• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    菌劑對(duì)苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物群落的影響

    2021-11-06 02:58:36毛婷牛永艷鄭群楊濤穆永松祝英季彬王治業(yè)
    生物技術(shù)通報(bào) 2021年9期
    關(guān)鍵詞:菌劑苜蓿發(fā)酵液

    毛婷 牛永艷 鄭群 楊濤 穆永松 祝英 季彬 王治業(yè)

    (1. 甘肅省科學(xué)院生物研究所 甘肅省微生物資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蘭州 730000;2. 甘肅華瑞農(nóng)業(yè)股份有限公司,張掖 734500)

    被稱(chēng)為飼草蛋白之王的紫花苜蓿是我國(guó)反芻動(dòng)物的主要飼草來(lái)源,在我國(guó)東北、華北、西北等地區(qū)都適宜種植不同抗寒、耐鹽、高產(chǎn)、抗病品種的紫花苜蓿。紫花苜蓿蛋白質(zhì)含量高、微生物及礦物質(zhì)含量豐富、氨基酸平衡,是一種優(yōu)良的保健飼料[1]。在苜蓿主產(chǎn)區(qū),由于雨水與熱量同期,苜蓿收獲季節(jié)在制備苜蓿干草過(guò)程中容易受到雨水、落葉等損失,很難曬制成優(yōu)質(zhì)的干草,紫花苜蓿的青貯成為解決上述問(wèn)題較為理想的途徑。紫花苜蓿屬于豆科多年生草本植物,可溶性碳水化合物及干物質(zhì)含量低,在青貯過(guò)程中難以快速降低pH,減少梭狀芽胞桿菌生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)水解和異氧發(fā)酵,提高青貯適口性[2]。因此,必需研究開(kāi)發(fā)適宜于紫花苜蓿青貯的專(zhuān)一菌劑產(chǎn)品。

    目前,關(guān)于菌劑產(chǎn)品的研究報(bào)道許多,市場(chǎng)上青貯的菌劑產(chǎn)品多樣,品質(zhì)層次不一。青貯菌劑主要以乳酸菌菌株為主,添加多種功能性酶,具有添加量小、安全、易操作、無(wú)污染等優(yōu)勢(shì)[3];青貯密封后可以快速降低pH,減少蛋白質(zhì)的分解;抑制青貯發(fā)酵溫度上升,減少干物質(zhì)的損失;不宜發(fā)生二次發(fā)酵[4]。對(duì)于不同青貯原料開(kāi)發(fā)不同青貯菌劑的研究報(bào)道有許多,俸祥仁等[5]以黑曲霉、乳酸菌及產(chǎn)軟假絲酵母復(fù)配青貯菌劑并運(yùn)用于甘蔗葉梢青貯中。Fija?kowska等[6]采用3種不同乳酸菌作用于甜菜中提高青貯有氧穩(wěn)定性,降低產(chǎn)毒真菌的濃度。Hager等[7]以植物乳桿菌和小球菌復(fù)配菌劑,以提高辣根草和甜高粱青貯的發(fā)酵品質(zhì)。目前關(guān)于苜蓿等豆科植物單獨(dú)青貯的菌劑產(chǎn)品較少[8]。

    綠汁發(fā)酵液是一種新型的乳酸菌類(lèi)青貯菌劑,是將原料鮮草的汁液在厭氧條件下培養(yǎng),富集原料上附著的野生乳酸菌中制備成棕色或棕黃色的液體[9]。綠汁發(fā)酵液中存在適宜于原料發(fā)酵所需的豐富的乳酸菌,Li等[10]報(bào)道了在38個(gè)苜蓿品種中分離得到84株乳酸菌隸屬于7個(gè)屬15個(gè)種及亞種。Chen等[11]研究了乳酸菌與纖維素酶聯(lián)合使用改善苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì),影響瘤胃發(fā)酵對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能產(chǎn)生積極影響。在苜蓿綠汁發(fā)酵液中分離篩選能在低碳水化合物下生長(zhǎng)、產(chǎn)酸能力強(qiáng)的菌株可用于開(kāi)發(fā)苜蓿青貯菌劑。研究表明,產(chǎn)酸能力強(qiáng)的乳酸菌株能快速的降低青貯pH值,為其他有益菌的生長(zhǎng)提供酸性環(huán)境[12];盧強(qiáng)等[13]研究發(fā)現(xiàn)在鹽堿地苜蓿青貯的微生物中,可能存在為數(shù)不多的藍(lán)細(xì)菌,并對(duì)鹽堿地苜蓿的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生促進(jìn)作用。包維臣等[14]研究發(fā)現(xiàn)在苜蓿青貯中添加植物乳桿菌可以使乳酸菌活菌數(shù)快速升高,并對(duì)梭菌、大腸菌群、酵母菌和霉菌等青貯有害微生物產(chǎn)生了抑制作用。青貯過(guò)程是微生物群落結(jié)構(gòu)復(fù)雜變化的過(guò)程。不同青貯添加劑的添加對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)有著不同的影響。

