不同蛋白酶水解牛肉蛋白產(chǎn)物的ACE抑制活力比較

李希宇，林偉玲，楊懷谷，葉宇游，劉忠義

（1.湘潭大學(xué)化工學(xué)院，湖南湘潭 411105）（2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510610）（3.中山市黃圃鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，廣東中山 528400）（4.博羅縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，廣東惠州 516100）

高血壓是目前全世界最常見慢性疾病之一，其主要病例表征為體循環(huán)動脈血壓增高（收縮壓≥140 mm Hg，舒張壓≥90 mm Hg），同時也是多種心腦血管疾病的主要誘因[1]。目前，高血壓的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但高血壓的發(fā)生、發(fā)展與動脈血壓調(diào)節(jié)因素息息相關(guān)[2]。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotension converting enzyme，ACE）是一種具有膜結(jié)合、含鋅離子的二肽羧肽酶，其升血壓機(jī)制是：ACE催化血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化成血管緊張素Ⅱ，引起血管收縮，同時使具有血管擴(kuò)張作用的緩激肽失活，最終導(dǎo)致血壓上升[3,4]。因此ACE抑制劑可以通過抑制ACE的活性，減少血管緊張素Ⅱ的生成，起到降低血壓的作用。常見的化學(xué)合成降壓藥卡托普利、依那普利和賴諾普利等，它們降壓效果顯著但同時具有過敏、皮炎、頭暈惡心、味覺遲鈍等副作用。在眾多的ACE抑制劑中，通過酶解制備的天然源ACE抑制肽具有安全性高、毒副作用低、可長期攝入等優(yōu)勢，必將成為未來降壓產(chǎn)品開發(fā)的研究熱點(diǎn)。目前，國內(nèi)外研究學(xué)者已從海參[5]、羅非魚[6]、玉米[7]、牛奶[8]、向日葵[9]、海藻[10]等中獲得具有良好降壓效果的ACE抑制肽。

因牛肉營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮美，其氨基酸組成比豬肉更接近人體需求，鈣、磷、鐵、鋅等常量、微量元素含量豐富，還具有低脂肪、低膽固醇等優(yōu)點(diǎn)[11,12]。本研究選擇以牛肉為酶解底物，開發(fā)食源性ACE抑制肽。并且對于部分人群，不便于直接食用牛排等難消化的牛肉制品，可以根據(jù)特定人群的營養(yǎng)需求開發(fā)多肽產(chǎn)品、氨基酸補(bǔ)充劑等新型牛肉制品[13]。牛肉蛋白經(jīng)酶解加工，大分子量、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、不利于消化的蛋白質(zhì)被降解，提高了肉的營養(yǎng)價(jià)值、食用口感、消化利用率，進(jìn)一步酶解后能夠獲得高經(jīng)濟(jì)或具備保健功能的產(chǎn)品[14]。Jang等[15]從牛肉水解物中提取的多肽序列VLAQYK，在口服給藥自發(fā)性高血壓大鼠檢測實(shí)驗(yàn)中對收縮壓有顯著降低作用。隨著人們對保健食品的興趣日益增加，將牛肉開發(fā)成兼具營養(yǎng)和保健功能的食品輔料，對牛肉高效利用和深度開發(fā)，具有重要意義和市場前景。

鑒于以牛肉為原料制備ACE抑制肽研究較少，本研究以牛肉蛋白為原料，通過復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶酶解牛肉，比較不同酶解產(chǎn)物在模擬胃腸道消化前后的ACE抑制活力變化和分子量分布，分析酶解液感官評價(jià)，為牛肉蛋白酶解工藝應(yīng)用于功能性食品的開發(fā)、利用提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

