前列腺素類降眼壓藥物的長期使用對(duì)兔眼球結(jié)膜厚度的影響

麻凱 殷成娟 張振永

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院眼科 200062

青光眼是臨床常見的不可逆性致盲眼病，降眼壓仍是其主要的治療方法，可以減少或避免因眼壓升高導(dǎo)致的視神經(jīng)損傷[1-2]。青光眼主要的治療方法包括應(yīng)用降眼壓藥物、激光治療和手術(shù)治療等，其中降眼壓藥物在青光眼控制眼壓的治療中扮演重要角色。目前常用的降眼壓藥物包括擬膽堿藥、β腎上腺素能受體阻滯劑、腎上腺素能受體激動(dòng)劑、碳酸酐酶抑制劑和前列腺素衍生物等，其中前列腺素類藥物(prostaglandin analogues，PGA)是目前青光眼降眼壓藥物中的一線用藥[3-4]。PGA可通過上調(diào)房水、睫狀肌等處基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的表達(dá)，增加細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的降解，使睫狀肌肌間隙增寬，促進(jìn)房水經(jīng)葡萄膜-鞏膜通道的流出，從而達(dá)到降低眼壓的目的[5-6]。研究表明，PGA會(huì)改變MMPs及MMPs抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)在眼表組織中的表達(dá)水平，使MMP-1、MMP-7、MMP-9等的表達(dá)水平升高，而TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)水平顯著降低[7]。研究發(fā)現(xiàn)，兔眼在點(diǎn)用PGA后2個(gè)月，角膜厚度顯著變??；臨床研究也發(fā)現(xiàn)，長期使用前列腺素類降眼壓藥物會(huì)使患者的角膜厚度明顯變薄，其機(jī)制可能是基于PGA上調(diào)MMPs的表達(dá)水平，進(jìn)而引起角膜基質(zhì)層膠原蛋白含量減少，導(dǎo)致角膜厚度變薄[8-10]。結(jié)膜組織同樣是一層主要由Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型等膠原蛋白構(gòu)成的眼表膜性組織，富含MMPs，但PGA對(duì)結(jié)膜厚度的影響尚不清楚。本研究擬探討兔眼局部點(diǎn)用拉坦前列腺素滴眼液后結(jié)膜厚度的變化及其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選取24只12～14周齡清潔級(jí)健康無眼疾新西蘭大白兔，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，雌雄各半，由上海市松江區(qū)松聯(lián)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物廠提供。使用全價(jià)顆粒飼料單籠常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食，室溫26 ℃，濕度為40%～80%。采用隨機(jī)數(shù)表法將實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為拉坦前列腺素組、鹽酸卡替洛爾組和空白對(duì)照組，每組8只，均取左眼作為實(shí)驗(yàn)眼。本研究方案經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(批文號(hào)：2017-0014)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)和使用遵循美國視覺與眼科學(xué)研究協(xié)會(huì)制定的科研動(dòng)物使用規(guī)范。

1.1.2主要試劑及儀器 拉坦前列腺素滴眼液(50 mg/ml，比利時(shí)輝瑞制藥有限公司)；質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%鹽酸卡替洛爾滴眼液(中國大冢制藥有限公司)；Trizol、RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)；SDS-PAGE凝膠配置試劑盒、RIPA蛋白裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)二抗(A0208)(上海碧云天生物科技有限公司)；Anti-MMP-1兔多克隆抗體(ab137332)、Anti-MMP-3兔多克隆抗體(ab52915)(英國Abcam公司)。CIRRUS HD-光相干斷層掃描(optical coherence tomography，OCT)儀(德國蔡司公司)；轉(zhuǎn)膜儀、垂直電泳槽、酶標(biāo)檢測儀、凝膠成像儀(美國Bio-Rad公司)；低溫高速離心機(jī)、梯度PCR儀(德國Eppendorf公司)；熒光顯微鏡(德國Leica公司)；高精確電子分析天平(德國Sartorious公司)。

1.2 方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理 拉坦前列腺素組和鹽酸卡替洛爾組分別采用拉坦前列腺素滴眼液和鹽酸卡替洛爾滴眼液點(diǎn)實(shí)驗(yàn)兔左眼，每天10:00～10:30點(diǎn)眼1次，每次1滴，持續(xù)2個(gè)月，空白對(duì)照組不做任何處理。

