海風藤飲片質量分析

刁興彬，王海燕，柴發(fā)永，李 強，陳俊亮

（1. 山東省食品藥品審評查驗中心，山東 濟南 250014；2. 泰安市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 泰安271000；3. 山東明仁福瑞達制藥股份有限公司，山東 濟南 250104）

海風藤為少常用中藥，有祛風濕、通經絡的功能，用于治療風寒濕痹、關節(jié)疼痛、筋脈拘攣、跌打損傷[1]。《中國藥典》2020年版規(guī)定海風藤為胡椒科植物風藤Piper kadsura(Choisy) Ohwi的干燥藤莖。夏、秋二季采割，除去根、葉，曬干[2]。風藤主要分布于浙江、福建、廣東等省[3]。近期通過走訪多個藥材市場以及飲片使用單位，并收集樣品49份，發(fā)現(xiàn)海風藤飲片質量存在一定問題。采用按法定標準檢驗與探索性研究結合的方法，對收集到的49批海風藤質量進行評價，并對發(fā)現(xiàn)的問題提出建議，為進一步加強對海風藤的質量管理提供依據(jù)。

1 按法定標準檢驗總體情況

1.1 樣品情況

海風藤是我省2020年重點抽檢品種，共收集到樣品49批次，其中從醫(yī)療機構收集樣品29批，占全部樣品批次的59.2 %；從批發(fā)零售單位收集樣品20批，占全部樣品批次的40.8 %。樣品來自全國36家生產企業(yè)，主要集中于安徽、河北、山東、湖北等省市。

1.2 檢驗項目與依據(jù)

海風藤現(xiàn)行標準為國家藥品標準，收載于《中國藥典》2020年版一部。檢驗項目有性狀、鑒別（顯微鑒別、薄層鑒別）、檢查（水分、總灰分、酸不溶性灰分）、浸出物。

1.3 按法定標準檢驗情況

對收集到的49批樣品，按法定標準進行檢驗，結果發(fā)現(xiàn)39批次符合規(guī)定，合格率為79.6 %，10批次不符合規(guī)定，不合格率為20.4 %，不合格項目為性狀，主要是摻入大量非藥用部位（主要為葉）。

1.3.1 性狀 按藥典標準，對海風藤樣品的性狀進行檢驗。經檢驗，39批海風藤飲片性狀符合規(guī)定，合格率79.6 %，10批海風藤飲片性狀不符合規(guī)定，不合格率20.4 %。

圖1 海風藤合格樣品

圖2 海風藤不合格樣品

結果分析：海風藤標準規(guī)定為干燥藤莖，在檢驗過程中，發(fā)現(xiàn)16批次摻入了部分非藥用部位（葉），其中10批次海風藤摻入大量非藥用部位葉。具體原因：其一估計是藥農在采收時，不小心將藤莖上附著的葉子帶入；另一原因估計是藥農為了增加樣品重量，故意將葉加入。

1.3.2 顯微鑒別 取本品粉末，置顯微鏡下觀察，對收集到的49批海風藤，對抽驗到的49批海風藤樣品進行顯微鑒別檢驗，結果全部符合規(guī)定。

結果分析：粉末鑒別，是中藥飲片鑒別的重要手段。海風藤樣品的粉末顯微特征較為明顯，石細胞、砂晶、木纖維、皮層纖維較為常見，特征明顯。但粉末鑒別也有其局限性，即在區(qū)分同科同屬的藥材飲片時，區(qū)分難度較大。

1.3.3 薄層色譜鑒別 按藥典標準，對抽驗到的49批海風藤樣品進行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與海風藤對照藥材色譜相應的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點。結果符合規(guī)定。

方法局限性：藥典標準薄層色譜鑒別，在供試品溶液的制備中需過硅膠G柱，薄層色譜用硅膠G的目數(shù)一般在1000目左右，用量為15 g，裝于內徑為1.5～2 cm的層析柱，不易洗脫，操作性較差。

1.3.4 水分檢查 海風藤藥典標準規(guī)定：“水分含量不得過12.0 %”。所抽取49批樣品，所測數(shù)值均低于限度12.0 %，均符合規(guī)定，見圖3。由圖3可見，水分含量集中在6.0 %～10.0 %范圍內，估計與抽樣時季節(jié)相對濕度較大有關系，藥材飲片的水分與儲運環(huán)節(jié)有較大關系，必要時需進行相應降溫除濕措施，以保證檢驗數(shù)據(jù)真實性、準確性。