    有關(guān)青貯的研究多是從不同青貯原料、青貯條件等對(duì)青貯期間或開(kāi)封后微生物的影響方面進(jìn)行探討,較少將添加劑、青貯品質(zhì)與微生物多樣性結(jié)合進(jìn)行深入探討。本研究通過(guò)制備苜蓿綠汁發(fā)酵液分離篩選產(chǎn)乳酸能力強(qiáng)乳酸菌株并與實(shí)驗(yàn)室前期分離得到的菌株復(fù)配制備苜蓿青貯菌劑,研究不同的青貯菌劑對(duì)紫花苜蓿青貯的發(fā)酵品質(zhì)和微生物群落多樣性的影響,為青貯菌劑產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)與技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    紫花苜蓿來(lái)自于甘肅張掖華瑞農(nóng)業(yè)股份在有限公司種植地。青貯試驗(yàn)地位于張掖市民樂(lè)縣,E 100°22'-101°13',N 37°56'-38°48',海 拔2 309 m。試驗(yàn)開(kāi)展時(shí)間為2020年6月-9月,平均氣溫12℃-24℃,苜蓿原料有機(jī)組分如表1所示。

    表1 紫花苜蓿鮮草的化學(xué)組成Table 1 Chemical composition of fresh alfalfa

    1.2 方法

    1.2.1 試驗(yàn)處理 苜蓿收割后,放置田間晾曬1-2 d,用烘干法檢測(cè)水分含量為55%-60%。將晾曬水分含量為55%-60%的苜蓿切割為1-2 cm。4個(gè)處理組分別為:添加苜蓿綠汁發(fā)酵液(aFGJ組),添加進(jìn)口菌劑貯生宜寶(YB組),添加復(fù)配菌劑GSSW(GSSW組)、及未添加菌劑作為對(duì)照(CK組),每個(gè)處理組9個(gè)重復(fù)。將處理后的苜蓿草裝入50 L食品級(jí)塑料桶內(nèi)壓實(shí)封口后埋入地表下2 m貯存,樣品分別于30 d、50 d、70 d取樣檢測(cè)青貯的發(fā)酵特性和化學(xué)成分。對(duì)70 d的青貯微生物種群進(jìn)行分析。

    1.2.2 苜蓿青綠汁發(fā)酵液的制備 收集花蕾期苜蓿250 g,加入等量蒸餾水,在攪拌器中研磨攪拌,然后通過(guò)2層紗布過(guò)濾得到綠汁。將綠汁液500 mL藍(lán)蓋瓶中,加入2%葡萄糖,置于厭氧培養(yǎng)箱37℃厭氧培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)3 d得到苜蓿綠汁發(fā)酵液。采用梯度稀釋法測(cè)定活菌數(shù)。

    1.2.3 乳酸菌株的分離與鑒定

    1.2.3.1 乳酸菌株的分離 將苜蓿綠汁發(fā)酵液做標(biāo)準(zhǔn)10倍濃度系列梯度稀釋?zhuān)謩e取稀釋度為10-3、10-4、10-5、10-6倍的菌液100 μL涂于MRS篩選 培養(yǎng)基上,每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行試驗(yàn),培養(yǎng)基倒置放入37℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后觀(guān)察菌落形態(tài)及是否產(chǎn)生鈣溶圈。用游標(biāo)卡尺測(cè)量培養(yǎng)基中鈣溶圈直徑和菌落直徑,將兩者的比值記為Dd,選取比值較大的菌株進(jìn)一步劃線(xiàn)純化3代獲得單菌落。

    1.2.3.2 乳酸菌株的鑒定 利用微生物16S rDNA通用 引 物27F(5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3')、1492R(5'-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3')對(duì)菌株16S rDNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。菌落PCR條件:95℃ 5 min;95℃ 45 s,57℃退火50 s,72℃ 1 min,30循環(huán);72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物純化回收后送至上海生物技術(shù)有限公司測(cè)序,利用BLAST軟件將測(cè)序結(jié)果與GenBank中已有序列進(jìn)行比對(duì),并建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),確定菌株的種屬。

    1.2.4 青貯添加劑的特性 市售進(jìn)口菌劑宜生貯寶(美國(guó),成分:植物乳桿菌,乳酸片球菌,屎腸球菌,丙酸桿菌,枯草芽胞桿菌,黑曲霉;菌數(shù):≧2.0×1010CFU/g)。按照說(shuō)明書(shū)取0.1 g溶于200 mL水中,按規(guī)格均勻噴施于50 kg苜蓿上。產(chǎn)纖維素酶貝萊斯芽胞桿菌(Bacillus belais)K1和產(chǎn)淀粉酶枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)J1保存于甘肅省工業(yè)微生物菌種保藏中心,保藏號(hào)分別為GSICC 42323和GSICC 78393。K1的羧甲基纖維素酶活性達(dá)到370 U/mL,J1的α-淀粉酶活性達(dá)到110 U/mL。將菌株K1,K2及在苜蓿綠汁發(fā)酵液中篩選到的乳酸菌按照1∶1混合,得到復(fù)合青貯菌劑GSSW。采用梯度稀釋法測(cè)定活菌數(shù),青貯添加量為105CFU/g苜蓿。