市售牛肉：廣州市天河區(qū)西亞興安超市；復(fù)合蛋白酶（Protamex）、風(fēng)味蛋白酶（Flavorenzyme）：諾維信生物技術(shù)有限公司；木瓜蛋白酶（Papain）：生工生物工程有限公司；菠蘿蛋白酶（Bromelain）、中性蛋白酶（Neutrase）、堿性蛋白酶（Alcalase）：源葉生物科技有限公司；牛皮膠原蛋白肽：廣州市華恭生物科技有限公司；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、N-[3-丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸（FAPGG）、胃蛋白酶、胰蛋白酶：美國Sigma公司；十水四硼酸鈉（硼砂）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）、鄰苯二甲醛（OPA）、二硫蘇糖醇（DL-Dithiothreitol，DTT）等分析純：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1800紫外分光光度計(jì)，島津儀器有限公司；SHA-B恒溫振蕩器，上海力辰邦西儀器科技有限公司；Kjeltec 8400全自動凱氏定氮儀，福斯（FOSS）分析儀器公司；SynergyH1多功能酶標(biāo)儀，美國Biotek公司；T25高速均質(zhì)機(jī)，德國IKA公司；EPS-300數(shù)顯式穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀，上海Tanon科技有限公司；TGL-16M臺式高速冷凍離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司；PB-10臺式PH計(jì)：德國Sartorius公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蛋白酶活力的測定

參考文獻(xiàn)[16,17]的方法稍作修改。以275 nm波長的吸光度A為縱坐標(biāo)，酪氨酸的濃度C為橫坐標(biāo)，繪制0～200 μg/mL酪氨酸溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。精確稱取標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白2 g，加入100 mL 0.1 mol/L PBS（pH根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件調(diào)整）緩沖溶液，適當(dāng)加熱，攪拌至酪蛋白全部溶解。分別稱取蛋白酶樣品0.1 g，溶解于10 mL相應(yīng)pH值緩沖溶液，以緩沖液1:100比例稀釋，得1:10000稀釋比例酶液。不同蛋白酶在不同pH、溫度條件下測定酶活力，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1。

表1 雙因素交叉設(shè)計(jì)Table 1 Two factor crossover design

酶液樣品：1.00 mL酶液與1.00 mL酪蛋白溶液混勻，精確計(jì)時10 min后，加入2.00 mL三氯乙酸溶液，混勻靜置，8000 g離心10 min后取上清液?？瞻讟悠罚?.00 mL酶液與2.00 mL三氯乙酸溶液混勻，精確計(jì)時10 min后，加入1.00 mL酪蛋白溶液，混勻靜置，8000 g離心10 min后取上清液。每個樣品做3個平行，于波長275 nm，分別測定其吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品最終稀釋液的酶活力A，單位為U/mL。樣品的酶活力按下式計(jì)算：

式中：

A——由標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的樣品最終稀釋液的酶活力，U/mL；

N——稀釋倍數(shù)，取10000；

4——反應(yīng)試劑的總體積，mL；

10——反應(yīng)時間10 min，以min計(jì)。

根據(jù)酶活選擇不同蛋白酶的最佳酶解條件，對牛肉蛋白進(jìn)行酶解。

1.3.2 酶解工藝

取10 g牛肉糜，加入40 mL去離子水，于高速均質(zhì)機(jī)中經(jīng)10000 r/min處理2 min。置于100 mL的錐形瓶中，用3 mol/L HCl或NaOH溶液調(diào)整pH值。不同酶在其最佳酶解條件下進(jìn)行酶解。按照4000 U/g牛肉加入蛋白酶，空白對照加酶量為0，置于用恒溫震蕩水浴鍋酶解，轉(zhuǎn)速120 r/min，水解時間4 h。酶解1 h時，測定酶解液pH值，并將其調(diào)整到指定值。100 ℃煮沸4 min終止酶解反應(yīng)。酶解液冷卻后經(jīng)離心機(jī)8000 r/min離心15 min，取上清液4 ℃保存以備分析。

