• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    苦蕎粒重基因FtGW8的生物信息學分析

    2021-09-14 12:57:46石桃雄汪燕黃娟梁成剛
    安徽農(nóng)學通報 2021年15期
    關鍵詞:苦蕎

    石桃雄 汪燕 黃娟 梁成剛

    摘 要:種子大小和重量是蕎麥產(chǎn)量構成的關鍵因素。該研究基于水稻粒重基因GW8,對苦蕎粒重基因進行了生物信息學分析,結果表明,苦蕎粒重FtGW8基因CDS序列長768bp,編碼的蛋白質(zhì)包含255個氨基酸,分子量為27.97kD,等電點為9.5,屬于親水性蛋白,具有跨膜結構,與水稻GW8蛋白相似。預測FtGW8蛋白定位于細胞核內(nèi),其二級結構主要由α螺旋和無規(guī)則卷曲組成,預測的三級結構與二級結構基本一致。蛋白功能分析發(fā)現(xiàn),F(xiàn)tGW8和水稻GW8蛋白均具有SBP功能域,表明其可能具有控制粒重的功能。該研究為苦蕎粒重基因的克隆奠定了基礎。

    關鍵詞:苦蕎;粒重基因;同源比對分析;蛋白質(zhì)結構

    中圖分類號 Q74 文獻標識碼 A文章編號 1007-7731(2021)15-0029-05

    Bioinformatics Analysis of FtGW8 for Grain Weight in Tartary Buckwheat

    SHI Taoxiong et al.

    (Buckwheat Technology Research Center, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, China)

    Abstract: Seed size and weight are the important factors for grain yield in Tartary buckwheat. In this study, bioinformatics analysis of the grain weight gene in Tartary buckwheat were conducted based on gene GW8 for grain weight in rice. The results showed that GW8 protein structure showed high similarity between Tartary buckwheat and rice. The CDS length of FtGW8 is 768 bp, encoding 255 amino acids. The molecular weight of the FtGW8 protein is 27.97 kDa, and the theoretical pI is 9.5. FtGW8 belongs to hydrophilic protein, and does not have transmembrane domain. Main composition of the secondary structure of FtGW8 were α-helix and random coil. It was predicted that FtGW8 mainly located in the nucleus. The result of prediction showed three-dimensional structure of FtGW8 was similar with the secondary structure. The analysis of protein function showed that both FtGW8 and rice GW8 had a SBP functional domain. The results suggested that FtGW8 might control grain weight in Tartary buckwheat. This study will lay the foundation for the further cloning of seed weight genes in Tartary buckwheat.

    Key words: Tartary buckwheat; Gain weight gene; Homology analysis; Protein structure

    蕎麥(Fagopyrum Mill) 蛋白質(zhì)含量高,富含黃酮類化合物,是我國特色藥食兼用型小雜糧。蕎麥包含甜蕎(Fagopyrum esculentum Moench)和苦蕎(Fagopyrum tataricum Gaertn)兩大栽培種[1-2]。與甜蕎相比,苦蕎總黃酮含量更高,抗氧化、降血脂、降血糖、降血壓等保健功能更顯著[3]。近年來,隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強,對苦蕎的需求日也益增加。但目前苦蕎產(chǎn)量低而不穩(wěn),且由于苦蕎花朵較小,閉花受精,較難進行人工去雄和有性雜交工作,利用雜種優(yōu)勢提高產(chǎn)量較為困難[4]。因此,如何提高苦蕎產(chǎn)量對于苦蕎種植面積的推廣和苦蕎特色產(chǎn)業(yè)的發(fā)展尤為重要。

