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    不同光質(zhì)對(duì)滇龍膽藥材干燥品質(zhì)的影響

    2021-10-08 01:03:06劉秀嶶吳昕怡屈云慧李智敏
    關(guān)鍵詞:獐牙菜陰干萜類

    劉秀嶶,吳昕怡,屈云慧,李智敏,楊 雁,3,田 浩

    (1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,云南 昆明 650221; 2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 藥用植物研究所,云南 昆明 650205;3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 資源與環(huán)境學(xué)院,云南 昆明 650201)

    滇龍膽(GentianarigescensFranch.)為多年生草本植物,以根和根莖入藥(藥用部位)[1],其野生資源主要分布于云南滇西北、滇中、滇西、滇西南、滇東南地區(qū)[2],目前臨滄的滇龍膽種植面積最大,僅云縣就有 80 km2[3].是云南道地藥材[4].滇龍膽是我國傳統(tǒng)中藥復(fù)方龍膽瀉肝丸、龍膽瀉肝片等180多種中藥的主要原料[5].其有效成分為裂環(huán)烯醚萜類化合物龍膽苦苷和獐牙菜苦苷、環(huán)烯醚萜類化合物馬錢苷酸.其中龍膽苦苷為2015版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的中藥材龍膽含量測(cè)定的指標(biāo)性化合物[1],具有保護(hù)肝臟、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛及抗腫瘤等功效[6].目前針對(duì)光質(zhì)對(duì)單萜類化合物含量的研究多以揮發(fā)性化合物為主,尚未見光質(zhì)對(duì)植物體內(nèi)單萜類裂環(huán)烯醚萜類化合物的影響研究.為填補(bǔ)此類研究空白,本文利用不同光質(zhì)對(duì)滇龍膽整株、藥用部位進(jìn)行光照干燥,并測(cè)定其干燥后滇龍膽的水分含量及裂環(huán)烯醚萜類化合物龍膽苦苷和獐牙菜苦苷、環(huán)烯醚萜類化合物馬錢苷酸的含量,最終確定經(jīng)綠光處理的滇龍膽干品品質(zhì)最佳,該研究既首次提出光質(zhì)對(duì)植物體內(nèi)裂環(huán)烯醚萜類化合物及環(huán)烯醚萜類化合物的影響,又為提高滇龍膽藥材品質(zhì)提供了一定的理論依據(jù).

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 儀器試劑與植物材料

    Waters1525型液相色譜儀(美國Waters公司);AUY220型分析天平(日本島津有限公司);KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);奧豪斯MB23型水分測(cè)定儀(奧豪斯儀器(上海)有限公司);對(duì)照品:馬錢苷酸(批號(hào)P01A9L67139,純度: ≥ 98%)、獐牙菜苦苷(批號(hào)S02D7D26161,純度: ≥ 98%)、龍膽苦苷(批號(hào)R20O8F46237,純度: ≥ 98%)(上海源葉生物科技有限公司);溶液制備、液相所用甲醇、甲酸為分析純(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司);液相用甲醇為色譜純(美國Sigma公司).

    實(shí)驗(yàn)材料采自云南省臨滄市,經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所張金渝研究員鑒定為滇龍膽G.rigescens,憑證標(biāo)本存放于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所.

    1.2 不同光照方法干燥滇龍膽

    首先選取2018年11月采集自臨滄市云縣的新鮮滇龍膽,流水沖洗 3 min 后,沿根莖處剪除地上部分,以硬質(zhì)光源(曬干)和無光源(陰干)干燥滇龍膽藥用部位.

    2019年11月采集臨滄市云縣新鮮龍膽后,按上述方法進(jìn)行處理,以陰干作為對(duì)照,用不同顏色光源對(duì)滇龍膽進(jìn)行干燥.

    具體干燥方法詳見表1,每種干燥方法設(shè)置平行處理3組,每組20株,約100克.

    表1 不同光源干燥滇龍膽

    1.3 水分含量測(cè)定

    每處理、每重復(fù)各稱取 3.0 g 滇龍膽樣品粉末,分別置于水分測(cè)定儀中進(jìn)行水分含量測(cè)定,水分測(cè)定儀溫度 105 ℃,加熱時(shí)間為自動(dòng)模式(在 60 s 內(nèi)樣品失重少于 1 mg 時(shí)自動(dòng)停止).

    1.4 滇龍膽內(nèi)有效成分含量測(cè)定

    1.4.1 色譜條件

    Phenpmenex C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相以甲醇為流動(dòng)相A,0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相B.梯度洗脫程序?yàn)椋?~1.5 min 流動(dòng)相A 7%,1.5~15 min 流動(dòng)相A 10%~26%, 15~24 min, 26%~54%.流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):243 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL.

    1.4.2 對(duì)照品混合溶液的制備

    精密稱取對(duì)照品馬錢苷酸 4.8 mg、獐牙菜苦苷 5.2 mg 和龍膽苦苷 10.4 mg,分別用 10 mL 甲醇混勻、定容后獲得定容,混勻?qū)φ掌坊旌夏敢海? ℃ 避光保存,備用.