    1.2.5 苜蓿青貯樣品理化及發(fā)酵品質(zhì) pH值采用pH計(jì)檢測(cè);氨態(tài)氮(ammonia nitrogen,NH3-N),總氮(total nitrogen,TN)采用凱氏定氮儀[15];乳酸(lactic acid,LA)、乙酸(acetic acid,AA)及丁酸(butyric acid,BA)含量采用HPLC,KC-811離子色譜柱,柱溫50℃,流動(dòng)相為3 mmol/L HCLO4溶液,進(jìn)樣量5 μL[16];干物質(zhì)(dry matter,DM)含量測(cè)定采用105℃烘干恒質(zhì)量法[17];可溶性碳水化合物(water soluble carbohydrates,WSC)含量采用蒽酮-硫酸比色法[17];粗蛋白含量=總氮×6.2;酸性洗滌纖維(acid detergent fiber,ADF)、中性洗滌纖維(neutral detergent fiber,NDF)及木質(zhì)素(lignin,LN)含量的測(cè)定采用纖維素測(cè)定儀。

    1.2.6 青貯樣品微生物多樣性分析 無(wú)菌條件下取苜蓿綠汁發(fā)酵液200 mL及發(fā)酵70 d苜蓿青貯樣品20 g與200 mL無(wú)菌生理鹽水混合,分別在37℃振蕩 2 h 制得菌懸液,無(wú)菌濾膜過(guò)濾獲得微生物菌體,每個(gè)樣品處理3個(gè)重復(fù)。按照Water DNA試劑盒步驟提取微生物總DNA。根據(jù)16S rDNA全長(zhǎng)引物27F和1492R,合成帶有Barcode的特異引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行純化、定量和均一化形成測(cè)序文庫(kù)(SMRT Bell)采用PacBio Sequel進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果與 NCBI 基因庫(kù)比對(duì),然后按照 97%相似性水平劃分操作分類(lèi)單元(OTU),選取最優(yōu)序列作為代表性序列,基于OTU分析結(jié)果,對(duì)樣品在各個(gè)分類(lèi)水平上進(jìn)行分類(lèi)學(xué)分析,獲得樣品在門(mén)、綱、目、科、屬、種分類(lèi)學(xué)水平上的物種分布柱狀圖[18]。利用QIIME軟件計(jì)算Alpha多樣性分析研究單個(gè)樣品物種豐度(richness)及物種多樣性(diversity);Beta多樣性(beta diversity)分析比較不同樣品在物種多樣性方面存在的相似程度[19]。

    1.2.7 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007軟件整理并用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。對(duì)不同處理組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素和一般線(xiàn)性模型分析,P<0.05代表差異顯著,P>0.05代表差異不顯著。

    2 結(jié)果

    2.1 苜蓿綠汁發(fā)酵液中菌株的分離鑒定

    根據(jù)MRS培養(yǎng)基上乳酸菌的菌落形態(tài)差異及鈣溶圈比值大小,挑選Dd比值較大菌株共得到3株,分別為MXLZ-1、MXLZ-2、MXLZ-4,Dd比值分比為8.82、8.39、7.29。通過(guò)PCR擴(kuò)增菌株16S rDNA片段,測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST同源性分析,選取親緣關(guān)系最近的13個(gè)菌株序列,采用MEGA7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),如圖1所示。從圖中看出菌株MXLZ-1、MXLZ-2及MXLZ-4的16S rDNA序列分別與小片球菌(Pediococcus parvulus)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)及戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)同源性≧99%。因此,菌株MXLZ-1、MXLZ-2及MXLZ-4分別鑒定為P. parvulus、L. plantarum及 P.pentosaceus。

    圖1 菌株16S rDNA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.1 Phylogenetic tree of 16S rDNA gene sequence of strains

    2.2 苜蓿青貯

    在無(wú)菌條件下將菌株MXLZ-1、MXLZ-2、MXLZ-4分別接入100 mLMRS培養(yǎng)基,菌株K1、J1分別接入100 mL營(yíng)養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基培養(yǎng),5種菌株發(fā)酵液按照1∶1∶1∶1∶1復(fù)配得到500 mL青貯菌劑GSSW。檢測(cè)GSSW青貯菌劑菌數(shù)為1.1×108g/mL。檢測(cè)苜蓿綠汁發(fā)酵液菌數(shù)為2.5×107g/mL。

    2.3 苜蓿青貯營(yíng)養(yǎng)成分變化

    青貯時(shí)間及青貯添加劑對(duì)苜蓿營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的影響如表2所示。從表中可以看出,添加菌劑3組DM及CP含量明顯高于CK組(P<0.05);隨青貯時(shí)間的延長(zhǎng),4組DM及CP含量顯著降低;YB組30 d DM含量達(dá)到最高為324 g/kg FM,GSSW組30 d CP含量達(dá)到最高為274 g/kg DM;與發(fā)酵前原料相比,YB與GSSW組CP含量顯著增加。在青貯過(guò)程中WSC含量變化較大,發(fā)酵30 d、50 d時(shí)除CK組外,其余3個(gè)組WSC含量降低,70 d后WSC又有所升高,70 d時(shí)GSSW組WSC含量為67.8 g/kg DM,高于其他3個(gè)組(P<0.05)。添加菌劑GSSW組及YB組ADF、NDF值顯著低于CK組,隨著青貯時(shí)間的延長(zhǎng),添加菌劑3組ADF及NDF顯著降低,而CK組無(wú)明顯變化,50 d后ADF及NDF降低速度緩慢,GSSW組及YB組苜蓿青貯NDF值分別為284、260 g/kg DM,ADF分別為314、323 g/kg DM;青貯過(guò)程中除YB處理組LN值明顯的降低外,其余3組無(wú)明顯變化。

