黔產(chǎn)玄參的“發(fā)汗”方法研究

鄧瑩 劉杰 魏學軍 夏朵 馬江蠶

【摘 要】 目的：優(yōu)選黔產(chǎn)玄參的最佳“發(fā)汗”方法。方法：采用不同“發(fā)汗”加工方法制備待測樣品，利用高效液相色譜法（HPLC）測定哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸含量，綜合評分法優(yōu)選最佳“發(fā)汗”方法。結果：6種發(fā)汗方法玄參樣品中哈巴苷含量在0.98%～1.21%之間，哈巴俄苷含量在0.93%～1.73%之間，肉桂酸含量在0.73%～0.97%之間，三種成分綜合評分均以烘至半干后“發(fā)汗”制品較曬至半干后“發(fā)汗”制品高。綜合評分最高的發(fā)汗制品為“蒸后發(fā)汗”烘干品，具體“發(fā)汗”方法為將洗凈后的新鮮玄參于籠屜內(nèi)隔水蒸30min（按“圓氣”后計）后，60℃烘至半干，于陰涼通風處堆放3d，60℃烘30min后再堆放，反復發(fā)汗3次。結論：建議黔產(chǎn)玄參“發(fā)汗”過程中干燥時采用烘干法，發(fā)汗樣品的處理采用“蒸后發(fā)汗”法。

【關鍵詞】 玄參;“發(fā)汗”方法;指標成分;綜合評分法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）13-0031-05

Study on the Suitable “Sweating” Method of Scrophularia Ningpoensis In Guizhou

DENG Ying LIU Jie WEI Xuejun* XIA Duo MA Jiangcan

Qiannan Medical College for Nationalities，Duyun 558000，China

Abstract：Objective To optimize the best “sweating” method of Scrophularia ningpoensisin Guizhou.Methods Use different “sweat ”processing methods to prepare samples to be tested and the content of harpagoside，harpagoside and cinnamic acid were determinged by high performance liquid chromatography （HPLC）， andthe best “sweating” method was optimized by the comprehensive scoring method.Results The contents of harpagoside， harpagoside and cinnamic acid in the samples of six sweating methods are 0.98%-1.21%，0.93%-1.73% and 0.73%-0.97%. The comprehensive scores of the three components are that the amount of “sweating” products after drying to semi dry is higher than that after drying to semi dry.The sweating products with the highest comprehensive score are “sweating after steaming”. The specific “sweating”method is to steam the net fresh Scrophularia ningpoensis in the cage for 30 minutes （calculated according to the “round gas”）， bake it at 60℃ to semi dry， stack it in a cool and ventilated place for 3 days， bake it at 60℃ for 30 minutes， and then stack it again to prevent recurrent sweating for 3 times.Conclusion It is suggested that the drying method should be used in the“sweating” process of Scrophularia ningpoensisin Guizhou，and the “sweating after steaming” method should be used for the treatment of sweating samples.

Key words：Scrophularia Ningpoensis;“Sweat” Method;Index Components;Comprehensive Scoring Method

玄參為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結的功能，臨床常用于治療熱病熱入營血、溫毒發(fā)斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬與癰腫瘡毒等癥候，主產(chǎn)浙江、貴州、四川與河北等省區(qū)[1]。

發(fā)汗作為中藥材產(chǎn)地加工的一種特殊方法，是影響中藥材質量的重要因素之一，它可使藥材變色、變軟、增加香味或減少刺激性，其加工方法為將藥材用微火烘或曬至半干或微蒸（煮）后堆置起來，使其內(nèi)部發(fā)熱而析出水分[2]。玄參的發(fā)汗方法在2020版《中華人民共和國藥典》中規(guī)定為“冬季莖葉枯萎時采挖，除去根莖、幼芽、須根及泥沙，烘或曬至半干后堆放3～6d，反復操作，直至干燥”[1]。但由于地域的差異性，目前在玄參的產(chǎn)地加工方法中，除了按照《中華人民共和國藥典》規(guī)定的“發(fā)汗”方法加工之外，不同產(chǎn)地所采用的“發(fā)汗”方法各不相同[3]，已報道的文獻中玄參“發(fā)汗”的質控指標僅局限于核苷類成分[4]，而玄參的主要化學成分有環(huán)烯醚萜類、苯丙素苷類、有機酸類等化學成分[5]，其中哈巴苷、哈巴俄苷具有抗炎作用[6-7]，肉桂酸具有瀉下、抗細菌和真菌作用[8]，是玄參的主要生物活性成分。因此，本研究擬以哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸三種指標性成分的含量作為考察指標，比較“藥典發(fā)汗”曬干品和烘干品、“蒸后發(fā)汗”曬干品和烘干品、“煮后發(fā)汗”曬干品和烘干品玄參中上述指標性成分含量，以綜合評分法優(yōu)選黔產(chǎn)玄參的“發(fā)汗”方法，以期為黔產(chǎn)玄參產(chǎn)地加工方法的建立提供實驗性理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料 試驗用新鮮玄參購于貴州省遵義市道真縣玄參種植基地，經(jīng)黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校中藥教研室李香教授鑒定為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的根。哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸對照品均購自成都克洛瑪生物科技有限公司（批號：CHB-H-006，CHB190105，CHB190106），乙腈（色譜純），水為娃哈哈純凈水，余試劑均為分析純。