1.2.2球結(jié)膜厚度測量 分別于點(diǎn)眼前及點(diǎn)眼后2個(gè)月，操作者將實(shí)驗(yàn)兔固定在OCT鏡頭前，助手翻起兔顳側(cè)上下眼瞼以充分暴露球結(jié)膜(左眼1：30～4：30)，另一操作者使用OCT儀測量距角膜緣約0.5 cm處球結(jié)膜厚度，每只眼球結(jié)膜在相同位置重復(fù)測量3次，取平均值，以減少測量誤差，盡量減少運(yùn)動(dòng)偽影測量的干擾。若因?qū)嶒?yàn)兔眼球移動(dòng)而出現(xiàn)測量誤差，則重復(fù)測量直至獲得滿意結(jié)果。測量均由同一位有經(jīng)驗(yàn)的測量人員進(jìn)行，且球結(jié)膜厚度測量均在同一操作室(相同光照、濕度及溫度)內(nèi)進(jìn)行，比較點(diǎn)眼前后球結(jié)膜厚度變化。

1.2.3實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織標(biāo)本的制備 點(diǎn)眼后2個(gè)月，觀察實(shí)驗(yàn)兔眼表有無充血、炎癥、紅腫、糜爛等變化，若有則予以剔除，以免干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。采用耳緣靜脈注射過量2%戊巴比妥鈉法處死實(shí)驗(yàn)兔，各組分別取兔左眼球結(jié)膜組織，在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%氯化鈉溶液中沖洗后立即放入-80 ℃冰箱中保存。使用時(shí)將其取出，用眼科剪剪成1 cm×1 cm的組織塊并在天平上稱質(zhì)量，用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測。

1.2.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3 mRNA表達(dá)水平 每組取20～30 mg球結(jié)膜組織加入EP管中，每個(gè)EP管中各加入1 ml Trizol和3顆鋼珠，將EP管放在高速研磨機(jī)中研磨5 min，頻率為65 Hz，靜置，抽取上清液，離心半徑6 cm，12 000 r/min離心15 min，管底的絮狀沉淀即為球結(jié)膜組織中總RNA量。根據(jù)RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將球結(jié)膜組織中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計(jì)引物序列(表1)，將cDNA按反應(yīng)體系配制所需要的PCR緩沖液(冰上進(jìn)行)，每個(gè)樣品采用2個(gè)復(fù)孔的反應(yīng)體系進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性1 min；95 ℃變性5 s，60 ℃退火及延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。在每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)讀取熒光強(qiáng)度。反應(yīng)結(jié)束后，計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析熒光信號(hào)并將其轉(zhuǎn)換為Ct值，以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算每個(gè)目的基因的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列及產(chǎn)物長度Table 1 Primers for real-time fluorescence quantitative PCRand the length of product目的基因引物序列(5’-3’)擴(kuò)增片段長度(bp)MMP-1正向:GACCAGGTATGAT-GAATATA120反向:AATTTTTCCTGCAGTT-GAACMMP-3正向:CTGAAGCGCTGATGTAC-CCA115反向:AGGGACAGGTTCCATAG-GAβ-actin正向:ATCATGAAGTGCGACGT-GGA113反向:GCGGTGATCTCCTTCTG-CAT 注:MMP:基質(zhì)金屬蛋白酶;β-actin:β肌動(dòng)蛋白 Note:MMP:matrix metalloproteinase

1.2.5Western blot法檢測各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3蛋白表達(dá)水平 每組取20～30 mg球結(jié)膜組織，按照每10 mg組織大約需要加入100 μl蛋白裂解液的比例配制所需的蛋白裂解液(RIPA裂解液∶ PMSF∶ cocktail=100∶ 1∶ 1)。向EP管中加入滅菌后的鋼珠，放在高速研磨機(jī)中研磨組織5 min，頻率為65 Hz。靜置，抽取上清液，按照BCA蛋白濃度測定試劑盒說明書步驟測定蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE蛋白凝膠電泳，電泳結(jié)束后，在恒流300 mA下轉(zhuǎn)膜2 h，將PVDF膜放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% BSA溶液中，于搖床上室溫封閉約2 h。棄去BSA溶液，加入5% BSA溶液稀釋的Anti-MMP-1兔多克隆抗體(1∶ 1 000)和Anti-MMP-3兔多克隆抗體(1∶ 1 000)，4 ℃孵育過夜，次日，棄去一抗，加入5% BSA稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)(1∶ 1 000)室溫孵育1 h。將洗滌后的PVDF膜在凝膠成像儀中顯影，采用ImageJ軟件進(jìn)行灰度值掃描，以β-actin作為內(nèi)參照，目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白表達(dá)灰度值/內(nèi)參表達(dá)灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)經(jīng)Shapiro-Wilk檢驗(yàn)證實(shí)符合正態(tài)分布，以mean±SD表示。點(diǎn)眼前后拉坦前列腺素組與鹽酸卡替洛爾組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度比較采用重復(fù)測量兩因素方差分析，點(diǎn)眼后2個(gè)月3個(gè)組間MMP-1和MMP-3 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量總體比較均采用單因素方差分析，兩兩比較均采用Dunnett-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 點(diǎn)眼前后拉坦前列腺素組與鹽酸卡替洛爾組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度比較