    表2 青貯時(shí)間和青貯添加劑對(duì)苜蓿營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的影響Table 2 Effect of time and silage additive on the nutritional quality of alfalfa silage

    2.4 苜蓿青貯發(fā)酵特性及微生物的代謝產(chǎn)物變化

    青貯時(shí)間及青貯添加劑對(duì)苜蓿發(fā)酵品質(zhì)的影響如表3所示。從表中可以看出,除CK組pH降低速度較慢外,其余3個(gè)組pH在發(fā)酵50 d后都能快速的降到5以下;在青貯70 d后GSSW組、YB組 及aFGJ組pH值 分 別 為4.20、4.25、4.80,添加GSSW、YB可有效降低青貯pH值,提高青貯品質(zhì);GSSW組青貯pH的降低速度明顯高于aFGJ組。GSSW組氨氮/總氮含量明顯低于其他組;CK組氨氮含量明顯高于其他組。隨著青貯時(shí)間的延長(zhǎng),GSSW組乳酸含量呈現(xiàn)先降低后輕微升高,而乙酸含量降低的趨勢(shì),在青貯50 d時(shí),乳酸、乙酸含量分別為59.8、11.2 g/kg DM;YB組乳酸含量低于GSSW組而乙酸含量高于YB組;CK組在發(fā)酵30、50 d時(shí)乳酸含量無(wú)明顯的增加而在70 d后顯著增高(P<0.05);YB及GSSW組都未檢測(cè)到丁酸含量,aFGJ組檢測(cè)到丁酸含量明顯低于CK組(P<0.05)。

    表3 時(shí)間和添加劑對(duì)苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響Table 3 Effect of time and silage additive on the fermentation quality of alfalfa silage

    2.5 苜蓿青貯微生物群落分析

    2.5.1 Alpha多樣性 不同處理組青貯樣品中的多樣性指數(shù)分析如圖2所示,Shannon稀釋曲線(xiàn)顯示曲線(xiàn)已經(jīng)趨于平坦,其覆蓋度均達(dá)到99%以上,表明樣本測(cè)序量已經(jīng)飽和,足夠反映樣本中絕大部分細(xì)菌物種的信息。

    圖2 多樣本的香農(nóng)曲線(xiàn)Fig.2 Multi-samples Shannon curves

    2.5.2 Beta多樣性分析 不同處理組青貯樣品PCoA分析如圖3所示。3個(gè)重復(fù)的樣品點(diǎn)聚集在一起,表示3個(gè)樣品重復(fù)性好,PC1貢獻(xiàn)率為81.1%,PC2的貢獻(xiàn)率為10.7%。CK組落在第一象限,GSSW組和YB組樣品落在第二象限,和其他組樣品的距離相對(duì)較遠(yuǎn),GSSW組與YB組在物種上相似度較高。

    圖3 多樣本的PCOA分析Fig.3 PCoA analysis of multi-samples

    2.5.3 基于屬種水平細(xì)菌微生物群落結(jié)構(gòu)分析 12個(gè)樣品測(cè)序后通過(guò)Barcode識(shí)別后共獲得89 997條CCS 序列,每個(gè)樣品至少產(chǎn)生7 387條CCS序列,平均產(chǎn)生7 500條CCS序列。圖中顯示豐度水平前十的物種,并將其他物種合并為Other在圖中顯示。不同處理組青貯樣品屬水平微生物群落結(jié)構(gòu)如圖4-A所示,不同處理組青貯樣品屬種類(lèi)和分布比例有顯著差異,4組屬水平豐度較高的屬均為L(zhǎng)actobacillis及Pediococcus;而添加3種菌劑的處理組,Lactobacillis豐度高于Pediococcus,CK組相反。不同處理組種水平微生物群落結(jié)構(gòu)如圖4-B所示,圖中豐度大于5%的種中GSSW組微生物群落為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum,92.95%);YB組為植物乳桿菌(L. plantarum,85.50%)、戊糖 片 球 菌(Pediococcus pentosaceus,7.63%);aFGJ組 為 植 物 乳 桿 菌(L. plantarum,50.55%)、戊糖 片 球 菌(P. pentosaceus,29.90%)、短 乳 桿 菌(Lactobacillus brevis,8.91%);CK組為戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus,49.84%)、植物乳桿菌(L.plantarum,23.83%)、類(lèi)腸膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides,9.71%)、蒙氏腸球菌(Enterococcus mundtii,6.04%)。

    圖4 樣品屬種水平微生物群落結(jié)構(gòu)Fig.4 Microbial community structure of samples on the genus and species level

    不 同 處 理 組L. plantarum,P. pentosaceus,L.brevis及E. mundtii相對(duì)豐度差異顯著;添加3種菌劑的處理組L. plantarum 明顯高于CK組而P.pentosaceus明顯低于CK組;aFGJ組L.brevis明顯高于其他3組;在CK組中E. mundtii豐度明顯高于添加青貯菌劑的3組。

    3 討論

    3.1 苜蓿青貯菌劑的分類(lèi)

