海南省白沙黎族自治縣畜間布魯氏菌病緊急流行病學調查

遲慶安，林明江，孫明軍，邵衛(wèi)星，王 牌，王 剛，王 璟，孫淑芳，樊曉旭，張皓博，田莉莉，孫翔翔，李慶霞，謝有志 ，范偉興

（1.海南省動物疫病預防控制中心，海南?？?571100；2.白沙黎族自治縣動物疫病預防控制中心，海南白沙 572800：3.中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032）

布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q布?。┯址Q波浪熱、地中海熱、馬耳他熱，也叫懶漢病，是由布魯氏菌引起的羊、牛、豬、鹿、犬等哺乳動物和人類共患的一種慢性傳染病，廣泛流行于世界170 多個國家和地區(qū)[1]。布病危害嚴重，全世界僅農(nóng)業(yè)損失每年近30 億美元[2]。為此，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報動物疫病，我國將其列為乙類傳染病和二類動物疫病[3]。海南省2017 年以前僅有零星人畜布病病例報告[4-6]，為非傳統(tǒng)布病流行區(qū)，在《國家布魯氏菌病防治計劃（2016—2020 年）》中，被列于三類地區(qū)（無本地新發(fā)人間病例和畜間疫情），采取以風險防范為主的防控策略，禁止對牛羊實施布病免疫。而從2017 年起，海南省布病疫情報告數(shù)逐漸增多。據(jù)海南省動物疫病預防控制中心監(jiān)測，畜間布病疫情以東方市為聚集區(qū)，并向臨高、儋州、昌江、白沙、瓊中、萬寧、陵水等地輻射，涉及羊、牛、豬等易感動物，但以羊為主。

2021 年6 月，白沙黎族自治縣一村民確診感染布魯氏菌。為查明畜間疫情狀況，及時控制疫情，繼而提出有針對性防控建議，海南省動物疫病預防控制中心聯(lián)合中國動物衛(wèi)生與流行病學中心在當?shù)匦竽莲F醫(yī)等部門協(xié)助下開展了畜間緊急流行病學調查。

1 材料與方法

1.1 病例定義

1.1.1 可疑病例 被檢動物血清經(jīng)白沙黎族自治縣動物疫病預防控制中心采用虎紅平板凝集試驗（RBPT）檢測為布病陽性的病例。

1.1.2 確診病例 經(jīng)海南省動物疫病預防控制中心采用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）檢測為布病陽性的可疑病例。

1.2 現(xiàn)場調查

用衛(wèi)星地圖標記人病例所在村莊（疫點）位置，借助衛(wèi)星地圖了解疫點周邊區(qū)域環(huán)境；與縣疾病預防控制中心了解布病病例及周邊易感人群排查監(jiān)測情況，現(xiàn)場實地調查陽性養(yǎng)殖場點及周邊環(huán)境情況，與養(yǎng)殖戶座談了解其飼養(yǎng)管理、生產(chǎn)、引種、免疫以及發(fā)病治療情況，特別是流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等情況；與縣畜牧獸醫(yī)局、動物疫病預防控制中心相關人員以及鎮(zhèn)村干部、村級防疫員進行訪談或座談，了解轄區(qū)內(nèi)羊、牛、豬等易感動物養(yǎng)殖及布病既往史等情況。

1.3 樣品采集與檢測

在人病例所在村莊的養(yǎng)羊場及流行病學關聯(lián)場采集血清樣品，按照動物布病診斷技術國家標準（GB/T 18646—2018），采用RBPT 初篩，對篩檢陽性樣品再用cELISA 復核。對血清學確診為陽性的羊，采集脾臟、子宮角等組織樣品送中國動物衛(wèi)生與流行病學中心進行分離培養(yǎng)和鑒定分析。

2 結果

2.1 疫點基本情況

白沙黎族自治縣位于海南省西部，東與瓊中黎族苗族自治縣，南與樂東黎族自治縣，西與昌江黎族自治縣，北與儋州市接壤。報告的人布病病例居住于該縣西北部的榮邦鄉(xiāng)大嶺居社區(qū)某村莊（經(jīng)度109.051 946、緯度19.442 195，圖1）。該村住戶22 戶，常住人口50 余人。村莊周邊植被茂盛，為山區(qū)地形，交通相對閉塞，距離環(huán)島西線高速公路（G98）不到200 m，但并不直接相通，僅通過村道與外界相連（圖2）。該村共有羊養(yǎng)殖戶4 戶，調查時共計存欄120 只。羊圈多建于自家居住房屋前后，設施簡易，無任何生物安全防護設施及措施。村內(nèi)無豬、牛等其他易感動物養(yǎng)殖，周邊3 km 范圍內(nèi)無活羊定點屠宰場點及交易市場。