    粒重由籽粒的長度、寬度、厚度決定,是作物的產(chǎn)量的決定性因素之一[5-6],目前,水稻中已克隆出多個粒重相關基因[7-8]。水稻粒重基因GW8位于第8染色體,編碼Squamosa啟動子結合蛋白(squamosa promoter binding protein-like 16,OsSPL16),是一個包含SBP結構域的轉(zhuǎn)錄因子,GW8可加快穎殼細胞的縱向分裂速度而引起籽粒變長、穗長增加、子房伸長加快和籽粒灌漿加速,從而調(diào)控水稻粒和粒重[9]。GW8通過基因表達水平的變化調(diào)控粒型,較高的表達水平導致粒型變大,是粒型的正向調(diào)控因子[10]。目前,關于蕎麥中粒重相關基因克隆的研究還鮮有報道。為此,本研究以水稻GW8粒重基因為參考,通過序列比對程序獲得苦蕎同源基因FtGW8,利用生物信息學方法和工具對FtGW8蛋白進行理化性質(zhì)、結構及功能分析,為苦蕎粒重基因FtGW8的克隆及分子功能研究奠定基礎。

    1 材料與方法

    1.1 GW8基因序列的同源分析 首先,在國家水稻數(shù)據(jù)中心數(shù)據(jù)庫中(http://www.ricedata.cn/index.htm)獲得水稻GW8基因序列(LOC_Os08g41940)和氨基酸序列。基于此氨基酸序列,通過Blastp(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)序列比對程序(參數(shù)默認)檢索苦蕎參考基因組蛋白數(shù)據(jù)庫,將序列相似性最高的基因作為苦蕎的GW8基因。在檢索結果中,基因FtPinG0000496000.01編碼的蛋白序列與水稻GW8蛋白序列的序列相似性最高,為54%,命名為FtGW8。

    1.2 蛋白理化特性及結構預測 利用Gene Structure Display Server(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/index.php)預測基因結構。使用在線軟件ExPASy-ProtParam(https://web.expasy.org/protparam/)預測分析蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)(包括蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量、等電點、氨酸組成、原子組成、脂肪系數(shù)、不穩(wěn)定系數(shù)等)。使用在線軟件NPS@:SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)預測蛋白質(zhì)的二級結構。使用在線軟件ExPASy-ProtScale(http://web.expasy.org/protscale/)對蛋白質(zhì)進行疏水性分析。使用在線軟件PHYRE2(http://www.Sbg.bio.ic.ac.uk/phyre2/html/page.cgi?id=index)對蛋白質(zhì)進行三級結構預測分析。使用iPSORT(http://ipsort.hgc.jp/)、TargetP1.1Server(http://www.Cbs.dtu.dk/services/TargetP/)、WoLFPSORT(https://wolfpsort.Hgc.jp/)對蛋白進行亞細胞定位。使用在線軟件SignalP4.1Server(http://www.Cbs.dtu.dk/services/SignalP/)對蛋白進行信號肽預測。使用在線軟件TMHMM Server 2.0(http://www.cbs.Dtu.dk/services/TMHMM/)進行蛋白跨膜區(qū)域預測分析。使用在線軟件CD-search(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)分析蛋白的功能結構域。使用NetPhos3.1(http://www.Cbs.Dtu.dk/services/NetPhos/)對目的基因進行磷酸化修飾位點預測。

    2 結果與分析

    2.1 苦蕎FtGW8基因的序列 利用水稻GW8基因的氨基酸序列在苦蕎參考基因組數(shù)據(jù)庫進行BLAST分析,篩選獲得與水稻GW8相似度最高(54%)基因FtPinG0000496000.01的CDS序列,暫時命名為FtGW8。FtGW8基因CDS全長768bp,編碼的蛋白含255個氨基酸。利用GSGD2.0在線軟件對FtGW8基因的DNA和CDS序列進行分析,獲得FtGW8基因結構圖(見圖1),結果表明,該基因含有3個外顯子和2個內(nèi)含子。與水稻GW8基因結構的比對發(fā)現(xiàn),F(xiàn)tGW8基因與水稻GW8基因結構基本一致(見圖2)。

