全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液質(zhì)量的影響研究

盧少芬 杜明儀 譚曉穎 龍海燕 陳雪英 張琦 陳馥如 盤琳

[摘要]目的探討全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液質(zhì)量的影響。方法選取2020年4月至2021年3月廣東省肇慶市中心血站使用上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200采集的200袋全血，按照其血袋說明書要求進行當(dāng)天過濾操作，并對其過濾時間實施監(jiān)控，分別按濾除時間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，收集400份濾前及濾后血液樣本作為研究對象，通過比較過濾前后的全血容量、白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量及儲存期末溶血率等指標(biāo)差異，分析全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液質(zhì)量的影響。結(jié)果①隨著全血過濾白細(xì)胞時間的增加，過濾后血液容量無顯著變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），但血液當(dāng)中白細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05）;②隨著全血過濾白細(xì)胞時間的增加，過濾后血液當(dāng)中的血紅蛋白含量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），但儲存期末溶血率逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05），過濾時間20 min 有出現(xiàn)儲存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測不達標(biāo)的情況。結(jié)論全血過濾時間長短對血液質(zhì)量有明顯的影響，為了保證去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，

200 ml 全血過濾白細(xì)胞時間最佳在10min，最長不宜超過20 min。[關(guān)鍵詞]全血過濾;白細(xì)胞;容量;白細(xì)胞計數(shù);血紅蛋白;溶血率

[中圖分類號] R457? [文獻標(biāo)識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2021）23-0186-04

Study on the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality

LU? Shaofen??? DU? Mingyi??? TAN? Xiaoying??? LONG? Haiyan??? CHEN? Xueying??? ZHANG? QiCHEN? Furu??? PAN? Lin

Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province， Guangdong， Zhaoqing 526040， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality. Methods A total of 200 bags of whole blood collected at the Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province from April 2020 to March 2021， using the disposable leukocyte depletion filter blood bag T-200 produced by Shanghai Blood Transfusion Technology Co.， Ltd.， were filtered in the same day according to the instructions of the blood bag， and the filtration time was monitored. These collected bags were divided into 4 groups according to the filtration time of 5 min， 10 min， 15 min and 20 min. Collectively， 400 pre-filtration and post-filtration blood samples were collected as the objects. The differences of whole blood volume， leukocyte count， hemoglobin content and hemolysis rate at the end of storage were compared before and after filtration， and the effect of the filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality was analyzed. Results ① With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the blood volume did not change significantly after filtration， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the leukocyte count in blood decreased significantly， with statistically significant difference （P <0.05）.② With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the hemoglobin content in the whole blood had no significant change， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the hemolysis rate at the end of the storage period gradually increased， with statistically significant difference （P <0.05）. After filtering for 20 min， the hemolysis rate at the end of storage period was more than 0.8%， and the quality did not meet the standard. Conclusion The length of whole blood filtration time has a significant effect on blood quality. In order to ensure the preparation quality of leukocyte-free blood， the best time to filter leukocytes from 200 ml of whole blood is 10 min and should not exceed 20 min.

[Key words] Whole blood filtration;Leukocyte; Volume;Leukocyte count;Hemoglobin;Hemolysis rate

過濾白細(xì)胞是輸血界公認(rèn)對臨床輸血有益的一項技術(shù)，國內(nèi)許多血站及血液中心都開展了血液濾白的新技術(shù)和研究。目前去除血液中白細(xì)胞的方法有很多，其中以過濾法最為理想。過濾法指采用白細(xì)胞專用濾器濾除血液制劑中的白細(xì)胞，但濾除效果與所使用的濾器類型、血液制備方法、白細(xì)胞過濾時間等息息相關(guān)[1-2]。如何盡可能減少白細(xì)胞濾器對其他血液成分造成影響，同時又能最大限度去除血液中的白細(xì)胞，提高紅細(xì)胞收集率，成為采供血機構(gòu)共同關(guān)注的焦點。為提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，減少全血過濾失敗或引起的溶血性報廢，本研究通過建立全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液質(zhì)量的影響的研究課題，以期為臨床安全用血和成分制備工作提供理論指導(dǎo)與參考借鑒，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200（上海輸血技術(shù)有限公司）、血液過濾管理儀（佛山沃塘醫(yī)療科技有限公司）、SE250熱合機（韓國森通）、儲血冰箱（日本三洋）、BC-3000Plus 全自動血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）、722型光柵分光光度計（上海第三分析儀器廠）、HH-US-B 恒溫水浴箱（金壇區(qū)金城春蘭實驗儀器廠）、CX31生物顯微鏡（OLYMPUS）、大容量Nageotte血細(xì)胞計數(shù)盤（德國進口）;血漿游離血紅蛋白測定試劑盒、白細(xì)胞稀釋液、血細(xì)胞分析用溶血劑、稀釋液、沖洗液等，均在有效期內(nèi)使用。