圖1 疫點所在位置

2.2 人病例情況

該確診病例為男性，職業(yè)為看守所輔警，2021 年3 月7 日出現(xiàn)乏力、發(fā)熱（不規(guī)則），關節(jié)疼痛，于2021 年6 月7 日到?？谑心翅t(yī)院就診，2021 年6 月16 日經(jīng)?？谑旋埲A區(qū)疾病預防控制中心檢測為布病抗體陽性。據(jù)回憶，其在年前及年后多次到離家50 m 的鐘某羊圈（檢測為陽性）共取走病殘羊羔3 只、羊胚胎4 個，在未采取任何防護措施情況下，自行加工處理（如拔毛、切割），通過火鍋方式食用。

2.3 人病例關聯(lián)養(yǎng)殖場情況

對與該病例有直接關聯(lián)的鐘某養(yǎng)殖場采集12份羊血清，經(jīng)白沙黎族自治縣動物疫病預防控制中心檢測，均為陽性，經(jīng)海南省動物疫病預防控制中心復檢，全部為陽性。鐘某羊養(yǎng)殖場位于村莊邊緣，北邊為水塘和橡膠林，東邊和西邊為荒地，南邊緊鄰村居民區(qū)（圖3）。羊圈設施簡陋，場地內(nèi)無消毒等生物安全防護設施，外來人員可直接進入圈內(nèi)；場內(nèi)無隔離舍，引進羊時直接混群飼養(yǎng)；場內(nèi)沒有無害化處理設施，圈舍旁邊緊挨場主居室，人畜生活區(qū)未有效隔離；場內(nèi)有鴨等其他動物混養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件較差（圖4）。鐘某從2015年開始養(yǎng)殖，養(yǎng)殖品種為本地黑山羊和雜交褐色山羊（圖5），調查時存欄44 只；飼養(yǎng)方式以放養(yǎng)為主，白天趕往村外的灌木林地、草場等放牧，晚上趕回羊圈，與村內(nèi)其他養(yǎng)殖戶羊群經(jīng)常輪流進入放牧地交叉放羊。鐘某養(yǎng)殖羊群平時主要由該村防疫員負責免疫工作，免疫了口蹄疫和小反芻獸疫疫苗，未免疫布病疫苗，銷售羊只主要通過羊販運人員上門收購；養(yǎng)殖模式為自繁自養(yǎng)與引種相結合，2021 年3 月曾與本鄉(xiāng)相鄰的邦溪鎮(zhèn)一養(yǎng)殖戶交換種公羊。2021年以來，鐘某養(yǎng)殖羊群中個別羊只出現(xiàn)流產(chǎn)，但無死亡。鐘某對流產(chǎn)的羊仔或死胎未進行無害化處理，均隨意丟棄。

圖3 鐘某羊圈位置及周邊環(huán)境

圖4 鐘某羊圈現(xiàn)狀

圖5 鐘某所養(yǎng)羊品種

2.4 疫情排查監(jiān)測情況

對疫點所在村的其余3 戶養(yǎng)殖戶（A、B、C）采集羊血清55 份，經(jīng)白沙黎族自治縣動物疫病預防控制中心初檢，檢出陽性29 份，經(jīng)海南省動物疫病預防控制中心復核，全部為陽性；對與鐘某交換種公羊的邦溪鎮(zhèn)流行病學關聯(lián)養(yǎng)羊場（D）采集血清樣品25 份，經(jīng)白沙黎族自治縣動物疫病預防控制中心初檢，檢出陽性1 份，經(jīng)海南省動物疫病預防控制中心復檢，仍為陽性（表1）。轄區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府組織人員對上述確診存在布病陽性的5 個養(yǎng)殖戶的同群所有羊只進行撲殺并無害化處理。