    2.2 蕎麥FtGW8蛋白的結構與功能

    2.2.1 FtGW8蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 對FtGW8的氨基酸組成進行預測,結果表明:苦蕎FtGW8的氨基酸組成中,絲氨酸(Ser)含量最高,占16.1%,其次為甘氨酸(Gly),占9.0%,含量最低的為色氨酸(Trp),占0.8%,缺少吡咯賴氨酸(Pyl)和硒半胱氨酸(Sec)2種氨基酸(見表1)。對FtGW8蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析表明,該蛋白分子量為27.97 kDa,理論等電點為9.5,分子式為C1190H1881N375O376S16,不穩(wěn)定系數(shù)為68.06,說明該蛋白可能為不穩(wěn)定蛋白(不穩(wěn)定系數(shù)>40)。FtGW8蛋白質(zhì)平均疏水性為-0.74(見表2),且氨基酸峰值在0以下比例明顯大于0以上的(見圖3),表明該蛋白可能為親水性蛋白。

    2.2.2 FtGW8蛋白質(zhì)的二級結構 利用NPS@:SOPMA。在線軟件獲得苦蕎FtGW8蛋白的二級結構構成圖(圖4)表明,F(xiàn)tGW8蛋白主要由α-螺旋、無規(guī)則卷曲、β-轉(zhuǎn)角和延伸鏈4種構象組成,其中有136個氨基酸(占總氨基酸數(shù)的53.3%)參與構成無規(guī)則卷曲(Cc),氨基酸的占比最高;其次是α-螺旋(Hh),由61個氨基酸構成,占總氨基酸數(shù)的23.92%;延伸鏈(Ee)和β-轉(zhuǎn)角(Tt)比例較少,分別占18.04%(46個氨基酸)、4.71%(12個氨基酸)。

    2.2.3 FtGW8蛋白質(zhì)的三級結構 利用在線軟件Phyre2,建模預測苦蕎FtGW8蛋白的三級結構(見圖5)。由圖5可知,F(xiàn)tGW8蛋白與PDB晶體庫中的GW蛋白模體(PDB號:d1s70a)最為同源,可信度達到100%。因此,推測苦蕎FtGW8蛋白的三級結構是由無規(guī)則卷曲、α-螺旋、延伸鏈和β-轉(zhuǎn)角組成,這一結構與二級結構預測結果基本一致。

    2.2.4 FtGW8蛋白質(zhì)的亞細胞定位 利用WoLFPSORT Prediction預測FtGW8蛋白定位于細胞核的系數(shù)為12(nucl:12),定位于葉綠體的系數(shù)為1(chlo:1),定位于其他細胞器的系數(shù)為1(extra:1)。使用iP-SORT在線軟件預測FtGW8的亞細胞定位,其結果如圖6所示。從圖6可以看出,該蛋白不在葉綠體或線粒體中,也不含信號肽。綜上推測,苦蕎GW8蛋白位于細胞核的可能性較大。

    2.2.5 FtGW8蛋白的信號肽 使用在線軟件SignalP 4.1對苦蕎FtGW8蛋白進行信號肽分析,得到剪切位點系數(shù)(C-score)、綜合剪切位點系數(shù)(Y-score)、S信號肽系數(shù)(S-score)的值均為0(見圖7),說明FtGW8蛋白沒有包含信號肽。

    2.2.6 FtGW8蛋白的跨膜結構 跨膜結構域一般是20個左右的疏水氨基酸形成的α螺旋結構,在細胞膜上起錨定作用,是膜內(nèi)蛋白與膜脂相結合的主要部位。對蛋白跨膜結構域的預測和分析,有助于了解蛋白的功能、結構及細胞中的作用部位[11]。利用TMHMM Server v 2.0對FtGW8蛋白跨膜性預測,結果表明,GW8蛋白肽鏈全部位于膜外,不具有跨膜結構(見圖8)。

