不同品牌串聯(lián)質(zhì)譜儀新生兒遺傳代謝病篩查結(jié)果比對

唐誠芳， 韋青秀， 秦劍榮， 唐 芳， 劉思遲， 蔣 翔， 黃永蘭

[1. 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心新生兒篩查中心，廣東 廣州 510180；2. 珀金埃爾默醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，上海 201203]

隨著串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在臨床的廣泛應(yīng)用及新生兒遺傳代謝病篩查覆蓋面的擴大[1]，各新生兒篩查中心遺傳代謝病篩查能力要求被大大提高。同一篩查中心會采用多臺串聯(lián)質(zhì)譜儀來檢測同一項目，以滿足臨床需求。臨床實驗室采用的國際標(biāo)準(zhǔn)ISO/IEC 17025[2]和ISO 15189[3]均對不同系統(tǒng)檢測結(jié)果的可比性提出了明確要求，強調(diào)通過比對試驗實現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)測定結(jié)果可比的重要性。本研究參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A2文件[4]，對廣州市婦女兒童醫(yī)療中心新生兒篩查中心的2臺串聯(lián)質(zhì)譜儀進行驗證，對新生兒篩查的9個氨基酸項目[丙氨酸（alanine，ALA）、瓜氨酸（citrulline，CIT）、甘氨酸（glycine，GLY）、亮氨酸（leucine，LEU）、甲硫氨酸（methionine，MET）、苯丙氨酸（phenylalanine，PHE）、脯氨酸（proline，PRO）、酪氨酸（tyrosine，TYR）、纈氨酸（valine，VAL）]、12個?；鈮A項目[乙酰肉堿（acetyl carnitine，C2）、丙酰肉堿（propionylcarnitne，C3）、丁酰肉堿（isobutyryl carnitine，C4）、異戊酰肉堿（isovaleryl carnitine，C5）、戊二酰肉堿（glutaryl carnitine，C5DC）、己酰肉堿（hexyl carnitine，C6）、辛酰肉堿（octyl carnitine，C8）、葵酰肉堿（decyl carnitine，C10）、月桂酰肉堿（lauroyl carnitine，C12）、肉豆蔻酰肉堿（nutmeg carnitine，C14）、棕櫚酰肉堿（palmitoyl carnitine，C16）、十八碳酰肉堿（octadecyl carnitine，C18）]和游離肉堿（free carnitine，C0）項目進行比對分析和偏移評估，判斷其臨床可接受性，為實現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)之間篩查結(jié)果的可比提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

QSight 210MD串聯(lián)質(zhì)譜儀（簡稱QSight 210MD，美國PerkinElmer公司）及配套校準(zhǔn)品，UPLC I-Class Xevo TQD串聯(lián)質(zhì)譜儀（簡稱Xevo TQD，美國Waters公司）及配套校準(zhǔn)品，NeoBase試劑盒（批號670969）購自美國PerkinElmer公司。

1.2 干血斑樣本的采集及制作

參照《新生兒疾病篩查濾紙血片采集和遞送及保存專家共識》[5]的要求，在家屬知情同意的情況下，采集新生兒出生后3～7 d的足跟血，滴至whatman903濾紙片上，自由擴散形成血斑，自然晾干，充分干燥4 h，制成干血斑。

1.3 方法

1.3.1 批內(nèi)與批間精密度分析 取試劑盒配套的高、低值質(zhì)控品，在1 d內(nèi)連續(xù)測定3次，計算變異系數(shù)（coefficient of variation，CV），即批內(nèi)精密度；連續(xù)測定5 d，計算CV，即批間精密度。

1.3.2 相關(guān)性分析 按實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，每天收集8份新生兒干血斑樣本，編為1～8號，每天按1→8、8→1的順序在QSight 210MD和Xevo TQD上進行檢測，檢測時間不超過2 h，間斷測定5 d，記錄全部結(jié)果。以Xevo TQD為參考儀器（Y），QSight 210 MD為比對儀器（X），繪制散點圖，建立2臺儀器檢測結(jié)果的直線回歸方程（Y=bX+a），計算r值。每批樣本均需加入空白和質(zhì)控，確保質(zhì)控在控。按CLSI EP9-A2文件[4]要求，對檢測結(jié)果進行離群值分析，以4倍相對標(biāo)準(zhǔn)差的均值為判斷限，剔除有明確人為誤差的結(jié)果。根據(jù)r值判斷比對儀器檢測結(jié)果分布范圍是否合適，若r≥0.975或r2≥0.95，判定為X取值范圍合適，直線回歸方程的斜率（b）和截距（a）可靠；若r<0.975或r2<0.95，判定為比對儀器檢測結(jié)果精密度較差或X取值范圍不合適，直線回歸方程的b和a不可靠，須擴大樣本量重新測定。