表1 疫點所在村及流行病學關聯(lián)場排查監(jiān)測情況 單位：份

白沙黎族自治縣疾病預防控制中心對疫點所在村養(yǎng)羊戶及密切接觸者采集血清20 人份，經(jīng)RBPT 初篩，試管凝集試驗復核，結果9 人確診為布病抗體陽性。

2.5 病原分離鑒定

對采集的羊脾臟、子宮角等組織樣品進行布魯氏菌分離培養(yǎng)，結果從鐘某羊場樣品中分離到布魯氏菌。經(jīng)生物型鑒定，分離菌株為羊種布魯氏菌3 型，與之前海南省東方市分離菌株類型一致[4]。多位點可變數(shù)目串聯(lián)重復序列（MLVA）分析顯示，該菌株基因型為1-5-3-13-2-2-3-2-4-41-8-4-4-9-4-4（表2）。與布魯氏菌MLVA 國際數(shù)據(jù)庫（https://microbesgenotyping.i2bc.paris-saclay.fr/）的菌株信息比對發(fā)現(xiàn)：該菌株的MLVA8 基因型（前8 個位點）的編號為42，MLVA11 基因型編號為116，為我國北方地區(qū)和中亞地區(qū)羊種布魯氏菌常見基因型；但是該菌的MLVA16 基因型（包括所有16 個位點）在數(shù)據(jù)庫中沒有匹配的菌株信息，說明該基因型為新發(fā)現(xiàn)的基因型。

表2 海南省羊種布魯氏菌3 型菌株信息

3 討論

3.1 病原來源推測

本次疫情因養(yǎng)殖戶引進羊只未申報檢疫且沒有詳細生產(chǎn)管理臺賬，缺乏真實詳細的羊只引進信息，無法開展疫情溯源調查，確定病原來源，但結合調查結果，推測此次疫情的病原通過引種傳入的可能性較大。（1）本次疫情發(fā)生地與2019 年發(fā)生布病疫情的白沙縣元門鄉(xiāng)相距不遠（約70 km），疫點所在的榮邦鄉(xiāng)近年來無布病疫情發(fā)生。（2）疫點養(yǎng)羊戶羊圈設施簡陋，無隔離圈舍；場地內(nèi)無消毒設施，且未采取生物安全防護措施；引進羊只時從不申報檢疫，且引進后直接混群飼養(yǎng)。（3）疫點飼養(yǎng)的褐色山羊并非本地傳統(tǒng)養(yǎng)殖品種，與之前東方市發(fā)生布病疫情的山羊品種一致[5]；疫點處于白沙、儋州、昌江等市縣交界地區(qū)，養(yǎng)殖戶跨市縣引進羊只現(xiàn)象較普遍；海南省動物疫病預防控制中心監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，相鄰的昌江、儋州以及周邊的東方等市縣之前均有布病疫情報告。（4）病原學鑒定結果顯示，分離的菌株與之前東方市疫情菌株生物型一致，均為羊種布魯氏菌3 型，基因型也相似。

3.2 疫情擴散途徑

從人病例感染情況及布病潛伏期特點推測，該地布病病原傳入時間至少在2021 年3 月以前。該村羊飼養(yǎng)方式以放養(yǎng)為主，白天趕往村外的灌木林地、草場等放牧，晚上趕回羊圈，各家羊群經(jīng)常輪流進入放牧地交叉放羊，同時流產(chǎn)胎兒隨意丟棄野外，非常容易使布病病原在本村內(nèi)羊群內(nèi)傳播擴散。加上銷售羊只未申報檢疫，使感染羊只銷往外地，導致邦溪鎮(zhèn)流行病學關聯(lián)場檢測結果陽性。由于養(yǎng)殖戶無詳細的羊只銷售信息，無法準確追蹤銷售羊只去向，因此需要繼續(xù)擴大監(jiān)測范圍，加大疫情排查監(jiān)測力度，評估疫情擴散風險。