    2.2.7 FtGW8蛋白的結構域 使用CD-search在線預測FtGW8蛋白的功能結構域發(fā)現(xiàn),該蛋白與水稻的結構域基本一致[9],在第21~95個氨基酸中含有一個SBP功能域(SQUAMOSA-promoter binding protein)(見圖9)。

    2.2.8 FtGW8蛋白的磷酸化修飾位點的預測分析 蛋白質(zhì)磷酸化是蛋白質(zhì)最重要的翻譯后修飾方式之一,幾乎參與所有的生物學過程[12]。使用NetPhos 3.1預測FtGW8蛋白的磷酸化修飾位點,結果顯示,該蛋白共有37個磷酸化位點,其中Ser(絲氨酸)30個,Thr(蘇氨酸)4個,Tyr(酪氨酸)3個(見圖10)。

    3 討論與結論

    粒重是影響作物產(chǎn)量的主要因素之一,而且是一個由多個基因與環(huán)境協(xié)同作用、共同控制的復雜數(shù)量性狀。解析作物的粒重、粒長、粒寬及粒厚的遺傳調(diào)控機理,對分子輔助高產(chǎn)育種有著重要意義。目前,在水稻[13-14]、玉米[15]、小麥[16]、高粱[17]等作物中已有一些關于粒重和粒型基因的相關報道。已克隆得到的水稻粒重GW8基因編碼一個含有SBP功能域的Squamosa啟動子結合蛋白OsSPL16,GW8能直接結合到GW7基因的啟動子并調(diào)控其表達,GW8-GW7分子模塊在水稻粒重的調(diào)控中起正向調(diào)節(jié)因子的作用,在提高水稻產(chǎn)量的同時提高了稻米品質(zhì)[9]。本研究以水稻粒重GW8氨基酸序列為模板進行同源分析,獲得了苦蕎FtGW8蛋白。通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn),該蛋白是由255個氨基酸組成,分子量為27.97kD的親水性蛋白,其主要由α螺旋和無規(guī)則卷曲構成,不具有信號肽,亞細胞定位軟件預測其定位于細胞核中。蛋白功能預測顯示,F(xiàn)tGW8蛋白含有一個SBP結構域。這些預測結果與水稻GW8的蛋白結構功能一致。

    本研究發(fā)現(xiàn),苦蕎FtGW8蛋白與水稻GW8蛋白具有相同的保守結構域SBP,由此推測苦蕎FtGW8基因和水稻GW8基因具有相似的功能,即具有控制粒寬和粒重的功能。目前,水稻粒重調(diào)控基因GW8的熒光分子標記已開發(fā)出來,為在水稻中快速準確鑒定其基因型提供了技術支持??紤]到FtGW8對提高苦蕎產(chǎn)量的巨大潛在作用,在今后的研究中,一方面,有必要對FtGW8及基因家族的功能進行深入研究,為苦蕎產(chǎn)量性狀的遺傳改良提供基礎和理論支撐;另一方面,應借鑒水稻的做法,基于KASP等現(xiàn)代分子標記技術,開展基于基因的關聯(lián)分析,挖掘優(yōu)異的FtGW8等位基因,開發(fā)FtGW8的標記,為苦蕎分子標記輔助高產(chǎn)育種提供標記支撐。

    參考文獻

    [1]陳慶富.蕎麥屬植物科學[M].北京:科學出版社,2012:50,220-226.

    [2]WEISSKOPF A,F(xiàn)ULLER DQ.Buckwheat:origins and development.Encyclopedia of Global Archaeology[M].Springer,2014:1025-1028.

    [3]GIM?NEZ-BASTIDA JA,ZIELI?SKI H.Buckwheat as a functional food and its effects on health[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2015,63(36):7896-7913.

    [4]WANG Y,CAMPBELL C Tartary buckwheat breeding (Fagopyrum tataricum L.Gaertn.) through hybridization with its rice-tartary type[J].Euphytica,2007,156 (3):399-405.