    青貯菌劑主要分為發(fā)酵促進(jìn)型添加劑、發(fā)酵抑制型添加劑、好氧性變質(zhì)抑制劑、營(yíng)養(yǎng)性添加劑及吸附劑[20]。其中以乳酸菌類(lèi)添加劑屬于發(fā)酵促進(jìn)型添加劑,通過(guò)調(diào)節(jié)微生物的種類(lèi)及數(shù)量從而促進(jìn)其快速向低溫和低損失的發(fā)酵過(guò)程轉(zhuǎn)變。本實(shí)驗(yàn)從綠汁發(fā)酵液中通過(guò)產(chǎn)酸能力強(qiáng)的3株菌株經(jīng)16S rDNA檢測(cè)及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建確定為P. pentosaceus、L. plantarum及P. parvulus,這一結(jié)果與Li等[21]等報(bào)道的綠汁發(fā)酵液中乳酸菌株包括L. plantarum、L.casei、L. brevis及Streptococcus faecalis等結(jié)果相符。綠汁發(fā)酵液通常會(huì)促生原料上附著的野生乳酸菌株,更適宜于苜蓿青貯。目前市售的青貯菌劑中除乳酸菌外還添加纖維素酶、淀粉酶等或產(chǎn)酶的芽胞桿菌菌株,Bai等報(bào)道[22]在苜蓿青貯中添加產(chǎn)生抗菌肽的B. subtilis可以改善青貯發(fā)酵品質(zhì),提高有氧穩(wěn)定性。Rychen等[23]報(bào)道了在一定劑量下添加解B.belais可以改善青貯有氧穩(wěn)定性。因此,在GSSW菌劑中,除了添加來(lái)自綠汁發(fā)酵液中高產(chǎn)酸野生乳酸菌株外還添加了實(shí)驗(yàn)室前期分離得到的產(chǎn)纖維素酶的B. belais K1及產(chǎn)淀粉酶的B. subtilis J1,調(diào)節(jié)苜蓿草營(yíng)養(yǎng)成分及微生物的代謝組成。

    3.2 苜蓿青貯營(yíng)養(yǎng)及發(fā)酵品質(zhì)

    青貯過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的微生物活動(dòng)和生物化學(xué)變化問(wèn)題,原料成分會(huì)隨著發(fā)酵不同階段微生物的生長(zhǎng)而成變化。隨著青貯時(shí)間的延長(zhǎng),植物體類(lèi)一系列的酶促反映都會(huì)造成蛋白質(zhì)的水解。70 d時(shí)GSSW組WSC含量高于其他3個(gè)組,菌劑的添加可以促進(jìn)飼草中纖維素類(lèi)物質(zhì)的分解釋放出可被乳酸菌利用的糖,增加可發(fā)酵底物的量;青貯菌劑GSSW及YB組的添加可以提高原料中粗蛋白含量,快速降酸,減少干物質(zhì)及粗蛋白的損失,這一研究結(jié)果與Li等[24]報(bào)道的內(nèi)容一致。GSSW及YB組pH明顯低于CK及aFGJ組,菌劑的添加可以快速降低青貯PH,這與Mariott等[25]的研究結(jié)果相同。有機(jī)酸的總量及構(gòu)成可以反映青貯發(fā)酵品值,優(yōu)質(zhì)青貯飼料乳酸含量>50 g/kg DM,并占總有機(jī)酸60%以上;乙酸含量10-40 g/kg DM;丁酸含量越少或不含丁酸。GSSW及YB組乳酸含量明顯高于CK組,菌劑的添加不僅可以使青貯早期產(chǎn)生較多酸,在青貯后青貯飼料中乳酸含量也高于一般青貯飼料,而丙酸乙酸含量明顯降低。優(yōu)質(zhì)的苜蓿青貯飼料氨態(tài)氮/總氮的比例應(yīng)<15%。GSSW組氨氮/總氮含量明顯低于其他組,菌劑的添加可以減少蛋白質(zhì)的分解,降低氨態(tài)氮/總氮含量,這一結(jié)論與Liu等[26]的研究結(jié)果一致。GSSW及YB菌劑的添加對(duì)于調(diào)整苜蓿營(yíng)養(yǎng)成和改善發(fā)酵品質(zhì)有著顯著地作用。

    3.3 苜蓿青貯微生物群落結(jié)構(gòu)

    在苜蓿青貯過(guò)程中微生物的組成與發(fā)酵產(chǎn)物的生產(chǎn)、青貯組分變化、青貯的品質(zhì)優(yōu)質(zhì)密切的關(guān)系。研究表明青貯發(fā)酵品質(zhì)與發(fā)酵過(guò)程的微生態(tài)演變密切相關(guān)[27]。4個(gè)處理組發(fā)酵70 d苜蓿青貯樣品中豐度較高的屬為L(zhǎng)actobacillis、Pediococcus、Weisella及Enterococcus,這與Tohno等[28]報(bào)道的青貯有關(guān)乳酸菌等相一致。GSSW組種水平乳酸菌株有植物乳桿菌(L. plantarum,92.95%)、戊糖片球菌(P.pentosaceus,2.36%)與GSSW菌劑中的菌株相符,說(shuō)明GSSW菌劑中菌株可以在苜蓿青貯中大量繁殖,適宜于苜蓿青貯并發(fā)揮重要作用。GSSW菌劑復(fù)配時(shí)添加了芽胞桿菌屬菌株,但在青貯發(fā)酵70 d后未檢出,分析原因?yàn)榘l(fā)酵70 d已進(jìn)入發(fā)酵穩(wěn)定階段,厭氧條件下不適宜芽胞桿菌屬菌株生長(zhǎng),芽胞桿菌屬菌株主要是在青貯初期好氧發(fā)酵階段進(jìn)行繁殖。