1.2 儀器 高效液相色譜儀Agilent1260型（美國Agilent公司）;SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海碩光公司）;AE240型電子分析天平（瑞士MettLer公司）;AS10200A 型超聲波清洗機（杭州匯爾公司）;DHG-9240A型真空干燥箱（上海金山公司）。

2 方法與結果

2.1 樣本的確定試驗 藥材經(jīng)高效液相色譜法測定玄參中哈巴苷和哈巴俄苷的總量符合2020版《中國藥典》規(guī)定（不少于0.45%）。

2.2 樣品的制備

2.2.1 藥典“發(fā)汗”曬干品（A1）[1] 按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，曬至半干，于陰涼通風處堆放3d，取出，曬1d后再堆放，反復發(fā)汗6次即可干燥。

2.2.2 藥典“發(fā)汗”烘干品（A2）[1] 按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，于60℃烘至半干，于陰涼通風處堆放3d，取出，60℃烘30min后再堆放，反復發(fā)汗3次即可干燥。

2.2.3 蒸后“發(fā)汗”曬干品（A3） 將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內(nèi)隔水蒸30min（按“圓氣”后計）后，取出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項。

2.2.4 蒸后“發(fā)汗”烘干品（A4） 將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內(nèi)隔水蒸30min（按“圓氣”后計）后，取出，于60℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項。

2.2.5 煮后“發(fā)汗”曬干品（A5） 將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30min后，撈出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項。

2.2.6 煮后“發(fā)汗”烘干品（A6） 將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30min后，撈出，于60℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項。

2.3 哈巴苷、哈巴俄苷的測定方法[1]

2.3.1 色譜條件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相乙腈（A）-0.03%磷酸水（B），流動相梯度條件見表1。流速1.0mL/min;進樣量10μL;柱溫20℃;檢測波長210nm。對照品溶液、供試品溶液HPLC色譜圖如圖1所示。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取A1～A6玄參樣品粉末（過三號篩）各0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞稱重，浸泡1h，超聲提?。üβ?00W，頻率40KHZ）45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 對照品溶液的制備 精密稱取哈巴苷對照品6.05mg、哈巴俄苷對照品2.32mg，置于100mL量瓶中，加30%甲醇稀釋成含哈巴苷60.50μg/mL、哈巴俄苷23.20μg/mL的混合對照品溶液，冷藏備用。

2.4 肉桂酸的測定方法

2.4.1 色譜條件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相乙腈-0.1%磷酸水（40∶60）;流速1.0mL/min;進樣量10μL;柱溫25℃;檢測波長285nm。對照品溶液、供試品溶液HPLC色譜圖如圖2所示。

2.4.2 供試品溶液的制備 精密稱取A1～A6玄參樣品粉末（過三號篩）各1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇20mL，密塞稱重，浸泡1h，超聲提?。üβ?00W，頻率40KHZ）30min，提取3次，合并濾液定容至100mL，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 對照品溶液的制備 精密稱取肉桂酸對照品1.0mg，置于100mL量瓶中，加甲醇稀釋成含肉桂酸10μg/mL的對照品溶液，冷藏備用。

2.5 線性關系考察 精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合對照品溶液、肉桂酸對照品溶液1、5、10、15、20、25μL，按照“2.3.1”項下哈巴苷、哈巴俄苷和“2.4.1”項下肉桂酸色譜條件進樣，以進樣量（μg/mL）為橫坐標X、峰面積Y為縱坐標進行回歸。結果見表2。

2.6 方法學考察 精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合對照品溶液、肉桂酸對照品溶液各10μL，按“2.3.1”項下哈巴苷、哈巴俄苷色譜條件和“2.4.1”項下肉桂酸色譜條件連續(xù)進樣6次，結果哈巴苷峰面積RSD=0.76%，哈巴俄苷峰面積RSD=0.63%，肉桂酸峰面積RSD=1.3%，表明儀器精密度良好。取A1樣品粉末（過三號篩），6份，精密稱定，按“2.3.2”項下方法制備哈巴苷、哈巴俄苷供試品溶液，按“2.4.2”項下方法制備肉桂酸供試品溶液，分別依色譜條件測定并計算哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸含量，結果哈巴苷含量RSD=1.18%，哈巴俄苷含量RSD=1.78%，肉桂酸含量RSD=1.82%，表明該方法重復性良好。精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷對照品溶液、肉桂酸對照品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、24h按相應色譜條件進行測定，結果哈巴苷含量RSD=1.14%，哈巴俄苷含量RSD=1.88%，肉桂酸含量RSD=0.81%，表明哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸對照品在24h內(nèi)保持穩(wěn)定。取0.25g哈巴苷含量為0.53mg、哈巴俄苷含量為0.73mg的A1樣品6份，精密稱定，按表3精密加入適量哈巴苷、哈巴俄苷對照品，按“2.3.2”項下方法制備哈巴苷和哈巴俄苷供試品溶液，在“2.3.1”項下色譜條件測定并計算加樣回收率;另取0.5g肉桂酸含量為0.46mg的A1樣品，6份，精密稱定，按表3精密加入適量肉桂酸對照品，按“2.4.2”項下方法制備肉桂酸供試品溶液，在“2.4.1”項下色譜條件下測定并計算加樣回收率。試驗結果見表3。