1.3.3 臨床可接受性能判斷 由于新生兒遺傳代謝病篩查項目較多，且目前尚無一致的醫(yī)學(xué)決定水平（Xc），因此本研究比對時使用本實驗室的參考區(qū)間。另外，除C0參考區(qū)間上、下限均有臨床意義外，其他篩查項目的參考區(qū)間下限無太大的臨床意義[6]。因此，C0項目選擇參考區(qū)間上、下限，其他項目均選擇參考區(qū)間上限作為Xc處的濃度值。將該值代入回歸方程，計算實驗方法（Y）與比對方法（X）之間的絕對系統(tǒng)誤差（systematic error，SE）和相對系統(tǒng)誤差（SE%），SE=｜Yc-Xc｜，SE%=｜Yc-Xc｜/Xc×100%。以我國國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心全國室間質(zhì)量評價允許總誤差（allowable total error，TEa）（氨基酸為25%、肉堿為30%）的1/2為標(biāo)準(zhǔn)，在參考區(qū)間上限處的預(yù)期偏差應(yīng)<1/2 TEa[7]。

2 結(jié)果

2.1 精密度評價

QSight 210MD和Xevo TQD各比對項目的批內(nèi)和批間精密度均<7%，符合臨床要求。見表1。

表1 QSight 210MD和Xevo TQD批內(nèi)、批間精密度分析

續(xù)表1

2.2 相關(guān)性分析

QSight 210MD與Xevo TQD除C5DC、C6、C8項目r<0.975外，其他項目的r值均>0.975。見表2。

表2 QSight210MD與XevoTQD檢測各項目的相關(guān)性

2.3 臨床可接受性能評價

將C0參考區(qū)間上、下限及其他項目參考區(qū)間上限分別代入各回歸直線方程，計算SE和SE%。所有項目的SE%均<1/2 TEa。見表3。

表3 QSight 210MD和Xevo TQD的臨床可接受性能評價

3 討論

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒遺傳代謝病篩查方面具有廣闊的應(yīng)用前景，國外已將其廣泛用于新生兒及高危遺傳代謝病常規(guī)篩查[8]。在國內(nèi)，北京、上海、廣州等地也已將串聯(lián)質(zhì)譜（衍生化法）用于新生兒遺傳代謝病篩查[9-10]。隨著串聯(lián)質(zhì)譜遺傳代謝病篩查技術(shù)的推廣，相關(guān)專家共識[11]的出臺，國內(nèi)越來越多的新生兒篩查中心開始將串聯(lián)質(zhì)譜用于遺傳代謝病篩查[12]，樣本的前處理也逐步采用快速、簡單的非衍生化法。目前，隨著可用于新生兒遺傳代謝病篩查的串聯(lián)質(zhì)譜儀的型號和品牌的增多，同一篩查中心用于檢測同一項目的串聯(lián)質(zhì)譜儀可能為不同型號，從而形成了不同的檢測系統(tǒng)。因此，評價不同串聯(lián)質(zhì)譜檢測系統(tǒng)之間的一致性程度至關(guān)重要。串聯(lián)質(zhì)譜檢測在新生兒篩查中有較完整的質(zhì)量控制體系[13]，但關(guān)于不同串聯(lián)質(zhì)譜儀在臨床應(yīng)用中的比對分析尚未見報道。本研究結(jié)果顯示，QSight 210MD和Xevo TQD的批內(nèi)、批間精密度均較好（CV<7%），能滿足臨床要求。2臺儀器除C5DC、C6、C8的r值<0.975外，其他項目的r值均>0.975，符合臨床要求。原因可能是Xevo TQD的檢測結(jié)果只能精確到小數(shù)點后2位，而大部分新生兒C5DC、C6、C8水平為0～0.1 μmol/L，加上用于新生兒遺傳代謝病篩查的串聯(lián)質(zhì)譜儀的靈敏度相對較低，所以C5DC、C6和C8項目的r值未能達到0.975。

由于新生兒遺傳代謝病篩查的項目較多，部分項目因濃度太低而無法用于比對，美國臨床實驗室改進修正法規(guī)（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988，CLIA'88）亦無此類項目的參考允許誤差，因此本研究采用全國室間質(zhì)量評價TEa的1/2作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。臨床可接受性能評價結(jié)果顯示，QSight 210MD與Xevo TQD比對項目的SE%均低于全國室間質(zhì)量評價TEa的1/2，達到臨床可接受水平。

綜上所述，QSight 210MD與Xevo TQD之間除C5DC、C6和C8項目外，其他項目相關(guān)性均良好，所有項目的SE%臨床均可接受，能夠滿足臨床要求。對不具有可比性的項目，有必要針對不同檢測系統(tǒng)建立不同的參考區(qū)間。目前，實現(xiàn)不同串聯(lián)質(zhì)譜檢測系統(tǒng)遺傳代謝病篩查結(jié)果可比仍存在不少問題，如無公認的TEa標(biāo)準(zhǔn)等，需要進一步研究加以解決。在實際工作中，若出現(xiàn)操作人員更換、儀器更換部件和試劑、使用中出現(xiàn)較大偏差等情況，應(yīng)對儀器進行比對分析。如比對不一致，應(yīng)及時找出原因并解決問題，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。