    添加菌劑處理組L. plantarum 明顯高于CK組而P. pentosaceus明顯低于CK組;L. plantarum屬于兼性異型發(fā)酵乳酸菌,相比于異型發(fā)酵乳酸菌可以更好地利用原料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),減少營(yíng)養(yǎng)成分的損失。GSSW組相比于其他組L. plantarum相對(duì)豐度越高,產(chǎn)酸速度快,乳酸含量高,pH值降低,減少蛋白質(zhì)的分解,降低氨態(tài)氮含量,這一結(jié)果與GSSW組營(yíng)養(yǎng)及發(fā)酵品質(zhì)數(shù)據(jù)相對(duì)應(yīng)。青貯70 d樣品中,添加GSSW菌劑及進(jìn)口菌劑YB組pH值分別為4.20、4.25,明顯低于CK組,乳酸含量分別為44.5 g/kg DM、52.3 g/kg DM,明顯高于CK組。Zhao等[29]報(bào)道L. plantarum是青貯中重要菌株,可以快速產(chǎn)酸,為其他乳酸菌的生長(zhǎng)提供酸性環(huán)境。GSSW組及YB組微生物群落結(jié)構(gòu)中L. plantarum均占主要優(yōu)勢(shì),而在自然青貯條件下P. pentosaceus占主要優(yōu)勢(shì),這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了L. plantarum對(duì)青貯pH,乳酸含量影響顯著。不同菌劑處理組中L. plantarum / P.pentosaceus值為GSSW組>YB組>aFGJ組,乳酸含量為GSSW組>YB組>aFGJ組,而pH及氨氮/總氮 為aFGJ組>YB組>GSSW組。L. plantarum / P.pentosaceus值與青貯乳酸含量呈正相關(guān),與pH及氨氮/總氮呈負(fù)相關(guān),比值越高,青貯品質(zhì)越佳。E.mundtii在CK組中相對(duì)豐度明顯高于添加菌劑3組,E. mundtii在發(fā)酵初期與乳酸菌競(jìng)爭(zhēng)可溶性碳水化合物,減緩青貯的酸化,因此,CK組青貯品質(zhì)低于添加菌劑3組。正是由于發(fā)酵過(guò)程中有益乳酸菌群占據(jù)優(yōu)勢(shì)主導(dǎo)地位,生成一定量的乳酸從而使pH值快速下降,才使得上述腐敗菌被有效抑制,從而更好地保存發(fā)酵原料的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),青貯中微生物的種類(lèi)及數(shù)量對(duì)于青貯品質(zhì)有著顯著地影響。

    4 結(jié)論

    添加青貯菌劑均能增加有益菌的數(shù)量,減少有害菌數(shù)量,改善苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)。苜蓿青貯中L.plantarum及 P. pentosaceus的含量及比值對(duì)青貯優(yōu)良發(fā)酵品質(zhì)和組分變化起著重要作用。GSSW菌劑處理后青貯苜蓿品質(zhì)優(yōu)于與市場(chǎng)在售菌劑YB,可運(yùn)用于苜蓿青貯。