1.3.3 水解度（DH）的測定

OPA法：參考文獻(xiàn)[18]的方法稍作修改。用去離子水將酶解液樣品稀釋100倍，取400 μL加入含有3.0 mL OPA試劑的石英比色皿中，充分混勻，避光反應(yīng)2 min，測定340 nm波長處的吸光度。計(jì)算公式如下：

式中：

h——每克牛肉蛋白被斷裂的肽鍵數(shù)，mmol/g；

htot——每克牛肉蛋白質(zhì)所含的總肽鍵數(shù)，mmol/g。

1.3.4 模擬胃腸道消化

參考文獻(xiàn)[19-21]的方法稍作修改。將0.500 g胃蛋白酶溶解于25.0 mL 0.01 mol/L HCl溶液，得到胃蛋白酶原液；將0.100 g胰蛋白酶溶解于去離子水，得到胰蛋白酶原液。胃消化：取酶解液樣品20.0 mL，用3 mol/L HCl溶液將pH值調(diào)至3.0，加入0.60 mL胃蛋白酶原液，置于37 ℃恒溫震蕩水浴鍋，轉(zhuǎn)速120 r/min，消化時間1 h，用3 mol/L NaOH溶液將pH值調(diào)至7.0終止消化；腸消化：樣品中加入0.25 mL胰蛋白酶原液，置于37 ℃恒溫震蕩水浴鍋，轉(zhuǎn)速120 r/min，消化時間1 h，煮沸2 min終止消化。消化液冷卻后經(jīng)離心機(jī)8000 r/min離心15 min，4 ℃保存，以備分析。

1.3.5 ACE抑制活性的測定

參考文獻(xiàn)[22,23]的方法稍作修改。分析前，用緩沖液（50 mM Tris-HCl，含300 mM NaCl，pH值7.5）將酶解液消化前后的樣品分別稀釋至1 mg N/mL。在96孔板中，每孔加入10 μL ACE溶液（0.25 units/mL，去離子水）和30 μL樣品，在37 ℃孵育5 min后，加入150 μL的FAPGG（0.88 mM，Tris-HCl緩沖液）溶液。空白對照為30 μL的Tris-HCl緩沖液。

在340 nm波長處，監(jiān)測ACE降解FAPGG引起的吸光度衰減和水解物的抑制性能40 min。ACE活性表示為吸光度在340 nm處下降的斜率，從第10 min到第35 min的線性間隔。在此時間區(qū)間內(nèi)，吸光度信號穩(wěn)定，無信號漂移跡象。水解物的ACE抑制率(%)計(jì)算為：

式中：

ΔA樣品——水解液樣品的斜率；

ΔA空白——對照樣品的斜率。

1.3.6 分子量分布

1.3.6.1 SDS-PAGE蛋白凝膠電泳

牛肉蛋白樣品：取10 g牛肉糜，加入60 mL 6 mol/L的尿素溶液充分溶解蛋白，于高速均質(zhì)機(jī)中經(jīng)10000 r/min處理2 min，離心機(jī)8000 r/min離心15 min，取上清液。

用去離子水將酶解液樣品和牛肉蛋白樣品的蛋白含量稀釋至10 mg/mL。分離膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%，濃縮膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%，電泳后用考馬斯亮藍(lán)R-250染色。

1.3.6.2 Tricine-SDS-PAGE超低分子量蛋白凝膠電泳

Tricine-SDS-PAGE參照黃薇等人[24]方法進(jìn)行。用去離子水將酶解液樣品蛋白含量稀釋至10 mg/mL。分離膠為20.0%，夾層膠為10.0%，分離膠為4.0%。電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍(lán)G-250染色。

1.3.7 感官評價(jià)

感官評價(jià)分析在溫度為23±2 ℃的感官評價(jià)室進(jìn)行，由8名專業(yè)感官評價(jià)員（4男4女）組成感官評定小組。感官評價(jià)樣品由6種酶解液樣品和1種牛皮膠原蛋白肽（商品）溶液組成，7種樣品隨機(jī)排序并編號，對其風(fēng)味、外觀特性進(jìn)行感官評價(jià)，對外觀、氣味、牛肉特征味、鮮味及無苦味5個指標(biāo)進(jìn)行感官評價(jià)，滿分為50分。每個樣品在口中保持10～15 s后吐出，并在品嘗下一個樣品前用清水漱口2次。最后取8人的平均分作為最終結(jié)果。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