2.8 樣品含量測定 精密稱取A1～A6玄參樣品粉末（過三號篩）各0.5g，按“2.3.2”方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件測定并計算哈巴苷和哈巴俄苷含量，結果見表4。精密稱取A1～A6玄參樣品粉末（過三號篩）各1.0g，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件測定并計算肉桂酸含量。結果見表4。

表4結果顯示，不同“發(fā)汗”加工方法對玄參中三種指標性成分的含量均有影響。從《藥典》記載的定量指標哈巴苷和哈巴俄苷的總量來評價，各種“發(fā)汗”方法的制品均符合《藥典》規(guī)定的含量要求。

2.9 綜合評分法 優(yōu)選玄參的“發(fā)汗”方法根據(jù)參考文獻[9]，采用綜合評分法優(yōu)選玄參“發(fā)汗”方法。在數(shù)據(jù)處理時引用指標隸屬度，即指標隸屬度=（指標最大值-指標值） /（指標最大值-指標最小值） 。根據(jù)各指標在玄參中的重要性，考慮以哈巴苷占35%、哈巴俄苷占35%、肉桂酸占30%的權重，實驗綜合評分=哈巴苷占隸屬度×35%+哈巴俄苷隸屬度×35%+肉桂酸隸屬度×30%，總分為1.00分。評分結果以綜合分數(shù)作為總指標進行直觀分析。結果見表5。

從表5的綜合評分來看，得分最高的是A4樣品，即蒸后發(fā)汗烘干品。因此，通過綜合評分篩選出的玄參最佳發(fā)汗方法為：將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內(nèi)隔水蒸30min（按“圓氣”后計）后，取出，于60℃烘至半干，于陰涼通風處堆放3d，取出，60℃烘30min后再堆放，反復發(fā)汗3次。

3 討論

藥材在干燥過程中，含黏液質、淀粉或糖較多的藥材不易干燥，經(jīng)蒸、煮或燙處理后，則易干燥，而玄參氣味有明顯的焦糖氣[2]，且已有文獻資料[10]顯示玄參中多糖含量達13.83%。因此，實驗中樣品制備方法的選擇在2020版《中國藥典》規(guī)定的玄參產(chǎn)地加工方法的基礎上，參考文獻[11-14]增加了“蒸后發(fā)汗”曬干品和烘干品、“煮后發(fā)汗”曬干品和烘干品。從發(fā)汗的時間來看，“蒸后發(fā)汗”和“煮后發(fā)汗”大大縮短了后續(xù)的曬或烘的時間。從哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸含量的綜合評分來看，“蒸后發(fā)汗”品的綜合評分明顯高于“藥典發(fā)汗”品和“煮后發(fā)汗”品，其中“蒸后發(fā)汗”烘干品的綜合評分最高（0.9695），但“煮后發(fā)汗”品綜合評分相對較低，分析原因可能是新鮮玄參在煮的過程中與水接觸導致哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸溶出。此外，每一種“發(fā)汗”烘干品的綜合評分都高于曬干品，推測其原因可能是烘干品干燥的時間較短，減少了玄參中哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸三種有效成分的氧化或水解[15]。

黔產(chǎn)玄參的采收時間為10～11月，而此時貴州天氣陰冷潮濕，平均溫度為9～15℃，預實驗在15℃、20℃、25℃溫度下考察“發(fā)汗”溫度時，發(fā)現(xiàn)20℃以上溫度“發(fā)汗”都會使玄參發(fā)霉變質，因此本試驗中所有樣品“發(fā)汗”的溫度均為20℃以下的貴州常溫，且樣品干燥方法采用曬干法時，由于空氣中水分含量較高，曬干的時間較長，增加了時間成本。因此，結合貴州的氣候特點，建議黔產(chǎn)玄參“發(fā)汗”過程中干燥時采用烘干法，發(fā)汗樣品的處理采用“蒸后發(fā)汗”法，該方法可為黔產(chǎn)玄參產(chǎn)地加工方法的建立提供參考。對于黔產(chǎn)玄參的發(fā)汗機制和藥理作用還需進一步深入研究。

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（收稿日期：2021-11-02 編輯：陶希睿）