    [5]SONG X J,HUANG W,SHI M,et al.A QTL for rice grain width and weight encodes a previously unknown RING-type E3 ubiquitin ligase[J].Nature Genetics,2007,39(5):623-630.

    [6]魏瑋,郭嘉蓮,萬琳濤,等.小麥粒重形成的分子調(diào)控機制研究綜述[J].浙江農(nóng)林大學學報,2016,33(2):348-356.

    [7]楊維豐,詹鵬麟,林少俊,等.水稻粒形的遺傳研究進展[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報,2019,40(5):203-210.

    [8]邱先進,袁志華,何文靜,等.水稻粒型基因克隆與分子育種研究進展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學,2014,053(13):2977-2980.

    [9]WANG SK,LI S,LIU Q,et et.al The OsSPL16-GW7 regulatory module determines grain shape and simultaneously improves rice yield and grain quality[J]. Nature Genetics,2015,47(8):949-954.

    [10]WANG S K,WU K,YUAN QB,et al. Control of grain size,shape and quality by OsSPL16 in rice[J]. Nature Genetics,2012,44(8):950-954.

    [11]劉宏德,王睿,盧小泉,等.跨膜蛋白結構預測新方法[J].科學通報,2007,52(23):2742-2745.

    [12]BROWNING MD, HUGANIR R, GREENGARD P. Protein phosphorylation and neuronal function[J]. Journal of Neurochemistry, 2010, 45(1):13.

    [13]康藝維,陳玉宇,張迎信.水稻粒型基因克隆研究進展及育種應用展望[J].中國水稻科學,2020,169(6):3-14.

    [14]AZIZI P,OSMAN M,HANAFI MM,et al.Molecular insights into the regulation of rice kernel elongation[J].Critical Reviews in Biotechnology,2019,39(7):904-923.

    [15]DOLL NM,DEP?GE-FARGEIX N,ROGOWSKY PM,et al.Signaling in early maize kernel development[J]. Molecular Plant, 2017,10(3):375-388.

    [16]LI W,YANG B.Translational genomics of grain size regulation in wheat[J].Theoretical and Applied Genetics,2017,130(9):1765-1771.

    [17]韓立杰,才宏偉.高粱粒重遺傳研究進展[J].生物技術通報,2019,322(5),21-33.

    (責編:張宏民)

    基金項目:國家自然科學基金項目(32060511);貴州省科技支撐項目(黔科合ZC[2019]2298);貴州省蕎麥種質(zhì)資源保育及創(chuàng)新重點實驗室建設基金(黔教合KY[2017]002)。