    1.4.3 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

    將對(duì)照品混合溶液分別以1、5、10、15、20、30 μL 進(jìn)液相進(jìn)行色譜測(cè)定和分析.以對(duì)照品的峰面積為縱坐標(biāo),質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

    1.4.4 供試品溶液的制備

    滇龍膽樣品粉碎后過 0.250 mm 篩,稱取 200.0 mg 樣品粉末,加入甲醇,定容至 5 mL,超聲提取 1 h,冷卻至室溫,用甲醇再次定容后過濾,濾液再過 0.22 μm 微孔濾膜,即得供試品溶液,4 ℃ 避光保存,備用.

    2 結(jié)果與討論

    2.1 不同光質(zhì)處理對(duì)含水率的影響

    滇龍膽加工過程中,含水率是《中國藥典》中評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo).如表2所示,去掉地上部分的滇龍膽在干燥后水分含量明顯低于整株干.不同顏色光質(zhì)干燥對(duì)整株滇龍膽的含水率無明顯影響,但對(duì)去掉地上部分的滇龍膽含水率有顯著影響,其中紅光干燥效果最為明顯,滇龍膽含水率為(3.37 ± 0.25)%,與陰干相比降低了28.87 %.

    表2 不同光質(zhì)對(duì)滇龍膽藥材含水量的影響 %

    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    由回歸分析得到龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦的線性回歸方程(見表3).3種化合物的峰面積與質(zhì)量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R2≥ 0.999 9),其線性范圍分別為0.48~14.40 μg(馬錢苷酸)、0.52~ 15.60 μg(獐牙菜苦苷)、1.04~31.20 μg(龍膽苦苷).

    表3 3種裂環(huán)烯醚萜類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸分析(n=5)

    2.3 不同干燥方式對(duì)整株及藥用部位中主要3種化合物含量的影響

    不同光質(zhì)處理的滇龍膽中龍膽苦苷含量差異顯著,避光陰干處理的滇龍膽中龍膽苦苷的含量高于曬干樣品中的含量,分別為(6.33±0.32)%, (5.36±0.14)%.在此基礎(chǔ)上,以陰干為對(duì)照,利用不同顏色LED燈光源對(duì)滇龍膽整株或藥用部位進(jìn)行光照,結(jié)果如圖1所示.在綠光條件下干燥的滇龍膽中龍膽苦苷(genitopicroside)含量要遠(yuǎn)高于其它顏色光照處理的樣品,不同光質(zhì)對(duì)馬錢苷酸(Loganic acid)和獐牙菜苦苷(Swetiamarin)含量的影響也較大.

    圖1 不同光質(zhì)對(duì)滇龍膽中有效成分含量的影響

    以整株滇龍膽為材料,綠光干燥,龍膽苦苷含量可達(dá)6.93%,與對(duì)照相比提高7.8%;紅光干燥,馬錢苷酸和獐牙菜苦苷含量分別為0.42%和0.22%,高于對(duì)照4.3%和7.8%;

    以藥用部位為材料,綠光干燥后,龍膽苦苷含量可達(dá)7.38%,與對(duì)照相比可提高13%;獐牙菜苦苷含量最高為0.22%,與對(duì)照相比提高8%;黃光干燥后,馬錢苷酸含量最高,為0.47%,與陰干對(duì)照相比,提高14.9%.

    綜上所述,單獨(dú)用綠光處理滇龍膽根及根莖部可獲得龍膽苦苷含量更高的藥材,其可有效提高干燥后藥用部位中裂環(huán)烯醚萜類化合物的含量,但馬錢苷酸在綠光處理下與陰干對(duì)照相比,僅提高8.1%.

    3 結(jié)語

    不同光質(zhì)對(duì)單萜類化合物有很大影響,但目前針對(duì)光質(zhì)對(duì)裂環(huán)烯類化合物的研究較少.本研究在比較曬干與陰干的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)藥典規(guī)定的有效成分龍膽苦苷,其陰干后的含量要遠(yuǎn)高于曬干后含量.以陰干作為對(duì)照,設(shè)置不同顏色LED燈光作為光源處理,發(fā)現(xiàn)經(jīng)綠光干燥后的滇龍膽中龍膽苦苷含量顯著高于其它顏色光干燥,但同時(shí)不同顏色LED光源對(duì)另外2種化合物的影響較大,與對(duì)照相比,整株干燥情況下紅光所獲馬錢苷酸和獐牙菜苦苷含量較高,而單獨(dú)干燥藥用部位(根及根莖)處理下,黃光可提高馬錢苷酸含量,綠光可提高獐牙菜苦苷含量.因此,本研究可為后期調(diào)整滇龍膽干燥工藝,進(jìn)一步研究龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷的轉(zhuǎn)化途徑打下一定的理論基礎(chǔ).

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