OCT檢測結(jié)果顯示，與點(diǎn)眼前比較，拉坦前列腺素組點(diǎn)眼后2個(gè)月實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜全層厚度變薄(圖1)。點(diǎn)眼前后拉坦前列腺素組與鹽酸卡替洛爾組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度總體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F組別=216.72，P<0.01；F時(shí)間=118.49，P<0.01)，其中點(diǎn)眼后2個(gè)月拉坦前列腺素組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度較點(diǎn)眼前和鹽酸卡替洛爾組點(diǎn)眼后2個(gè)月均明顯變薄，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)(表2)。

圖1 OCT測量拉坦前列腺素組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜全層厚度 點(diǎn)眼后2個(gè)月兔眼球結(jié)膜全層厚度較點(diǎn)眼前明顯變薄 A：點(diǎn)眼前 B：點(diǎn)眼后2個(gè)月Figure 1 Conjunctival thickness of latanoprost group measured by optical coherence tomography before and after administration The conjunctival thickness was thinner at 2 months after administration A:Before administration B:Two months after administration

表2 拉坦前列腺素組與鹽酸卡替洛爾組點(diǎn)眼前后實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度比較(mean±SD,μm)Table 2 Comparison of the conjunctival thickness betweenthe carteolol and latanoprost group at different time points(mean±SD,μm)組別眼數(shù)不同時(shí)間點(diǎn)兔眼眼球結(jié)膜厚度點(diǎn)眼前點(diǎn)眼后2個(gè)月鹽酸卡替洛爾組8184.94±11.85183.31±8.71拉坦前列腺素組8178.88±5.23124.19±11.29ab 注:F組別=216.72,P<0.01;F時(shí)間=118.49,P<0.01.與同時(shí)間點(diǎn)鹽酸卡替洛爾組比較,aP<0.01;與各組內(nèi)點(diǎn)眼前比較,bP<0.01(重復(fù)測量兩因素方差分析,Dunnett-t檢驗(yàn)) Note:Fgroup=216.72,P<0.01;Ftime=118.49,P<0.01.Compared with the carteolol group at the same time point,aP<0.01;compared with the respective values before administration within each group,bP<0.01 (Repeated measurement two-way ANOVA,Dunnett-t test)

2.2 各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，點(diǎn)眼后2個(gè)月3個(gè)組MMP-1和MMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量總體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=38.131、324.037，均P<0.01)，其中拉坦前列腺素組MMP-1和MMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量均較空白對(duì)照組和鹽酸卡替洛爾組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)(表3)。

表3 各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較(mean±SD)Table 3 Comparison of MMP-1 mRNA and MMP-3 mRNArelative expression levels in conjunctival tissue amongthe three groups (mean±SD)組別樣本量MMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量MMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量空白對(duì)照組81.000±0.0081.020±0.408鹽酸卡替洛爾組81.130±0.1671.070±0.489拉坦前列腺素組85.550±1.615ab3.380±0.284abF值38.131324.037P值<0.01<0.01 注:與空白對(duì)照組比較,aP<0.01;與鹽酸卡替洛爾組比較,bP<0.01(單因素方差分析,Dunnett-t檢驗(yàn)) MMP:基質(zhì)金屬蛋白酶 Note:Compared with the blank control group,aP<0.01;compared with the carteolol group,bP<0.01 (One-way ANOVA,Dunnett-t test) MMP:matrix metalloproteinase

2.3 各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

Western blot檢測結(jié)果顯示，點(diǎn)眼后2個(gè)月拉坦前列腺素組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3蛋白表達(dá)條帶灰度均強(qiáng)于空白對(duì)照組和鹽酸卡替洛爾組(圖2)。3個(gè)組MMP-1和MMP-3蛋白相對(duì)表達(dá)量總體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=26.980、20.586，均P<0.01)，其中拉坦前列腺素組MMP-1和MMP-3蛋白相對(duì)表達(dá)量均較空白對(duì)照組和鹽酸卡替洛爾組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)(表4)。