    作者簡介:石桃雄(1980—),女,寧夏人,博士,副教授,研究方向:蕎麥種質(zhì)資源與育種。 *通訊作者 ?收稿日期:2021-04-26

    猜你喜歡
    苦蕎
    苦蕎飯的研制
    科學家揭示苦蕎起源傳播馴化路徑
    苦蕎
    詩潮(2021年11期)2021-11-24 19:55:50
    布拖縣苦蕎產(chǎn)業(yè)發(fā)展情況調(diào)研報告
    苦蕎花
    青年歌聲(2018年5期)2018-10-29 03:18:40
    苦蕎產(chǎn)品的研發(fā)進展
    苦蕎的保健功效及開發(fā)利用研究進展
    苦蕎殼和苦蕎籽中總黃酮的提取及含量比較
    廣東飼料(2016年3期)2016-12-01 03:43:12
    藥食兩用話苦蕎
    城門苦蕎
    国产午夜精品论理片| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久欧美精品欧美久久欧美| 99久久精品热视频| 久久精品综合一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 久久精品国产亚洲网站| 久久精品国产亚洲av天美| 99久久精品一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 身体一侧抽搐| 看非洲黑人一级黄片| 国产成年人精品一区二区| 深爱激情五月婷婷| 乱系列少妇在线播放| 又爽又黄a免费视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美一区二区精品小视频在线| 草草在线视频免费看| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲av一区综合| 国产成人影院久久av| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产一区二区三区av在线 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 联通29元200g的流量卡| 国产老妇女一区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久久久大精品| 亚洲欧美清纯卡通| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美3d第一页| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲国产色片| 成人特级av手机在线观看| 久久99热这里只有精品18| 亚洲精品自拍成人| 我的老师免费观看完整版| 亚洲电影在线观看av| 岛国毛片在线播放| 国产黄片视频在线免费观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久久久久大av| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产老妇女一区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产乱人偷精品视频| 久久九九热精品免费| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲,欧美,日韩| 国产伦理片在线播放av一区 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲五月天丁香| 亚洲av不卡在线观看| 国产探花极品一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 深爱激情五月婷婷| 国产一级毛片在线| 免费观看精品视频网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品福利在线免费观看| 97在线视频观看| 一进一出抽搐动态| 国产在线男女| 日韩精品青青久久久久久| 久久精品综合一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| 可以在线观看毛片的网站| 成年女人看的毛片在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 网址你懂的国产日韩在线| 小说图片视频综合网站| 99视频精品全部免费 在线| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲欧洲国产日韩| 欧美日韩乱码在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品人妻久久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 99热这里只有是精品在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 久久99蜜桃精品久久| 日本av手机在线免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| av免费观看日本| 国产黄色小视频在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲国产精品合色在线| 91av网一区二区| 欧美激情在线99| 成年av动漫网址| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲综合色惰| 国产亚洲av嫩草精品影院| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 99视频精品全部免费 在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美色视频一区免费| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本免费一区二区三区高清不卡| a级毛片a级免费在线| 秋霞在线观看毛片| 一个人看视频在线观看www免费| 美女大奶头视频| 18禁在线播放成人免费| 免费看日本二区| 免费无遮挡裸体视频| 少妇丰满av| 好男人视频免费观看在线| 国产91av在线免费观看| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 乱系列少妇在线播放| 91精品一卡2卡3卡4卡| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产高潮美女av| 草草在线视频免费看| 亚洲欧美清纯卡通| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲精品色激情综合| 成人无遮挡网站| a级毛色黄片| 日韩亚洲欧美综合| av女优亚洲男人天堂| 亚洲va在线va天堂va国产| 麻豆国产av国片精品| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品久久久久久久久久久久久| 国产色婷婷99| 欧美变态另类bdsm刘玥| 天天一区二区日本电影三级| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲国产欧美人成| 最后的刺客免费高清国语| 色视频www国产| 免费观看精品视频网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美区成人在线视频| 三级毛片av免费| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩视频在线欧美| 伦精品一区二区三区| 日本黄色视频三级网站网址| 国产一区二区三区av在线 | 成人亚洲精品av一区二区| 日本一本二区三区精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产爱豆传媒在线观看| eeuss影院久久| 偷拍熟女少妇极品色| 一本一本综合久久| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 日韩精品青青久久久久久| 婷婷色综合大香蕉| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美在线一区亚洲| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久国产成人精品二区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 天堂中文最新版在线下载 | 插逼视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产一区二区三区在线臀色熟女| av卡一久久| 中出人妻视频一区二区| av专区在线播放| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲性久久影院| 男人舔奶头视频| 亚洲18禁久久av| 最近手机中文字幕大全| 九九爱精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 春色校园在线视频观看| 99热6这里只有精品| 老女人水多毛片| kizo精华| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久久午夜电影| 成人av在线播放网站| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲av免费在线观看| 女人被狂操c到高潮| av.