大腸菌群不同檢測方法的結(jié)果分析

陳梅 王楠馨 左澤彥 羅紹楠

摘 要：目的：通過對大腸菌群質(zhì)控樣品的檢測，比對VRBA平板計數(shù)法和LST多管發(fā)酵法在大腸菌群計數(shù)檢測中的準確性，同時分析移液管和移液槍對檢測結(jié)果的影響。方法：質(zhì)控樣品來源于中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心，按照質(zhì)控樣品證書和GB 4789.3—2016進行檢測。結(jié)果：VRBA平板計數(shù)法的檢測結(jié)果|z|值為0.095，LST多管發(fā)酵法的檢測結(jié)果|z|值為1.349。使用移液管進行VRBA平板計數(shù)法檢測的|z|值為0.095，而使用移液槍進行VRBA平板計數(shù)法檢測的|z|值為0.804。結(jié)論：相比于LST多管發(fā)酵法，VRBA平板計數(shù)法的檢測結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，靈敏度和準確性更高。相比于移液槍，使用移液管進行VRBA平板計數(shù)法檢測的結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，準確性更高。

關(guān)鍵詞：大腸菌群;質(zhì)控樣品;VRBA平板計數(shù)法;LST多管發(fā)酵法

大腸菌群是指需氧及兼性厭氧、在35～37 ℃培養(yǎng)條件下，48 h內(nèi)能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌[1-2]。

大腸菌群的檢測方法主要有VRBA平板計數(shù)法、乳糖膽鹽多管發(fā)酵法、LST多管發(fā)酵法、紙片法、PCR試劑盒法、全自動生化鑒定儀法等。根據(jù)《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù)》（GB 4789.3—2016），在食品檢測領(lǐng)域，VRBA平板計數(shù)法、乳糖膽鹽多管發(fā)酵法和LST多管發(fā)酵法是常用的檢測方法[3-4]。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)控樣品來源

質(zhì)控樣品來源于中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心。質(zhì)控樣品為西林瓶真空包裝，包裝完好。

1.2 試劑與儀器

VRBA瓊脂、BGLB肉湯、LST肉湯均購于北京陸橋;氯化鈉試劑購于國藥集團。

立式壓力蒸汽滅菌器（型號：SQ810C，廠家：重慶雅馬拓）;生化培養(yǎng)箱（型號：BD115，廠家：賓得）;光學顯微鏡（型號：DM3000LED，廠家：徠卡）。

1.3 檢驗方法

樣品的保存和使用按照中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心的質(zhì)控樣品證書（證書編號：001FD09035）進行。實驗按照《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù)》（GB 4789.3—2016）的要求進行。

1.4 實驗結(jié)果的報告及評價

VRBA平板計數(shù)法和LST多管發(fā)酵法的結(jié)果按照GB 4789.3—2016的要求進行報告。實驗結(jié)果采用“z比分數(shù)”評價。當|z|≤2時，結(jié)果判定為“滿意”;當2<|z|<3時，結(jié)果判定為“可疑”;當|z|≥3時，結(jié)果判定為“不滿意”。

2 結(jié)果與分析

編號為QC-FD-003的質(zhì)控樣品由3名具有檢驗員資質(zhì)的檢測人員進行檢測。根據(jù)GB 4789.3—2016，每名檢測人員同時用LST肉湯多管發(fā)酵法和VRBA平板計數(shù)法對樣品進行檢測，以達到對檢測方法進行比對的目的。為了比對移液管和移液槍對檢測結(jié)果的影響，每名檢測人員在進行VRBA平板計數(shù)法檢測的時候，同時使用移液管和移液槍對質(zhì)控樣品進行檢測。

由表1可知，LST多管發(fā)酵法（移液管）的檢測結(jié)果的|z|值為1.349，結(jié)果判定為“滿意”。由表2可知，VRBA平板計數(shù)法（移液管）的檢測結(jié)果的|z|值為0.095，結(jié)果判定為“滿意”。VRBA平板計數(shù)的|z|值比LST多管發(fā)酵法的|z|值更小，檢測結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，二者的P值為0.004，P<0.05，檢測結(jié)果具有顯著性差異。

由表2可知，使用移液管進行VRBA平板計數(shù)法檢測的|z|值為0.095，結(jié)果判定為“滿意”。使用移液槍進行VRBA平板計數(shù)法檢測的|z|值為0.804，結(jié)果判定為“滿意”。使用移液管進行檢測的|z|值比使用移液槍進行檢測的|z|值更小，檢測結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，二者的P值為0.013，P<0.05，檢測結(jié)果具有顯著性差異。