表2 感官評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Sensory evaluation criteria

1.3.8 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS Statistics軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和Origin 2019軟件進(jìn)行制圖，并進(jìn)行多組均數(shù)相關(guān)性分析、方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析和Duncan多重比較；p<0.05為具有顯著性差異。數(shù)據(jù)結(jié)果以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）標(biāo)示。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶的酶活力

六種蛋白酶在不同pH值和溫度下酶活力如表3。

表3 雙因素方差分析結(jié)果Table 3 Results of two-way ANOVA

由表3可見，同一種蛋白酶在不同pH和溫度條件下的酶活力差異顯著。綜合考量實(shí)際因素，各酶選擇相應(yīng)的最佳酶解條件：Protamex酶解條件為溫度40 ℃，pH 8.0，酶活力為130.26 U/mg；Flavorenzyme酶解條件為溫度50 ℃，pH 7.0，酶活力為28.76 U/mg；Papain酶解條件為溫度50 ℃，pH 7.0酶活力為832.29 U/mg；Bromelain酶解條件為溫度40 ℃，pH 7.0，酶活力為65.74 U/mg；Neutrase酶解條件為溫度50 ℃，pH 7.0，酶活力為73.61 U/mg；Alcalase酶解條件為溫度60 ℃，pH 9.0，酶活力為491.42 U/mg。

2.2 不同蛋白酶酶解液在消化前后ACE抑制效果

在料液比1:4（g/mL）、酶底物比4000 U/g、酶解時間4 h，各酶在2.1篩選出的pH和溫度下酶解，并對酶解產(chǎn)物進(jìn)行1.3.4模擬胃腸道消化處理，比較Protamex、Flavorenzyme、Papain、Bromelain、Neutrase和Alcalase的牛肉蛋白酶解液（總氮濃度調(diào)整為1 mg/mL）在消化前后的ACE抑制活性，如圖1所示。

圖1 六種蛋白酶解液在消化前后ACE抑制率對比Fig.1 ACE inhibition rates comparison of six protease hydrolysates before and after digestion

在實(shí)驗(yàn)所選的六種蛋白酶中，消化處理前，Protamex、Papain、Neutrase和Alcalase的酶解產(chǎn)物有較高的ACE抑制率，分別為67.97%、53.75%、62.00%和51.19%，Bromelain酶解產(chǎn)物ACE抑制活性較低（29.24%），F(xiàn)lavorenzyme酶解產(chǎn)物ACE抑制活性最低（8.30%），不同蛋白酶解產(chǎn)物ACE抑制率差異顯著。Lee等[25]采用堿性蛋白酶水解牛肉肌原纖維蛋白，獲得ACE抑制肽Leu-Ile-Val-Gly-Ile-Ile-Arg-Cys-Val序列，體內(nèi)試驗(yàn)表明該抑制肽對大鼠自發(fā)性高血壓具有明顯的降壓效果。Zhang等[26]采用堿性蛋白酶和銅綠假單胞菌蛋白酶酶解小麥面筋，獲得兩個具有降壓功能的肽段序列：SAGGYIW和APATPSFW，并發(fā)現(xiàn)它們在C端都含有Trp。Wu等[27]采用中性蛋白酶水解蜥魚肌肉蛋白，并通過純化獲得序列為RVCLP的ACE抑制肽（IC50=175 μmol/L）。該多肽C末端的疏水性氨基酸Pro是使其具有較高ACE抑制活性的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，對ACE抑制肽活性的影響程度為疏水性>空間構(gòu)型>電子性質(zhì)，ACE抑制肽C端為疏水性結(jié)構(gòu)，其C端最后3個氨基酸中含有Trp、Tyr、Phe和Pro時，ACE抑制率大大提高[28,29]。Papain能特異性對含有Leu和Gly等堿性氨基酸的肽鍵進(jìn)行酶切，而這些氨基酸具有疏水性側(cè)鏈，能有效提高ACE抑制肽的活性[28]。因此，不同蛋白酶的特異性酶切位點(diǎn)對ACE抑制肽的活性有很大影響，Neutrase、Alcalase、Protamex（主要成分為中性蛋白酶CAS 9080-56-2和枯草菌素蛋白酶CAS 9014-01-1）和Papain的酶解產(chǎn)物都具有高ACE抑制活性，但還要考察其ACE抑制肽的抗胃腸酶消化的能力。