1.2方法

本研究經(jīng)肇慶市中心血站學(xué)術(shù)委員會同意，以400份血液樣本作為研究對象，選取2020年4月至2021年3月使用上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200，順暢采集200 ml 全血，采集后置于2～6℃冰箱內(nèi)3 h 以上，按照其血袋說明書要求進行當(dāng)天過濾操作，并對其過濾時間實施監(jiān)控。分別按濾除時間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，每組含濾前全血及濾后全血樣本各50份，稱量過濾前和過濾后的全血重量，并做好標(biāo)識。采用血細(xì)胞計數(shù)儀檢測濾前和濾后的標(biāo)本，測定濾前白細(xì)胞的含量和血紅蛋白含量，以及濾后的血紅蛋白含量和血細(xì)胞比容（hematocrit，Hct）;根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程》[3]要求，通過結(jié)晶紫染色液使白細(xì)胞著色，使用大容量Nageotte血細(xì)胞計數(shù)板方法，在顯微鏡下計數(shù)，檢測濾過血液的白細(xì)胞殘留量;使用游離血紅蛋白測定試劑盒檢測血漿游離血紅蛋白的濃度，結(jié)合Hct計算出溶血率。本研究去白細(xì)胞全血質(zhì)量控制項目和要求如下：外觀肉眼觀察應(yīng)無色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況，血袋完好，并保留注滿全血經(jīng)熱合的導(dǎo)管至少35 cm，血紅蛋白含量≥18 g、白細(xì)胞殘留量≤2.5×106個，儲存期末溶血率<0.8%，無菌試驗為無細(xì)菌生長。

1.3觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》[4]中去白細(xì)胞全血質(zhì)量控制項目和要求：來源于200 ml 全血;觀察全血過濾白細(xì)胞過濾前后的血液容量、白細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量、儲存期末溶血率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用 SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用（x ±s）表示，組間比較采用 t 檢驗，P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液容量及白細(xì)胞計數(shù)的影響

隨著全血過濾白細(xì)胞時間的增加，過濾后血液容量無顯著變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），但血液當(dāng)中白細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05）。見表1。

2.2全血過濾白細(xì)胞時間長短對血紅蛋白及儲存期末溶血率的影響

隨著全血過濾白細(xì)胞時間的增加，過濾后血液當(dāng)中的血紅蛋白含量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），但儲存期末溶血率逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05）;過濾時間在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白細(xì)胞全血均符合質(zhì)量要求，過濾時間達20 min 有出現(xiàn)儲存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測不達標(biāo)的情況。見表2。

3討論

近年來，肇慶市各臨床醫(yī)院對去白細(xì)胞血液的需求量不斷增長，供需矛盾十分突出，據(jù)統(tǒng)計2020年去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的臨床用血總量為17213 U，而2015年僅為7357.5 U，五年的增幅為134%。從增幅情況來看，分析原因可能為：一是肇慶市地中海貧血患者的用血量及地中海貧血患者的數(shù)量均增加，二是去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的臨床應(yīng)用更為廣泛。肇慶市是廣東省地中海貧血防控項目重點地區(qū)之一，目前我市登記在冊的地中海貧血患兒已逾300多人，由于社會對地貧的防控措施和宣傳不到位，地中海貧血患兒還在增加，盡管目前有造血干細(xì)胞移植等先進的治療手段，但由于其治療費用昂貴以及術(shù)后的各種并發(fā)癥等，常使患者無法徹底得到根治，需要長期輸血，而輸注去白細(xì)胞血液在一定程度上減少同種異體輸血反應(yīng)及降低機體免疫功能的破壞等，對于有條件的地中海貧血患者是重要的輸血治療措施。同時人們對血液質(zhì)量、輸血治療和輸血安全有了更高層次的需求，在輸血中引起的不良反應(yīng)逐漸被重視，超過90%的輸血不良反應(yīng)與白細(xì)胞相關(guān)，如非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)、HLA 同種異體免疫反應(yīng)等[5-6]，同時白細(xì)胞還是一些嗜白細(xì)胞病毒如巨細(xì)胞病毒的載體，輸注含白細(xì)胞的血液具有傳染這些病毒的危險，嚴(yán)重威脅醫(yī)療技術(shù)安全及患者的生命健康[7-8]，臨床醫(yī)生也逐漸意識到輸注去白細(xì)胞血液是提高臨床用血安全和醫(yī)療質(zhì)量的關(guān)鍵[9]。