圖3 水分含量頻數(shù)分布圖

1.3.5 灰分檢查 海風藤藥典標準規(guī)定：“總灰分：不得過10.0 %；酸不溶性灰分：不得過2.0 %”。本次專項抽驗對49批海風藤進行了總灰分、酸不溶性灰分檢查，結果全部符合規(guī)定，合格率100 %，見圖4、圖5。由圖4可見，所抽取的49批樣品，有17批總灰分在9.0 %以上，接近限度10.0 %；由圖5可見，有6批酸不溶性灰分在1.7 %～2.0 %之間，接近限度2.0 %，估計與采收過程有關，因風藤原植物有部分匍匐枝，易引入泥沙。

圖4 總灰分頻數(shù)分布圖

圖5 酸不溶性灰分頻數(shù)分布圖

1.3.6 浸出物 按《中國藥典》2020年版四部通則2201浸出物測定法，以熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑，測定抽取的49批海風藤的浸出物，結果全部符合規(guī)定，合格率100 %，見圖6。由圖6可見，所抽取的49批樣品，浸出物測定值均高于10.0 %，多集中在12.0 %～18.0 %范圍區(qū)間。另有6批數(shù)值略高于含量限度10.0 %，估計與海風藤的儲存有關。海風藤屬胡椒科植物干燥藤莖，飲片含部分揮發(fā)油成分，儲存時間過長，夏季儲存溫度過高，均會導致海風藤浸出物下降。

圖6 浸出物頻數(shù)分布圖

1.4 標準評價

海風藤現(xiàn)行質量標準為《中國藥典》2020年版一部。按藥典標準檢驗，從檢驗結果及分析來看，現(xiàn)行標準雖可起到一定的質量控制作用，但仍存在一些問題。

（1）中國藥典規(guī)定的海風藤原植物，只有風藤Piper kadsura(Choisy) Ohwi一種，但通過文獻查閱，記載海風藤的原植物多達9科19種植物。經市場調研，市場上銷售的并非只有風藤一種，而是有胡椒科多種植物、松蘿類、異形南五味子類等多種地方習用品混淆存在，市場上抽驗不合格率較高。按藥典標準，可將藥典用海風藤與松羅類和異形南五味子類混淆品加以區(qū)分，但是很難將同科屬植物山蒟加以區(qū)分。

（2）粉末顯微鑒別，對于鑒別不同科屬植物來源的飲片具有很好的定性鑒別作用，但對于同科屬植物來源的飲片比較難以區(qū)分。海風藤雖已經炮制切厚片，但做橫切片進行橫切面顯微鑒別仍可較易制備，考慮部分品種粉末顯微鑒別定性鑒別效果不好，且炮制后橫切片較易制備，藥典中宜加入橫切面顯微鑒別。

（3）薄層色譜鑒別方法可操作性較差，洗脫過程難度較大，可對鑒別方法進一步優(yōu)化。

2 探索性研究總體情況

2.1 研究項目及目的

根據(jù)海風藤法定標準檢驗及藥材市場調研中發(fā)現(xiàn)的問題，緊緊圍繞飲片安全性、可控性，開展了以下兩個方面的探索性研究：（1）橫切面顯微鑒別。針對現(xiàn)行標準中無法將海風藤與同科屬植物山蒟區(qū)分的情況，加入橫切面顯微鑒別； （2）薄層色譜鑒別方法優(yōu)化?，F(xiàn)行標準中薄層色譜鑒別方法復雜，洗脫過程不易控制，重現(xiàn)性不好，需進行方法優(yōu)化。

2.2 探索性研究分項檢驗

2.2.1 橫切面顯微鑒別 據(jù)文獻資料記載及對市場調研發(fā)現(xiàn)，目前全國商品海風藤主要為來源于非藥典品山蒟的藤莖，藥典品風藤資源較少，商品來源較少。且按現(xiàn)有藥典標準，也無法將二者加以區(qū)分。擴展性研究中加入了對飲片橫切面的鑒別研究。