    猜你喜歡
    菌劑苜蓿發(fā)酵液
    苜蓿的種植及田間管理技術(shù)
    苜蓿的種植技術(shù)
    復(fù)合微生物菌劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用
    外生菌根真菌菌劑的制備及保存研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:26
    新型液體菌劑研制成功
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測(cè)定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    苜蓿:天馬的食糧
    要造就一片草原……
    “播可潤(rùn)”微生物菌劑在甜瓜上的應(yīng)用效果研究
    此物有八面人人有两片| 久久国产精品人妻蜜桃| 夜夜爽天天搞| 欧美bdsm另类| 国内精品一区二区在线观看| 如何舔出高潮| а√天堂www在线а√下载| 午夜福利欧美成人| 亚洲色图av天堂| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产高清有码在线观看视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 精品午夜福利在线看| 好男人电影高清在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲av成人精品一区久久| av女优亚洲男人天堂| 嫩草影院精品99| 一级a爱片免费观看的视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美成人a在线观看| 亚洲av美国av| 男人舔奶头视频| 99国产精品一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 欧美乱妇无乱码| 亚洲性夜色夜夜综合| www日本黄色视频网| 国产精品亚洲一级av第二区| 怎么达到女性高潮| 老司机午夜十八禁免费视频| 两个人视频免费观看高清| 国产91精品成人一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 欧美+日韩+精品| 91麻豆av在线| 午夜免费激情av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 精品久久久久久,| 又紧又爽又黄一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 丝袜美腿在线中文| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| av天堂在线播放| 久久国产精品影院| 日日夜夜操网爽| 别揉我奶头 嗯啊视频| av女优亚洲男人天堂| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品久久久久久精品电影| 三级国产精品欧美在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | bbb黄色大片| 狠狠狠狠99中文字幕| 一二三四社区在线视频社区8| av在线观看视频网站免费| 免费av不卡在线播放| av专区在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 一本久久中文字幕| 99国产综合亚洲精品| 他把我摸到了高潮在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 成年版毛片免费区| 99热精品在线国产| 91麻豆av在线| 能在线免费观看的黄片| 毛片一级片免费看久久久久 | 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| а√天堂www在线а√下载| 欧美精品国产亚洲| 免费看a级黄色片| 亚洲精品在线美女| 特级一级黄色大片| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久久久性生活片| 久久久久九九精品影院| 亚洲最大成人av| 午夜a级毛片| 午夜福利在线在线| 国产视频一区二区在线看| 亚洲成av人片在线播放无| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费在线观看亚洲国产| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美黑人欧美精品刺激| 美女免费视频网站| 国产爱豆传媒在线观看| 精品福利观看| 久久久久久久久中文| 日韩欧美国产在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 99精品久久久久人妻精品| 夜夜爽天天搞| 国产精品女同一区二区软件 | 精品国产三级普通话版| 午夜免费成人在线视频| 亚洲精品在线美女| 看十八女毛片水多多多| 久久久久免费精品人妻一区二区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产人妻一区二区三区在| 欧美黑人巨大hd| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲av成人av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 嫩草影视91久久| 一区二区三区激情视频| 特级一级黄色大片| 中文字幕高清在线视频| 真实男女啪啪啪动态图| 日韩欧美在线二视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产人妻一区二区三区在| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美激情在线99| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 精品人妻视频免费看| 午夜福利高清视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 麻豆成人午夜福利视频| 丁香六月欧美| 国产黄片美女视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产黄片美女视频| 国产午夜精品论理片| 人人妻人人看人人澡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久人妻av系列| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久国产成人精品二区| 老司机午夜十八禁免费视频| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品久久视频播放| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲综合色惰| 在线观看一区二区三区| 久久国产乱子免费精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲五月天丁香| 两个人视频免费观看高清| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 极品教师在线免费播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品日韩av在线免费观看| 变态另类丝袜制服| 国产高清视频在线观看网站| 免费看光身美女| 97超视频在线观看视频| 午夜福利欧美成人| 精品久久久久久,| 国产爱豆传媒在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一区二区三区高清视频在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 九九在线视频观看精品| 成年版毛片免费区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 51国产日韩欧美| 亚洲国产色片| 精品一区二区三区视频在线| 毛片女人毛片| 青草久久国产| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 嫁个100分男人电影在线观看| 一本久久中文字幕| 久久九九热精品免费| 在现免费观看毛片| 在现免费观看毛片| 国产人妻一区二区三区在| bbb黄色大片| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲成a人片在线一区二区| 女人被狂操c到高潮| 一级av片app| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲美女搞黄在线观看 | av福利片在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 永久网站在线| 国产免费一级a男人的天堂| 悠悠久久av| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲av电影在线进入| 免费观看人在逋| 深爱激情五月婷婷| 国产高清有码在线观看视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲精品影视一区二区三区av| www.www免费av| 麻豆成人午夜福利视频| 很黄的视频免费| 女人被狂操c到高潮| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 直男gayav资源| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美潮喷喷水| 国产午夜精品论理片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 在线a可以看的网站| 999久久久精品免费观看国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 男人舔奶头视频| 美女大奶头视频| 欧美午夜高清在线| 哪里可以看免费的av片| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜影院日韩av| 在线观看66精品国产| 久久香蕉精品热| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久成人免费电影| 波多野结衣高清作品| 色综合站精品国产| 性色avwww在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 午夜激情欧美在线| 成人亚洲精品av一区二区| 久久人妻av系列| 少妇的逼水好多| 国产精品国产高清国产av| 精品国产亚洲在线| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 我的女老师完整版在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 天美传媒精品一区二区| 国产精品久久视频播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美丝袜亚洲另类 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 脱女人内裤的视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| .国产精品久久| 中文字幕av成人在线电影| 午夜福利欧美成人| 长腿黑丝高跟| а√天堂www在线а√下载| 国产亚洲精品久久久com| x7x7x7水蜜桃| 99久久成人亚洲精品观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲色图av天堂| 精品人妻偷拍中文字幕| 少妇丰满av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一区二区三区四区激情视频 | 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产淫片久久久久久久久 | 中文字幕av在线有码专区| 亚洲国产精品合色在线| 国产极品精品免费视频能看的| 久久人人精品亚洲av| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美中文日本在线观看视频| 757午夜福利合集在线观看| 草草在线视频免费看| or卡值多少钱| 俺也久久电影网| 欧美黄色淫秽网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 色5月婷婷丁香| 永久网站在线| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产成人福利小说| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 久久伊人香网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲经典国产精华液单 | 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 中文字幕久久专区| 日韩精品中文字幕看吧| 久久热精品热| 日本 av在线| 乱人视频在线观看| 久久久色成人| 日本三级黄在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 国产精品1区2区在线观看.