實現(xiàn)安全輸血對提高人民群眾的健康水平具有巨大的社會效益，是每一位血液工作者追求的崇高目標(biāo)。據(jù)文獻報道，全血在儲存過程中會發(fā)生白細(xì)胞死亡崩解，白細(xì)胞死亡崩解后能夠分泌一些生物活性分子（如白介素、腫瘤壞死因子），這些生物活性分子會導(dǎo)致輸血時發(fā)生過敏等不良反應(yīng)，如果在血液保存前過濾白細(xì)胞不但可以讓紅細(xì)胞免受白細(xì)胞介導(dǎo)所致溶血的影響，提高血液保存過程中紅細(xì)胞的質(zhì)量，還可以降低輸血過程中相關(guān)的不良反應(yīng)[10-11]，而且不同的保存溫度、濾材及放置時間等均會影響血液質(zhì)量，但鮮有研究報道不同過濾白細(xì)胞時間對血液質(zhì)量的影響[12-13]。本研究通過對全血過濾白細(xì)胞的時間實施監(jiān)控，分析不同流速時間對血液質(zhì)量的影響，以期找到最佳、最適宜的流速時間，及時采取干預(yù)措施，提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，減少全血過濾白細(xì)胞失敗或引起的溶血性報廢，避免血液資源的浪費。與本技術(shù)類似的是丁國良等研究表明，全血400 ml 白細(xì)胞濾除時間應(yīng)不低于15 min。白細(xì)胞介素檢測結(jié)果顯示，第2天沒有太多白細(xì)胞死亡，采血當(dāng)天濾除和第2天濾除效果差異無統(tǒng)計學(xué)意義，只是不能得到新鮮冰凍血漿[14]。然而該研究僅針對“400 ml 血液濾除多長時間為最佳及新采集的血液什么時間濾除最好”進行了探討，但在目前肇慶市大多數(shù)獻血者的獻血量仍為200 ml 為主。本研究主要是根據(jù)200 ml 全血去除白細(xì)胞的不同過濾時間來檢測對血液質(zhì)量的影響，采用的是上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋和當(dāng)天濾除白細(xì)胞的制備方法，選擇的研究對象是濾前及濾后的血液樣本，盡量減少血液樣本受其他因素影響的差異性，并對其制備的血液成分進行質(zhì)量抽檢，得出的數(shù)據(jù)更完整更具有說服力。雖然丁國良的方法相比本研究技術(shù)更節(jié)省時間，但對于濾前血液中的白細(xì)胞數(shù)量并沒有監(jiān)測，濾除時間與效果仍有待進一步驗證。本研究通過400份血液樣本（含濾前全血及濾后全血樣本），按濾除時間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，分別檢測其濾前及濾后全血樣本，項目包括血液容量、白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量、儲存期末溶血率等，并進行數(shù)據(jù)比較分析，結(jié)果顯示使用同一材質(zhì)濾器血袋和濾前溫度，四組濾后血液容量、血紅蛋白含量比較雖然無明顯變化，過濾時間在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白細(xì)胞全血均符合質(zhì)量要求，但過濾時間達20 min 有出現(xiàn)儲存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測不達標(biāo)的情況。從表1、表2數(shù)據(jù)可以看出全血過濾時間長短對血液質(zhì)量有顯著影響，過濾時間過短會影響過濾效果，容易造成白細(xì)胞殘留量過高、過濾效果差;過濾時間過長會影響儲存期末溶血率，容易引起血漿溶血性報廢，造成血液資源的浪費。研究認(rèn)為200 ml 全血過濾時間最佳在10 min，最長不宜超過20 min，此時血液當(dāng)中白細(xì)胞殘留量、血紅蛋白含量、儲存期末溶血率均能維持在較好的質(zhì)量控制范圍，若超出20 min 應(yīng)及時采取干預(yù)措施，因為流速過慢，可能會導(dǎo)致堵塞，亦有可能加大白細(xì)胞從濾網(wǎng)中漏出的風(fēng)險，可能激活凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致過濾后血液微小凝聚[15-16]。而在血液成分制備工作中發(fā)現(xiàn)，去白細(xì)胞全血經(jīng)離心后肉眼觀察血漿呈紅色，再經(jīng)二次離心后，血漿仍為紅色報廢的，往往全血過濾時間超過20 min。如果能發(fā)現(xiàn)過濾時間異常，血流過慢，及時查找原因，采取干預(yù)措施，可將損失降到最低。

綜上所述，本研究通過全血過濾白細(xì)胞時間長短對血液質(zhì)量的影響研究，找到最佳、最適宜的過濾時間，有利于提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，確保臨床用血安全、有效，更能較好地避免血液資源浪費。由于血液去除白細(xì)胞技術(shù)比較復(fù)雜，影響因素較多，本研究僅對過濾時間長短進行了探索，存在一定的局限性，后續(xù)將進一步探討血液溫度、儲存時間等對血液質(zhì)量的影響，以期為進一步提升血液制備質(zhì)量奠定更為全面的理論依據(jù)。

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（收稿日期：2021-04-27）