4 啟示

從2016 年起，海南省加大脫貧攻堅力度，發(fā)展鄉(xiāng)村特色產(chǎn)業(yè)，山羊養(yǎng)殖作為當?shù)貍鹘y(tǒng)優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，具有良好的銷售市場，經(jīng)濟效益可觀，因此被作為特色扶貧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)之一予以重點扶持，但本地山羊種源缺乏，無法滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要，島內(nèi)外山羊價格差異較大，一些不法商販趁機從島外違規(guī)引進未檢疫羊問題層出不窮，造成布病輸入性風險加大。研究[5]發(fā)現(xiàn)，違規(guī)引進未檢疫羊為海南省發(fā)生輸入性布病的主要原因，從而形成布病傳播“點”。海南省畜牧業(yè)養(yǎng)殖以散養(yǎng)為主，特別是羊養(yǎng)殖規(guī)?；潭容^低，以放養(yǎng)為主，農(nóng)村不同養(yǎng)殖戶羊群共用荒坡草地放牧，容易使布病在村內(nèi)養(yǎng)殖戶羊群間傳播，形成布病傳播“線”。海南省內(nèi)動物跨市縣調運產(chǎn)地檢疫落實力度不足，一些養(yǎng)殖戶不熟悉動物調運有關法律法規(guī)，同時隨著綜合執(zhí)法改革的推進，動物檢疫與監(jiān)督執(zhí)法分離后，動物防疫監(jiān)督機制未理順，使得不申報檢疫現(xiàn)象突出。另外，產(chǎn)地檢疫方法傳統(tǒng)，仍停留在眼觀方式，而布病臨床癥狀并不明顯，僅憑眼觀難以判斷動物是否感染布病病原，造成一些未檢疫或雖經(jīng)檢疫合格但實際已感染的羊在海南省部分市縣間流通而傳播，形成布病傳播“面”。

病原學鑒定分析結果也初步證明了布病在海南省畜間流行傳播的路徑。2017 年，中國動物衛(wèi)生與流行病學中心從東方市羊群中分離到羊種布魯氏菌的4 個基因型（HN-1、2、3、5）。這些基因型在黑龍江、內(nèi)蒙古、青海、浙江、廣東等省份都有報道，還有1 個基因型（HN-6）與地中海國家土耳其發(fā)現(xiàn)的基因型完全一致[7-9]，表明2017 年東方市布病疫情由外地傳入病原所致。從MLVA16基因型看，導致本次白沙縣疫情的病原比較獨特，未見任何資料報道過。但是，在其16 個位點中，前11 個較為保守的位點（MLVA11：116）與我國北方的流行菌株及東方市分離的部分菌株完全一致，僅有后面5 個變異率較高的位點呈現(xiàn)出特異性。根據(jù)布魯氏菌基因型的這些特點，可以得出初步結論，海南省的畜間布病疫情主要由外地動物輸入引起，并已呈現(xiàn)出本地定殖的趨勢，且經(jīng)不斷演化變異形成了地方特有基因型。

本次調查發(fā)現(xiàn)，本地大部分養(yǎng)殖戶不了解布病防控知識，更不知道其為人獸共患病，經(jīng)常不采取防護措施而直接徒手接產(chǎn)，隨意丟棄流產(chǎn)胎兒及流產(chǎn)物，長時間密切接觸患病羊及其排泄物，羊圈多靠近居住區(qū)，人畜混居現(xiàn)象普遍，衛(wèi)生環(huán)境條件較差，因而導致人感染[4]。布病臨床癥狀不明顯，多為隱性感染。本次調查發(fā)現(xiàn)，該村多個養(yǎng)殖戶和羊群檢測為血清學陽性，但其并未表現(xiàn)出臨床癥狀，使得布病不易及時發(fā)現(xiàn)，造成布病在一定區(qū)域內(nèi)長時間傳播擴散，這也是布病防控的一個難點。隨著海南自由貿(mào)易港建設的推進，海南省的布病防控形勢將會更加嚴峻，這需要引起政府部門的高度重視。而布病防控涉及社會的方方面面，應以政府主導，農(nóng)業(yè)農(nóng)村、衛(wèi)生健康、市場監(jiān)管、綜合執(zhí)法、公安等多部門參與，各司其職，加大“人、財、物”投入。強化布病防控知識宣傳培訓干預，對養(yǎng)殖人員、屠宰人員以及獸醫(yī)等高風險人群及易感動物開展主動排查監(jiān)測，摸清流行本底，加強動物移動控制監(jiān)管，筑牢防控屏障，健全基層防疫機構體系建設，提升基層防疫人員技術水平，推進農(nóng)村環(huán)境衛(wèi)生整治和社會治安綜合治理，多措并舉，才能保障海南自由貿(mào)易港的公共衛(wèi)生安全。