在线天堂| av在线天堂中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 午夜福利在线在线| 最近手机中文字幕大全| 日本熟妇午夜| 99在线人妻在线中文字幕| 精品日产1卡2卡| 1000部很黄的大片| 美女内射精品一级片tv| 成人欧美大片| 久久久久久伊人网av| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 天美传媒精品一区二区| 久久久精品大字幕| 最新中文字幕久久久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 一级黄色大片毛片| 18禁在线播放成人免费| 99热精品在线国产| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 人体艺术视频欧美日本| 日韩成人av中文字幕在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精华霜和精华液先用哪个| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲性久久影院| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲av.av天堂| 99热这里只有是精品在线观看| 久久精品91蜜桃| av在线播放精品| 赤兔流量卡办理| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产单亲对白刺激| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久鲁丝午夜福利片| 哪里可以看免费的av片| 乱码一卡2卡4卡精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久精品夜色国产| 不卡一级毛片| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲在久久综合| 成年女人永久免费观看视频| 真实男女啪啪啪动态图| 久久亚洲精品不卡| 久久久久网色| 久久这里有精品视频免费| 在线观看av片永久免费下载| 成人特级av手机在线观看| 成人av在线播放网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 午夜精品在线福利| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 激情 狠狠 欧美| 国产成人a区在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久这里有精品视频免费| 亚洲av.av天堂| 老司机福利观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 最后的刺客免费高清国语| 久久鲁丝午夜福利片| 激情 狠狠 欧美| 亚洲三级黄色毛片| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲不卡免费看| av在线老鸭窝| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日本欧美国产在线视频| 丝袜喷水一区| 午夜福利高清视频| 中国国产av一级| 天堂影院成人在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 欧美高清性xxxxhd video| 我的老师免费观看完整版| 亚洲最大成人av| 内地一区二区视频在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 一级毛片电影观看 | 亚洲最大成人手机在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲av免费高清在线观看| av专区在线播放| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲七黄色美女视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产高潮美女av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产乱人偷精品视频| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品三级大全| 桃色一区二区三区在线观看| 三级经典国产精品| 久久精品综合一区二区三区| 成人二区视频| 亚洲中文字幕日韩| 我要看日韩黄色一级片| 国产成人精品一,二区 | 国产淫片久久久久久久久| 亚洲不卡免费看| 国内精品一区二区在线观看| 美女黄网站色视频| 九色成人免费人妻av| 国产亚洲精品久久久com| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久99精品国语久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 免费观看精品视频网站| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本免费a在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| www.av在线官网国产| eeuss影院久久| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲第一电影网av| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 春色校园在线视频观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 能在线免费看毛片的网站| 99热这里只有是精品50| ponron亚洲| 国产高清有码在线观看视频| 秋霞在线观看毛片| 久久久欧美国产精品| 美女大奶头视频| 嫩草影院入口| 国产精品电影一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产男人的电影天堂91| 中文字幕久久专区| 亚洲精品色激情综合| 国产 一区 欧美 日韩| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久精品国产亚洲av天美| 久久这里只有精品中国| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲久久久久久中文字幕| 精品久久久久久久久亚洲| 99久国产av精品| 国产真实伦视频高清在线观看| 日本黄色片子视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 中出人妻视频一区二区| avwww免费| 国产精品久久电影中文字幕| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲不卡免费看| 日韩制服骚丝袜av| 99久久人妻综合| 国产精品久久久久久精品电影| 又爽又黄a免费视频| 久久精品国产清高在天天线| 天堂网av新在线| 国产成人精品婷婷| av专区在线播放| 国产精品日韩av在线免费观看| 日韩一区二区视频免费看| 在线免费观看的www视频| 国产精品伦人一区二区| 午夜激情福利司机影院| 高清毛片免费看| 一区二区三区高清视频在线| 岛国在线免费视频观看| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩中字成人| 亚洲国产精品成人久久小说 | 色综合亚洲欧美另类图片| 