模擬消化處理后，酶解液樣品的ACE抑制活性都有一定程度的下降。Protamex酶解液的ACE抑制活性為37.26%（降低45.19%），F(xiàn)lavorenzyme酶解液的ACE抑制活性降低至未達(dá)檢測限，Papain酶解液的ACE抑制活性為13.77%（降低74.81%），Bromelain酶解液的ACE抑制活性為22.76%（降低22.76%），Neutrase酶解液的ACE抑制活性為30.46%（降低30.46%），Alcalase酶解液的ACE抑制活性為22.56%（降低22.56%）。宋雪梅等[30]牦牛乳硬質(zhì)干酪經(jīng)消化酶降解后，其ACE抑制率降低了13.06%。劉鑫烔等[31]將兩種皮氏蛾螺ACE抑制肽經(jīng)胃液和腸液的處理后，ACE抑制率都有所下降，且處理時間越長，ACE抑制率下降程度越高。本研究中制備的牛肉蛋白酶解液經(jīng)過模擬胃腸液消化后，ACE抑制活性都有不同程度降低，與前人研究結(jié)果一致，可能是消化過程中肽鍵斷裂，活性結(jié)構(gòu)被破壞，導(dǎo)致功能活性降低。消化后仍具有較高ACE抑制活性的是Protamex、Neutrase和Alcalase的酶解液。

2.3 不同蛋白酶酶解液的水解度

在料液比1:4（g/mL）、酶底物比4000 U/g、酶解時間4 h，各酶在2.1篩選出的pH和溫度下酶解，比較Protamex、Flavorenzyme、Papain、Bromelain、Neutrase和Alcalase的牛肉蛋白酶解液水解度（DH），如圖2所示。

圖2 六種蛋白酶對牛肉蛋白水解度的影響Fig.2 Effect of six types of protease on hydrolysis degree

由圖2可知，在相同的酶底物比條件下，Protamex、Papain、Bromelain酶解液的水解度在32%～38%之間，Alcalase酶解液水解度稍高為44.76%，F(xiàn)lavorenzyme酶解液最高，達(dá)到了69.48%，然而其酶解液的ACE抑制活性最低。Flavorenzyme作為氨基肽酶，具有外切酶作用，主要用來解離苦味肽羧端的疏水性氨基酸，產(chǎn)生大量呈味游離氨基酸，常用來增咸、脫苦。常詩潔等[32]對比中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶對雙孢蘑菇的酶解效果，發(fā)現(xiàn)Flavorenzyme水解液游離氨基酸總量及其中呈味氨基酸含量顯著高于其他處理組。本研究中，F(xiàn)lavorenzyme酶解液具有最高的水解度測定值，說明其游離氨基酸含量最高。而Flavorenzyme的酶切特性導(dǎo)致多肽C端疏水性氨基酸減少，ACE抑制活性降低。因此Flavorenzyme并不適用于酶解牛肉蛋白生產(chǎn)ACE抑制肽。