| av天堂在线播放| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 天天躁日日操中文字幕| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品乱码一区二三区的特点| 一级黄色大片毛片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 免费观看的影片在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 脱女人内裤的视频| 小说图片视频综合网站| 国产三级在线视频| 长腿黑丝高跟| 国产成人影院久久av| 婷婷丁香在线五月| 人人妻人人看人人澡| 亚洲一区二区三区色噜噜| 热99在线观看视频| 黄色视频,在线免费观看| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲第一电影网av| 亚洲国产精品合色在线| av中文乱码字幕在线| 亚洲熟妇熟女久久| 久久99热6这里只有精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 精品午夜福利在线看| 亚洲黑人精品在线| 国产成人欧美在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产精品一区二区性色av| 一进一出好大好爽视频| 久久6这里有精品| 女人被狂操c到高潮| 午夜日韩欧美国产| 两个人的视频大全免费| 精品乱码久久久久久99久播| 69av精品久久久久久| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美最黄视频在线播放免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产主播在线观看一区二区| 日本a在线网址| 老司机午夜十八禁免费视频| 日日夜夜操网爽| 日本黄大片高清| 亚洲激情在线av| 91久久精品国产一区二区成人| 国产成人欧美在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 精品国产亚洲在线| 国产免费av片在线观看野外av| 岛国在线免费视频观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 韩国av一区二区三区四区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲18禁久久av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最近中文字幕高清免费大全6 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产午夜精品论理片| 免费看a级黄色片| 俄罗斯特黄特色一大片| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久久久大精品| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲中文日韩欧美视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美色视频一区免费| 亚洲在线观看片| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av成人av| 一级作爱视频免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品一区二区性色av| 十八禁网站免费在线| 好男人在线观看高清免费视频| 午夜精品一区二区三区免费看| av在线蜜桃| 国产三级黄色录像| 色综合欧美亚洲国产小说| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费观看人在逋| 精品日产1卡2卡| 国产黄片美女视频| 亚洲综合色惰| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲在线自拍视频| 国产一区二区三区视频了| 国产av不卡久久| 51国产日韩欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 无遮挡黄片免费观看| 欧美成人性av电影在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 成人国产综合亚洲| 一进一出好大好爽视频| 青草久久国产| 欧美潮喷喷水| 亚洲精品一区av在线观看| 日本免费a在线| 99热这里只有精品一区| 欧美区成人在线视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人午夜高清在线视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 天天躁日日操中文字幕| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 永久网站在线| 成人特级av手机在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲av五月六月丁香网| 久久久成人免费电影| 久久午夜亚洲精品久久| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 三级毛片av免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久精品国产自在天天线| 97热精品久久久久久| 日本一本二区三区精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美丝袜亚洲另类 | 在线国产一区二区在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 18美女黄网站色大片免费观看| 真实男女啪啪啪动态图| 91字幕亚洲| 亚洲七黄色美女视频| 日韩欧美国产在线观看| 国产高清激情床上av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 成人美女网站在线观看视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 日本a在线网址| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲av熟女| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 嫩草影视91久久| 亚洲国产精品成人综合色| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲黑人精品在线| 免费观看精品视频网站| 午夜福利18| 午夜福利在线观看吧| 免费一级毛片在线播放高清视频| 波多野结衣高清无吗| av视频在线观看入口| 久久久精品大字幕| 无遮挡黄片免费观看| 十八禁人妻一区二区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 成人美女网站在线观看视频| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲五月天丁香| 国产在线男女| 久久精品国产自在天天线| 99在线视频只有这里精品首页| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区 | 91麻豆av在线| 1000部很黄的大片| 欧美日韩乱码在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产三级在线视频| 十八禁人妻一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲激情在线av| 国产亚洲欧美98| 精品国产亚洲在线| 免费观看人在逋| 欧美一级a爱片免费观看看| 91av网一区二区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99国产精品一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 久久草成人影院| 悠悠久久av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 丁香欧美五月| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜福利在线观看吧| 亚洲无线观看免费| 天堂动漫精品| 色av中文字幕| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 一夜夜www| av专区在线播放| www.色视频.com| 又爽又黄无遮挡网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 男女视频在线观看网站免费| 91在线观看av| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产成人福利小说| 午夜久久久久精精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 午夜两性在线视频| 成人午夜高清在线视频| 看黄色毛片网站| 精品午夜福利在线看| 日韩欧美在线二视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 成人av在线播放网站| 九九在线视频观看精品| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久精品国产亚洲av天美| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产视频内射| 久久热精品热| 国产单亲对白刺激| 国产一区二区在线观看日韩| 成年免费大片在线观看| 美女免费视频网站| 精品日产1卡2卡| 丰满的人妻完整版| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 在线观看免费视频日本深夜| 精品一区二区三区视频在线| 91字幕亚洲| 国产亚洲欧美98| 婷婷色综合大香蕉| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 观看美女的网站| netflix在线观看网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男女那种视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜福利成人在线免费观看| 色在线成人网| xxxwww97欧美| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人aa在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 成年人黄色毛片网站| 久久香蕉精品热| 成人无遮挡网站| 国产毛片a区久久久久| x7x7x7水蜜桃| 国产高潮美女av| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲电影在线观看av| 性色avwww在线观看| 免费av不卡在线播放| 啪啪无遮挡十八禁网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 观看美女的网站| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 一个人免费在线观看的高清视频| 成人欧美大片| 麻豆国产97在线/欧美| 窝窝影院91人妻| 国产精品三级大全| 国产伦精品一区二区三区四那| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜久久久久精精品| 深夜精品福利| 午夜久久久久精精品| 欧美在线黄色| 亚洲欧美精品综合久久99| 色在线成人网| 一本一本综合久久| 欧美不卡视频在线免费观看| 日韩av在线大香蕉| 亚洲经典国产精华液单 | 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲av一区综合| 天天一区二区日本电影三级| 欧美成人性av电影在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美zozozo另类| 精品福利观看| 亚洲五月天丁香| 九九在线视频观看精品| 国产精华一区二区三区| 日本黄大片高清| 熟女人妻精品中文字幕|