国模一区二区三区四区视频| a级一级毛片免费在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲精品成人久久久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 真实男女啪啪啪动态图| 精华霜和精华液先用哪个| 精品欧美国产一区二区三| 我的老师免费观看完整版| 亚洲成人久久爱视频| 日韩av不卡免费在线播放| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲乱码一区二区免费版| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩欧美精品v在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 精品国产三级普通话版| av在线老鸭窝| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美变态另类bdsm刘玥| 搡老妇女老女人老熟妇| 日韩在线高清观看一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 久久久久国产网址| 一边亲一边摸免费视频| 天堂影院成人在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 性欧美人与动物交配| 在线观看av片永久免费下载| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 听说在线观看完整版免费高清| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品日产1卡2卡| 国产真实伦视频高清在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久久性生活片| 精品一区二区三区人妻视频| 国产成人影院久久av| 高清午夜精品一区二区三区 | 日本免费a在线| 人妻少妇偷人精品九色| 全区人妻精品视频| 免费看美女性在线毛片视频| 免费观看精品视频网站| 国产精品人妻久久久影院| 美女被艹到高潮喷水动态| 99九九线精品视频在线观看视频| 看十八女毛片水多多多| 久久久色成人| 村上凉子中文字幕在线| 久久久久久久久久久丰满| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久欧美国产精品| 精品免费久久久久久久清纯| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品456在线播放app| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产精品.久久久| 男插女下体视频免费在线播放| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 啦啦啦啦在线视频资源| 免费av毛片视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲av二区三区四区| 在现免费观看毛片| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美清纯卡通| 国产极品天堂在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲自偷自拍三级| 国产伦一二天堂av在线观看| 一级毛片我不卡| 男女啪啪激烈高潮av片| 精品久久久久久成人av| 九色成人免费人妻av| 欧美人与善性xxx| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩一本色道免费dvd| 欧美成人免费av一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 久久久久久久久中文| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 精华霜和精华液先用哪个| 真实男女啪啪啪动态图| av在线天堂中文字幕| av天堂中文字幕网| 少妇人妻精品综合一区二区 | 麻豆乱淫一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 岛国毛片在线播放| 久久九九热精品免费| 日本与韩国留学比较| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲无线在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 在线免费十八禁| 91av网一区二区| 99热这里只有是精品50| 综合色丁香网| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精华一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久99热6这里只有精品| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品久久视频播放| 一个人看的www免费观看视频| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久久久久久成人| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 在线观看午夜福利视频| 人体艺术视频欧美日本| 久久久国产成人免费| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99热这里只有精品一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产欧美在线一区| 赤兔流量卡办理| 一个人免费在线观看电影| 三级经典国产精品| 免费人成视频x8x8入口观看| 在线天堂最新版资源| 在线免费十八禁| 神马国产精品三级电影在线观看| 成年免费大片在线观看| av国产免费在线观看| 直男gayav资源| 在线免费观看的www视频| 成人欧美大片| 我要搜黄色片| 黄色日韩在线| 99久久精品国产国产毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中出人妻视频一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 色尼玛亚洲综合影院| 天堂√8在线中文| 成人永久免费在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 免费看日本二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 久久久久网色| 村上凉子中文字幕在线| 成人二区视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜福利在线观看吧| 边亲边吃奶的免费视频| a级毛色黄片| 亚洲欧洲国产日韩| 真实男女啪啪啪动态图| 久久精品综合一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 婷婷亚洲欧美| 久久午夜亚洲精品久久| 久久99精品国语久久久| 人妻久久中文字幕网| 午夜a级毛片| 天堂网av新在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美最新免费一区二区三区| 好男人在线观看高清免费视频| 久久人人精品亚洲av| 亚洲不卡免费看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线播放无遮挡| 久久6这里有精品| 免费观看在线日韩| 久久人人爽人人片av| 久久99蜜桃精品久久| 高清在线视频一区二区三区 | 日韩中字成人| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产成人福利小说| 特级一级黄色大片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久人人爽人人片av| 久久亚洲精品不卡| 男女那种视频在线观看| 床上黄色一级片| 亚洲欧美日韩东京热| 一级毛片我不卡| 最好的美女福利视频网| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲内射少妇av| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 老司机福利观看| 亚州av有码| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 蜜臀久久99精品久久宅男| 又爽又黄a免费视频|