測定方法：取本品橫切面，置顯微鏡下觀察：表皮細胞略成方形，外壁角質層略厚。非腺毛1～2個細胞，長40～80 μm。皮層中棕色分泌細胞散在，維管束18～33個排列成環(huán)，韌皮束外側有纖維束及厚壁細胞群排成半月形，石細胞單個或數(shù)個散在于兩側，木質部由導管、管胞、木纖維和木薄壁細胞組成。髓內維管束6～13個排成一環(huán)，維管束內外兩側有纖維束，髓內有分泌細胞散在，中心有1黏液道。

測定結果與分析：取49批樣品進行檢驗，發(fā)現(xiàn)5批基本符合上述橫切面鑒別特征，并初步判定為風藤植物來源的海風藤（藥典品），44批符合山蒟的橫切面鑒別特征，并初步判定為山蒟植物來源的海風藤（習用品，浙海風藤）。合格率為10.2 %，不合格率為89.8 %。樣品橫切面見圖7、圖8，橫切面區(qū)別點見表1。

表1 風藤與山蒟藤莖橫切面區(qū)別

圖7 橫切面顯微鑒別（風藤藤莖）

圖8 橫切面顯微鑒別（山蒟藤莖）

綜上，橫切面顯微鑒別可較為有效地對海風藤進行鑒定。

2.2.2 薄層色譜鑒別 《中國藥典》2020年版一部海風藤薄層色譜鑒別項下供試品溶液制備方法為：“取本品粉末2 g，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 ml使溶解，加入硅膠G 3 g，混勻，置水浴上揮干溶劑，加于硅膠G柱（15 g，內徑為1.5～2 cm）上，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液100 ml洗脫，收集洗脫液”，供試液在過硅膠G柱時，洗脫過程難以進行，可操作性差，因此優(yōu)化為：取本品粉末2 g，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試品溶液。并將藥典標準中展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇（7:1:0.5）優(yōu)化為石油醚（60～90 ℃）-丙酮（3:1），操作簡便，分離效果好。取6批樣品（樣品A為藥典品風藤藤莖，樣品B、C、D為山蒟藤莖，樣品E、F為山蒟莖葉）進行試驗，結果見圖9。結果顯示，對供試品溶液制備方法及展開劑進行適當優(yōu)化，可得到較好分離效果。

圖9 海風藤薄層色譜鑒別結果

綜上，經優(yōu)化后的薄層色譜鑒別方法，操作簡單，斑點清晰，分離效果較好。

2.2.3 對習用品山蒟納入新版藥典的思考與建議 通過查閱《中藥志》、《常用中藥材品種整理與質量研究》，并通過市場調查及專家咨詢，藥典品海風藤（風藤）植物資源分布狹窄，僅在福建、海南等地零星分布，植物資源極度匱乏，市場上存在的商品量極少。山蒟分布廣，資源量多，對市場上銷用海風藤鑒定結果顯示，全國大多數(shù)省區(qū)應用最廣、流通量最大的海風藤，原植物為山蒟的藤莖。綜合研究結果表明，中藥海風藤以來源于植物風藤及山蒟的藤莖質量最好，近年研究表明，風藤和山蒟均含抗血小板聚集作用強的海風藤酮、山蒟素等，且有研究表明風藤和山蒟在化學成分和藥理作用方面相近。鑒于近年風藤資源很少，商品海風藤的主要來源為山蒟，建議在進一步研究的基礎上，將山蒟增列為海風藤的植物來源納入新版藥典標準。

3 結論

海風藤的現(xiàn)行質量標準為《中國藥典》2020年版一部，檢驗項目包括：性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分檢查、總灰分檢查、酸不溶性灰分檢查、浸出物含量測定。通過檢驗發(fā)現(xiàn)，海風藤的現(xiàn)行質量標準簡單，不能有效控制藥材質量，建議進一步提高海風藤飲片質量標準。另鑒于近年風藤資源匱乏，風藤與山蒟化學成分與藥理作用相近，考慮能否將山蒟增列為海風藤的植物來源納入新版藥典標準。

本次抽驗的海風藤樣品，按現(xiàn)行標準檢驗，合格率為79.6 %，不合格率為20.4 %；按探索性研究方法檢驗，合格率僅為10.2 %，不合格率為89.8 %，風險相對較高。海風藤作為常用中藥品種，總體質量狀況一般，存在一定風險性。