液相色譜法測定茶筍中的阿斯巴甜和阿力甜

王攀峰 薛曉偉 鄧文輝

阿斯巴甜（Aspartame，天門冬酰苯酸甲酯）由兩種不同的氨基酸即天門冬氨酸和苯丙氨酸合成，甜度為蔗糖的200倍，可以有效地降低熱量，而且攝入后的消化、吸收和代謝過程不會造成牙齒齲壞，安全性高。阿力甜（Alitanme，L-2-天冬氨酰-D-丙氨酰胺），甜度是蔗糖的2000倍，對酸、對熱的穩(wěn)定性好。阿斯巴甜和阿力甜均為人工合成的非碳化合物類的人造甜味劑，因為甜度高、熱量低，多被廣泛應(yīng)用于各類食品中作為糖的替代品。人工合成甜味劑也要限量使用，若超范圍使用或者濫用則可能引起不同程度的毒性表現(xiàn)，因此采取科學(xué)方法準確測定食品中阿斯巴甜和阿力甜的含量至關(guān)重要。

目前GB5009.263-2016《食品安全國家標準 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定》規(guī)定了部分食品中阿斯巴甜和阿力甜的檢測方法，茶筍可參考執(zhí)行，但需要對檢驗方法進行優(yōu)化并驗證。根據(jù)阿斯巴甜和阿力甜易溶于水、甲醇和乙醇等極性溶劑的特點設(shè)計提取方法，經(jīng)過多次試驗后發(fā)現(xiàn)在制備好的茶筍混勻樣品中加入50%甲醇水溶液并過夜泡發(fā)后，離心提取試樣中的阿斯巴甜和阿力甜效果最佳。

本實驗參考國標GB 5009.263-2016《食品安全國家標準 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定》中蔬菜及其制品的檢測方法，建立了一種測定茶筍中的阿斯巴甜和阿力甜的高效液相色譜方法，即：用50%甲醇水溶液提取試樣中的阿斯巴甜和阿力甜，以乙腈-水（20︰80）為流動相，流速0.8mL/min，在200nm波長下檢測。結(jié)果表明，阿斯巴甜和阿力甜的低濃度線性和高濃度線性均良好，檢出限、精密度、回收率均滿足要求，而且靈敏度高、重復(fù)性良好、操作簡單，可以準確測定茶筍中的阿斯巴甜和阿力甜，完全能夠滿足檢驗機構(gòu)日常檢測任務(wù)的要求。

一、儀器與試劑

1.儀器。熱電U3000高效液相色譜儀（DAD檢測器）;梅特勒XS204電子天平;梅特勒-托利多MS105DU電子天平;HC-3018高速離心機;FLUKO均質(zhì)器;KQ-500DE超聲波清洗器;IKA?MS3漩渦混合器。

2.試劑。阿斯巴甜（BePure，純度95.0%）;阿力甜（BePure，純度99.4%）;乙腈（色譜純，迪馬）;甲醇（色譜純）;乙醇（優(yōu)級純）;純化水。

3.儀器條件。檢測器：DAD檢測器，檢測波長：200nm，流動相：乙腈-水（20︰80）;色譜柱：戴安C18色譜柱，250mm×4.6mm，5μm;流速：0.8mL/min，柱溫：30℃，進樣量：20μL。

二、試驗與方法

1.標準液線性考察。（1）分別準確稱取阿斯巴甜0.01089g、阿力甜0.01060g于10mL容量瓶中，用水定容，得到濃度分別為1.0346mg/mL、1.0536mg/mL的標準儲備液，于4℃條件下貯存?zhèn)溆谩＃?）分別準確吸取阿斯巴甜、阿力甜標準儲備液各1mL于10mL容量瓶中，用水定容。（3）分別精密移取阿斯巴甜和阿力甜溶液30μL、50μL、60μL、80μL、100μL、600μL、1000μL于10mL容量瓶中，加水定容至10mL，進行液相色譜分析，記錄色譜峰面積，并繪制標準工作曲線。

阿斯巴甜線性方程：y=1.2583x-0.0729，r=0.9999。

阿力甜線性方程：y=0.9318x+0.0225，r=1。

2.樣品制備。取適量茶筍樣品剪成顆粒狀后混勻，稱取混勻樣品約2g（精確到0.001g）于50mL塑料離心管中，加入25mL濃度為50%的甲醇水溶液，蓋上蓋子搖勻，超聲10min，過夜泡發(fā)（16h）。用均質(zhì)器以10000r/min的速度均質(zhì)1min后，離心取上清液，過濾，濾液經(jīng)0.45μm有機系濾膜過濾后用于色譜分析。

三、結(jié)果與分析

1.檢出限確定。稱取茶筍混勻樣品，分別加入濃度為103.455μg/mL的阿斯巴甜標液0.10mL和濃度為105.364μg/mL的阿力甜標液0.1mL，按上述樣品制備方法處理后上機測試。結(jié)果表明，2種色譜峰高度均大于其3倍噪音，故在茶筍樣品中阿斯巴甜的檢出限為0.005g/kg，阿力甜的檢出限為0.005g/kg。

2.精密度試驗。取茶筍樣品中回收試驗1份，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，計算RSD值。試驗結(jié)果詳見表1。

3.回收率試驗。稱取茶筍混勻樣品9份，進行3個水平的9次加標回收試驗。1、2、3號樣品加入濃度為103.455μg/mL的阿斯巴甜標準溶液0.3mL和濃度為105.364μg/mL的阿力甜標準溶液0.3mL，4、5、6號樣品加入濃度度為103.455μg/mL的阿斯巴甜標準溶液0.6mL和濃度為105.364μg/mL的阿力甜標準溶液0.6mL，7、8、9號樣品入濃度為1034.55μg/mL的阿斯巴甜標準溶液0.2mL和濃度為1053.64μg/mL的阿力甜標準溶液0.3mL，按上述樣品制備方法處理后上機測試。以1、2、3、4、5、6、7、8、9號樣品測試結(jié)果計算回收率，均大于95%，符合國家標準GB/T 27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢驗》附錄F要求。

按照本試驗中的方法對茶筍中阿斯巴甜和阿力甜進行線性、檢出限、精密度、回收率、重復(fù)性的驗證，均滿足相關(guān)要求，有利于日常檢驗工作的開展，也為后續(xù)阿斯巴甜和阿力甜檢測方法的改進提供了新的思路。

作者簡介：王攀峰（1988-），女，漢族，山西平遙人，碩士研究生，中級工程師，研究方向為食品安全。