2.4 不同蛋白酶酶解液的分子量分布

在料液比1:4（g/mL）、酶底物比4000 U/g、酶解時間4 h，各酶在2.1篩選出的pH和溫度下酶解，比較Protamex、Flavorenzyme、Papain、Bromelain、Neutrase和Alcalase酶解液的SDS-PAGE分析，如圖3所示。

圖3 6種蛋白酶酶解后SDS-PAGE圖像Fig.3 SDS-PAGE analysis of hydrolysates obtained after the hydrolysis step with six different proteinases

由圖3可知，未經(jīng)酶解的牛肉蛋白個中各分子量蛋白含量豐富，其中200 ku（肌球蛋白重鏈）、50～30 ku（肌動蛋白45 ku、原肌球蛋白35 ku）和15 ku條帶豐度最高。酶解后50 ku以上條帶顯著減少，并產(chǎn)生大量游離氨基酸。Protamex酶解液泳道和Neutrase酶解液泳道還有少量30～50 ku條帶保留，大部分蛋白被酶解成16～20 ku小分子蛋白和6 ku以下的多肽。Flavorenzyme酶解液泳道有明顯200 ku、45 ku和35 ku條帶，6 ku以下多肽較其他蛋白酶酶解液少。結(jié)合圖2六種蛋白酶酶解液水解度比較可知，F(xiàn)lavorenzyme在酶解過程中主要發(fā)揮外切酶的作用，產(chǎn)生大量游離氨基酸，部分大分子蛋白結(jié)構(gòu)保留。Papain和Bromelain酶解液泳道相似，30 ku以上蛋白質(zhì)被全部酶解，生成16 ku以下多肽。Alcalase酶解液泳道蛋白分解程度最高，大分子蛋白質(zhì)基本全部被酶解成6 ku以下多肽。綜上所述，Papain、Bromelain和Alcalase對于牛肉蛋白有更好的酶解效果，這一結(jié)論與其他學(xué)者[33,34]一致。

2.5 不同蛋白酶酶解液的感官評價(jià)

在料液比1:4（g/mL）、酶底物比4000 U/g、酶解時間4 h，各酶在2.1篩選出的pH和溫度下酶解，比較Protamex、Flavorenzyme、Papain、Bromelain、Neutrase、Alcalase酶解液和膠原蛋白肽（牛皮）溶液的感官評價(jià)，如圖4所示。

圖4 不同蛋白酶對牛肉酶解液感官評價(jià)得分的影響Fig.4 Effects of different proteases on sensory evaluation scores of beef enzymatic hydrolysate

由圖4可知，與市售商品膠原蛋白肽（牛皮）的溶液相比，牛肉酶解液的外觀和氣味得分更高。在滋味方面，牛肉酶解液的鮮味和牛肉特征味得分明顯高于膠原蛋白肽溶液，這可能是牛肉蛋白酶解過程中釋放大量游離氨基酸導(dǎo)致的，因此，且基本無苦味。其中Flavorenzyme的牛肉水解液鮮味最優(yōu)，可能是酶解時產(chǎn)生大量谷氨酸等鮮味氨基酸[35]。綜合來看，六種蛋白酶的牛肉酶解液與市售商品膠原蛋白肽（牛皮）的溶液差異不大，無明顯不良風(fēng)味產(chǎn)生，可用于食品輔料的生產(chǎn)。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶6種酶制備牛肉酶解液，比較其ACE抑制活性、水解度、分子量分布和感官等方面特性。經(jīng)組間對比堿性蛋白酶解液兼具以上幾個指標(biāo)參數(shù)的優(yōu)勢，其酶解液ACE抑制率為51.19%，水解度為44.76%?；诖搜芯拷Y(jié)果，本研究將繼續(xù)通過單因素實(shí)驗(yàn)和多因素響應(yīng)面分析進(jìn)行優(yōu)化，獲得堿性蛋白酶最佳酶解參數(shù)，制備兼具營養(yǎng)與活性功能的牛肉降血壓肽，使人們更深入地開發(fā)牛肉的營養(yǎng)和功能。