圖2 Western bolt法檢測各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3蛋白表達(dá)電泳圖 拉坦前列腺素組MMP-1和MMP-3蛋白表達(dá)條帶均強(qiáng)于空白對(duì)照組和鹽酸卡替洛爾組 A：MMP-1 B：MMP-3 1：拉坦前列腺素組；2：鹽酸卡替洛爾組；3：空白對(duì)照組 β-actin：β肌動(dòng)蛋白；MMP：基質(zhì)金屬蛋白酶Figure 2 Electrophoretogram of the expression of MMP-1 and MMP-3 in conjunctival tissue of the three groups detected by Western blot The protein expression bands of MMP-1 and MMP-3 in the latanoprost group were stronger than those in the blank control group and carteolol group 1:latanoprost group；2:carteolol group；3:blank control group MMP:matrix metalloproteinase

表4 各組實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3蛋白相對(duì)表達(dá)量比較(mean±SD)Table 4 Comparison of relative expression levels of MMP-1 and MMP-3 protein in conjunctival tissue among the threegroups (mean±SD)組別樣本量MMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量MMP-3蛋白相對(duì)表達(dá)量空白對(duì)照組80.860±0.0300.930±0.023鹽酸卡替洛爾組80.880±0.2720.970±0.010拉坦前列腺素組81.040±0.074ab1.000±0.023abF值26.98020.586P值<0.01<0.01 注:與空白對(duì)照組比較,aP<0.01;與鹽酸卡替洛爾組比較,bP<0.01(單因素方差分析,Dunnett-t檢驗(yàn)) MMP:基質(zhì)金屬蛋白酶 Note:Compared with the blank control group,aP<0.01;compared with the carteolol group,bP<0.01 (One-way ANOVA,Dunnett-t test) MMP:matrix metalloproteinase

3 討論

PGA及其衍生物已成為治療青光眼，尤其是原發(fā)性開角型青光眼的一線用藥。PGA具有降眼壓作用快、持續(xù)時(shí)間長的優(yōu)點(diǎn)，患者依從性較好，且藥物對(duì)眼表的不良反應(yīng)較小[11]。研究表明，長期點(diǎn)用PGA滴眼液可使中央角膜厚度明顯變薄[8-10,12]。鹽酸卡替洛爾滴眼液是臨床上常用的降眼壓藥物之一，其與拉坦前列腺素使用的防腐劑均是苯扎氯銨，使用鹽酸卡替洛爾滴眼液作為陽性對(duì)照可排除苯扎氯銨對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生的影響。通過在結(jié)膜下植入鋁箔的方法可以在眼前節(jié)OCT圖像上區(qū)分結(jié)膜固有層與下方的Tenon囊膜，從而準(zhǔn)確測量結(jié)膜全層厚度[13-14]，本研究用同樣的方法測量兔球結(jié)膜厚度。本研究選擇球結(jié)膜1:30～4:30為全層厚度測量的部位原因如下：(1)受到上直肌和下直肌的干擾，球結(jié)膜厚度測量范圍較?。?2)兔下眼瞼因眼位使球結(jié)膜不易暴露；(3)鼻側(cè)有第三眼瞼的干擾。本研究結(jié)果顯示，拉坦前列腺素滴眼液長期使用可使兔眼球結(jié)膜厚度明顯變薄，但鹽酸卡替洛爾滴眼液的長期使用對(duì)兔眼球結(jié)膜厚度無明顯影響，與本課題組前期臨床研究結(jié)果一致[15]。