3 討論

大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標之一[5]。食品中的大腸菌群檢測方法包括VRBA平板計數(shù)法和MPN計數(shù)法，其中MPN計數(shù)法又分為GB/T 4789.3—2003的乳糖膽鹽多管發(fā)酵法和GB 4789.3—2016的LST多管發(fā)酵法?，F(xiàn)階段，預包裝食品中主要采用GB 4789.3—2016中的VRBA平板計數(shù)法和LST多管發(fā)酵法進行檢測，只有代用茶、油辣椒、粽子等少數(shù)幾類產(chǎn)品采用GB/T 4789.3—2003中的乳糖膽鹽多管發(fā)酵法。

VRBA平板計數(shù)法中使用的VRBA培養(yǎng)基不需要滅菌，現(xiàn)配現(xiàn)用，配制時加熱煮沸2 min即可。食品中的大腸菌群是兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，正常情況下不形成芽孢，在VRBA培養(yǎng)基煮沸的過程中，即使培養(yǎng)基和實驗用水中有大腸菌群存在也會被殺滅，不影響最終的檢測結(jié)果[6]。VRBA培養(yǎng)基中含有的結(jié)晶紫對革蘭氏陰性桿菌沒有抑制作用而對革蘭氏陽性桿菌有較強的抑制作用。相比于其他培養(yǎng)基，VRBA要進行兩次傾注，主要有2個作用：①培養(yǎng)基的二次覆蓋可以在培養(yǎng)皿中形成厭氧微環(huán)境，抑制其他需氧菌的生長，而不會抑制大腸菌群的生長;②有效抑制菌落的蔓延生長，便于計數(shù)。

MPN計數(shù)法也稱為最大可能數(shù)法，是基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法，是統(tǒng)計學和微生物學結(jié)合的一種定量檢測法，準確性不如VRBA平板計數(shù)法[3-4]。

VRBA平板計數(shù)法適用于大腸菌群含量較高的食品中大腸桿菌的計數(shù)，操作簡單，靈敏度高，能夠直接計數(shù)，結(jié)果準確性高。MPN計數(shù)法適用于大腸菌群含量較低的食品中大腸菌群的計數(shù)，是基于統(tǒng)計學概率論的間接的計數(shù)方法，在靈敏度和準確性上不如VRBA平板計數(shù)法。在此次質(zhì)控樣品的檢測中，VRBA平板計數(shù)法和LST多管發(fā)酵法的檢測結(jié)果|z|值均≤2，均取得滿意的結(jié)果。VRBA平板計數(shù)法的結(jié)果|z|值比LST多管發(fā)酵法（MPN法）的結(jié)果|z|值更小，檢測結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，且檢測結(jié)果具有顯著性差異，說明VRBA平板計數(shù)法的靈敏度和準確性更高。

移液管和移液槍是實驗室常用的加樣器具。GB/T 4789.3—2003中規(guī)定加樣器具只能夠使用無菌移液管，而在GB 4789.3—2016中明確規(guī)定加樣器具除了可以使用無菌移液管之外，還可以使用移液槍。此次質(zhì)控樣品的檢測對移液管和移液槍做了比對，檢測結(jié)果顯示使用移液管進行檢測的|z|值比使用移液槍進行檢測的|z|值更小，檢測結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，且檢測結(jié)果具有顯著性差異，說明使用移液管進行檢測的準確性更高。

參考文獻

[1]呂嘉櫪.食品微生物學[M].北京：化學工業(yè)出版社，2007：34-35.

[2]何國慶，賈英民，丁立孝.食品微生物學[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2009：1.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定：GB/T 4789.3—2003[S].北京：中國標準出版社，2003.

[4]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù)：GB 4789.3—2016[S].北京：中國標準出版社，2017.

[5]何計國，甄潤英.食品衛(wèi)生學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2003.

[6]鄧寧妍，周姬，蔣衛(wèi)東.乳粉中大腸菌群測定能力驗證的結(jié)果與分析[J].現(xiàn)代食品，2019（14）：120-122.

基金項目：貴州省科學技術(shù)基金——黔科合字[2013]2059號;貴州省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科研項目2017kj004號。

作者簡介：陳梅（1987—），女，布依族，貴州貴陽人，本科，助工。研究方向：食品微生物檢測。

通信作者：羅紹楠（1987—），男，布依族，貴州獨山人，碩士，工程師。研究方向：食品微生物檢測。E-mail ：673079947@qq.com。