.

    [26]Chen GK,Sale S,Tan T,et al.CCAAT/enhancer-binding protein beta (nuclear factor for interleukin 6)transactivates the human MDR1 gene by interaction with an inverted CCAAT box in human cancer cells[J].Mol Pharmacol.,2004,65(4):906–916.

    [27]Kaszubiak A,Kupstat A,Müller U,et al.Regulation of MDR1 gene expression in multidrug-resistant cancer cells is independent from YB-1[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,357(1):295–301.

    [28]Ohga T,Uchiumi T,Makino Y,et al.Direct involvement of the Y-box binding protein YB-1 in genotoxic stress-induced activation of the human multidrug resistance 1 gene[J].J Biol Chem,1998,273(11):5997–6000.

    [29]Stein U,Jürchott K,Walther W,et al.Hyperthermia-induced nuclear translocation of transcription factor YB-1 leads to enhanced expression of multidrug resistance-related ABC transporters[J].J Biol Chem,2001,276(30):28562–28569.

    [30]Fujita T,Ito K,Izumi H,et al.Increased nuclear localization of transcription factor Y-box binding protein 1 accompanied by up-regulation of P-glycoprotein in breast cancer pretreated with paclitaxel[J].Clin Cancer Res,2005,11(24):8837-8844.

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