MMPs是一類依賴于鋅離子的內(nèi)肽酶超家族，是一組廣泛存在于眼表膜性組織的蛋白水解酶。MMPs可降解ECM的幾乎所有成分，包括基質(zhì)中以及聯(lián)系于細(xì)胞質(zhì)膜上的各種膠原酶和彈性蛋白酶，是以ECM成分為水解底物的蛋白酶家系，廣泛參與各種病理生理過程。MMPs根據(jù)底物的特異性可分為以下6種：(1)間質(zhì)膠原酶(MMP-1、-8、-13)；(2)明膠酶(MMP-2、-9)；(3)間質(zhì)溶解素(MMP-3、-10、-11)；(4)膜型(MMP-14、-15、-16等)；(5)基質(zhì)溶解素(MMP-7、-26等)；(6)金屬彈性蛋白酶(MMP-12)。TIMPs是一類具有抑制MMPs活性的一組多功能因子家族，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4通過對(duì)MMPs的抑制作用從而影響細(xì)胞的增生、生長和分化。MMPs通常以酶原的形式被合成和分泌，其活化可被TIMPs抑制，從而失去水解ECM的能力。MMPs與TIMPs的合成、分泌和活化之間的動(dòng)態(tài)平衡決定了ECM合成和溶解。研究發(fā)現(xiàn)長期點(diǎn)用PGA滴眼液使角膜厚度變薄的機(jī)制可能是基于PGA使角膜組織中MMP-1、MMP-3等的表達(dá)水平升高以及TIMP-1等的表達(dá)水平降低，使角膜組織中Ⅰ型、Ⅱ型膠原蛋白等的表達(dá)水平明顯降低，從而使角膜厚度變薄[16]?；谏鲜鲅芯?，本實(shí)驗(yàn)分析長期點(diǎn)用拉坦前列腺素滴眼液是否同樣會(huì)引起兔眼球結(jié)膜組織中MMPs表達(dá)水平的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)拉坦前列腺素組兔眼球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3 mRNA及蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組和鹽酸卡替洛爾組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究表明，絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)超家族與MMPs的表達(dá)密切相關(guān)，其中在MAPK家族中與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的信號(hào)通路分別是細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases，ERK)通路、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)通路和p38 MAPK[17]，這3種信號(hào)通路可以通過介導(dǎo)和調(diào)控炎性因子發(fā)揮不同的作用。此外，MAPK信號(hào)通路還可以進(jìn)一步激活各種靶細(xì)胞的核因子-κB、AP-1等轉(zhuǎn)錄因子的合成，進(jìn)而調(diào)控MMPs的數(shù)量和活性[18]。研究還發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白可以通過增加炎性因子的表達(dá)水平進(jìn)而激活ERK、JNK信號(hào)通路，調(diào)控MMP-1和MMP-3的過表達(dá)[19]，引起MMPs在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平表達(dá)失衡，降解酶合成增加，酶活性增強(qiáng)，導(dǎo)致ECM降解。PGA作用于眼表后是否通過上述途徑使球結(jié)膜組織中MMP-1、MMP-3的表達(dá)水平升高，從而引起膠原纖維溶解，使球結(jié)膜變薄，仍需要進(jìn)一步研究，以期明確PGA長期作用于兔眼表后使結(jié)膜厚度變薄的機(jī)制。

對(duì)于藥物難以有效控制眼壓的青光眼患者仍需要進(jìn)行手術(shù)治療，濾過手術(shù)仍是目前臨床上常用的治療青光眼的手術(shù)方式，但瘢痕形成和ECM成纖維細(xì)胞增生阻塞濾過道是青光眼濾過手術(shù)失敗的主要原因，抑制濾過手術(shù)后球結(jié)膜瘢痕的形成和刺激ECM的降解以維持濾過泡的形態(tài)及濾過道的通暢對(duì)于青光眼濾過手術(shù)后房水的重吸收具有重要意義[20]。MMPs可廣泛降解多種膠原纖維和彈力纖維，對(duì)濾過手術(shù)后結(jié)膜瘢痕形成和ECM堆積起到一定的抑制作用[21]。對(duì)于青光眼患者，濾過手術(shù)后適量點(diǎn)用PGA是否有利于維持濾過泡的形態(tài)及濾過道的通暢，從而利于濾過手術(shù)后房水的引流，值得進(jìn)一步研究。結(jié)膜淋巴管廣泛分布于球結(jié)膜組織中，對(duì)青光眼濾過手術(shù)后房水的重吸收起決定性作用[22-23]。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，變薄的球結(jié)膜組織對(duì)濾過手術(shù)將會(huì)產(chǎn)生何種影響，球結(jié)膜變薄后結(jié)膜淋巴管的密度是否降低并因此抵消結(jié)膜變薄、理論上增加濾過效應(yīng)，以及PGA對(duì)結(jié)膜淋巴管的影響還需要進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示，前列腺素類降眼壓藥物的長期使用可使實(shí)驗(yàn)兔球結(jié)膜厚度變薄，其變薄的機(jī)制可能與球結(jié)膜組織中MMP-1和MMP-3的表達(dá)水平升高有關(guān)，這將為青光眼的臨床治療和基礎(chǔ)研究提供一定的參考。但本研究并未對(duì)球結(jié)膜組織中其他相關(guān)MMPs進(jìn)行統(tǒng)一檢測，不排除前列腺素類滴眼液作用于結(jié)膜后對(duì)其他MMPs表達(dá)水平產(chǎn)生影響，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突